WWW.KONFERENCIYA.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Конференции, лекции

 


Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 8 |

«Том II Ульяновск - 2013 Материалы международной научно-практической конференции Бактериофаги: Теоретические и практические аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой ...»

-- [ Страница 1 ] --

Материалы международной

научно-практической конференции

«Бактериофаги:

Теоретические и практические аспекты

применения в медицине, ветеринарии

и пищевой промышленности»

Том II

Ульяновск - 2013

Материалы международной научно-практической конференции «Бактериофаги: Теоретические и практические аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой промышленности» / - Ульяновск: УГСХА им. П.А. Столыпина, 2013, т. II - 186 с.

ISBN 978-5-905970-14-6 Редакционная коллегия:

д.б.н., профессор Д.А. Васильев д.б.н., профессор С.Н. Золотухин д.б.н., А.В. Алешкин Технический редактор Д.Н. Хлынов Авторы опубликованных статей несут ответственность за достоверность и точность приведенных фактов, цитат, экономико-статистических данных, собственных имен, географических названий и прочих сведений, а также за разглашение данных, не подлежащих открытой публикации.

Отпечатано в типографии «Ульяновской ГСХА им. П.А.Столыпина»

432063, г.Ульяновск, бульвар Новый Венец, 1.

© ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина», Бактериофаги в медицине и ветеринарии Бактериофаги в медицине и ветеринарии УДК 619:616-

ВЫДЕЛЕНИЕ БАКТЕРИОФАГОВ AEROMONAS SALMONICIDA

Горшков И.Г., научный сотрудник, i.o.gun@mail.ru Куклина Н.Г., научный сотрудник, ul_nk@mail.ru Викторов Д.А., кандидат биологических наук

, старший научный сотрудник, тел. 9084775573, viktorov_da@mail.ru Насибуллин И.Р., соискатель, тел. 9053484611, nir72@mail.ru Васильев Д.А., доктор биологических наук, профессор тел. 8(8422) 55-95-47, dav_ul@mail.ru Золотухин С.Н., доктор биологических наук, профессор тел. 9272703480, fvm.zol@yandex.ru ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А.Столыпина»

Ключевые слова: Aeromonas, аэромонозы рыб, бактериофаги, выделение, фаготерапия, фагоиндикация.

В результате проведённых исследований было выделено 4 изолята бактериофагов, активных в отношении Aer. олученные бактериофаги перспективно использовать для фаготерапии, а также для постановки реакции нарастания титра фага, что позволит проводить диагностику аэромонозов рыб за сроки до 24 часов.

Актуальность исследования.

Необходимость разработки быстрого и точного метода диагностики аэромонозов рыб, обусловленных Aer, в последнее время приобретает всё большую актуальность, на что указывают данные многих авторов [1]. В этой связи группой авторов предлагается применение метода реакции нарастания титра фага для индикации патогенных аэромонад в пищевой рыбной продукции, прудовой воде и патологическом материале, полученном от больной рыбы. Метод РНФ имеет ряд существенных преимуществ [2,3,7], однако для его проведения необходимо иметь в распоряжении индикаторные бактериофаги, обладающие определёнными свойствами (строгой специфичностью, широким спектром литической активности, максимальной урожайностью и подходящей морфологией негативных колоний).

Целью исследований являлось выделение и отбор наиболее активных культур бактериофагов бактерии Aer для дальнейшей разработки на их основе диагностического биопрепарата.

Ход исследования.

Для выделения фагов бактерии Aer исследовано более 20 проб сточной и речной воды.

Исследуемую воду в количестве 50 мл заливали в колбы со 100 мл стерильного концентрированного мясопептонного бульона. Концентрированный мясопептонный бульон готовили Бактериофаги в медицине и ветеринарии с таким расчётом, чтобы после смешивания с исследуемой водой получить обычную по составу среду [7]. В те же колбы добавляли по 3 мл 24-часовых индикаторных культур различных выделенных нами ранее из патологического материала рыб «полевых» штаммов Aer. После 48-часового культивирования в термостате при 25 С полученную взвесь в количестве 5 мл перемещали в стерильные пробирки и центрифугировали 20 минут при 700 g.

Наличие бактериофагов в надосадочной жидкости устанавливали с помощью спот-теста. Для этого на чашки Петри с мясопептонным агаром, подсушенным в течение суток, проводили посев 24-часовой индикаторной культуры сплошным газоном. После подсыхания газона на его поверхность наносили каплю исследуемой надосадочной жидкости [7]. Одновременно с этим для проверки на отсутствие жизнеспособных бактериальных клеток в надосадочной жидкости, делали посев фаголизата на мясопептонный агар. Чашки ставили в термостат при 25 С.

Посевы периодически просматривали через 18, 24 и 36 ч. Наличие лизиса бактериального газона в виде полосы чистого агара или отдельных негативных колоний по ходу стекания капли указывает на наличие в исследуемом материале соответствующего бактериофага.

Результаты исследования и выводы.

Таким образом, нами были получены 4 штамма бактериофагов, вызывающих стойкий лизис индикаторных бактериальных штаммов Aer. Дальнейшие исследования направлены на изучение биологических свойств и селекцию полученных бактериофагов с целью последующей разработки на их основе диагностических тест-систем для проведения реакции нарастания титра фага.

1. Блинов А.И., Глушанова Н.А. // Аэромонады: выделение, идентификация и дифференциация, учебно-методические рекомендации, Новокузнецк, 2. Викторов Д.А. Усовершенствование методов выделения, идентификации и индикации бактерий Peu put // Автореф. дис. … канд. биол. наук. – 2011. – 22 с.

3. Гольдфарб Д.М. Бактериофагия. М., Государственное издательство медицинской литературы медгиз, 4. Инструкция о мероприятиях по борьбе с аэромонозом карповых рыб, 1998 г.



5. Инструкция по борьбе с фурункулезом лососевых рыб, 1997 г., 6. Методические указания по санитарно - бактериологической оценке рыбохозяйственных водоемов. Указание министерство Здравоохранения РФ. 27 сентября 1999г. № 13-4-2/1742.

7. Ревенко И.П. Бактериофаги и их использование в ветеринарной практике. К., «Урожай», 1978.

PROSPECTS OF APPLICATION OF BACTERIOPHAGES

FOR THE DISPLAY OF THE PATHOGENIC AEROMONADS

Gorshkov I.G., Кuklina N.G., Viktorov D.А., Nasibullin I.R., Vasilev D.А., Zolotukhin S.N.

Keywords: Aer, er fih bterphge eet phgtherpy, fgkty.

Phge bte prpetvey ue fr phge therpy, fr the y f the phge tter re, whh w ge er fih fr up t 24 hur.

УДК 619:616-

ПЕРСПЕКТИВЫ ПРИМЕНЕНИЯ БАКТЕРИОФАГОВ

ДЛЯ ИНДИКАЦИИ ПАТОГЕННЫХ БАКТЕРИЙ РОДА AEROMONAS

Горшков И.Г., научный сотрудник, i.o.gun@mail.ru Куклина Н.Г., научный сотрудник, Викторов Д.А., кандидат биологических наук, тел. 9084775573, viktorov_da@mail.ru Насибуллин И.Р., соискатель, Васильев Д.А., доктор биологических наук, профессор тел. 8(8422) 55-95-47, dav_ul@mail.ru Золотухин С.Н., доктор биологических наук, профессор тел. 9272703480, fvm.zol@yandex.ru ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А.Столыпина»

Ключевые слова: Бактериофаги, аэромонозы рыб, биотехнология, микробиолгия, диагностика.

В работе рассмотрен обзор современных литературных данных по тематике аэромонозов рыб, применяемые в настоящее время методы лечения рыб и профилактики аэромонозов, а также обоснованию применения в качестве средства диагностики и лечения биопрепаратов на основе бактериофагов.

Аэромонозы рыб – это опасное заболевание, нередко встречающееся на рыбоводческих хозяйствах. Аэромоноз протекает молниеносно, остро, подостро и хронически. Рыбы становятся вялыми, держатся у поверхности воды вдоль берега, корм не принимают. Кожный покров иногда приобретает темную окраску. Острое течение проявляется септицемией и расстройством пищеварения, сопровождающимся выделением экскрементов с примесью крови.

На кожных покровах и жабрах, а также у основания грудных плавников появляются пятнистые кровоизлияния. В таком состоянии больные рыбы или погибают (в течение 1-3 дней), или заболевание принимает подострое течение. При подостром течении на воспаленных участках кожи образуются фурункулы, глубоко проникающие в мышечный слой, мягкие на ощупь.

При вскрытии фурункулов во внешнюю среду изливается экссудат, а на их месте образуются красноватые язвы. У больных рыб отмечается бледность жабр и пучеглазие. Подострое течение продолжается 3-7 дней, вызывая значительную гибель рыб. При хроническом течении на теле рыб появляются обширные участки сапролегниоза, чаще расположенные на пораженных участках кожи и прилегающих зонах. Кроме того, отмечают потерю чешуи, разрушение плавников, темную окраску тела, общее истощение рыб. У некоторых особей на поверхности тела и головы заметны заживающие язвы, рубцы, иногда абсцессы, после вскрытия которых обнажается мускулатура и выделение кровянистой жидкости. Из ануса выделяется кровянистогнойный экссудат. Жабры бледные с чередованием мраморных участков. Эта стадия болезни протекает умеренно и продолжается до нескольких недель и даже месяцев. У переболевших рыб-микробоносителей нет никаких клинических признаков, так как инфекция принимает латентное течение. Обнаружение в водоеме рыб с зарубцевавшимися поражениями, без плавников служит подтверждением перенесенного аэромоноза [1]. В этом случае переболевшая рыба теряет вес и товарные качества. Всё это наносит колоссальный экономический ущерб рыбоводческим хозяйствам.

Возбудителями аэромоноза рыб является целый ряд патогенных штаммов бактерий Бактериофаги в медицине и ветеринарии рода Aer. У рыб чаще встречаются виды: Aer hyrph, Aer, Aer br, Aer ve, Aer hubert, Aer eureph, Aer e, Aer ver. Такое обилие видов бактерий, способных вызывать аэромонозы рыб, обуславливает существенные трудности при назначении правильного лечения.

Современные доступные для рыбоводческих хозяйств методы диагностики далеко не совершенны. Диагноз на аэромоноз ставят на основании эпизоотических данных, клинических признаков, патологоанатомических изменений, результатов бактериологического исследования и положительной биопробы. Типирование до вида при этом в основном не производится, так как существующие методы бактериологической диагностики требуют значительных затрат времени и материалов, а современные методики, такие как полимеразная цепная реакция или иммуно-ферментный анализ, требуют дорогостоящего оборудования, материалов и высококвалифицированных специалистов, что зачастую недоступно для рыбоводческих хозяйств [6].

Поскольку существующие методы диагностики не предусматривают типирование возбудителей аэромонозов до вида, лечение заболевания заключается в применении антибиотиков широкого спектра, высокомолекулярных соединений, содержащих йод, а также формалина. [4,5] Как известно, такие препараты пагубно влияют на рост и развитие сразу нескольких видов и даже родов бактерий. В результате их применения погибают не только патогенные бактерии, вызывающие заболевание, но и естественная сапрофитная микрофлора, играющая существенную роль в функционировании биоценозов, круговороте азота и других веществ, разложении органических остатков. Кроме того, антибиотики «заодно» убивают и полезную микрофлору желудочно-кишечного тракта, вызывая дисбактериоз кишечника, токсическое поражение печени, почек и других органов, проявляются нарушения иммунитета. В результате организм поражает секундарная (то есть вторичная) инфекция. При длительном применении антибиотиков бактерии адаптируются к их действию, что вызывает появление мутантных антибиотикоустойчивых форм микробов. Всё это указывает на несостоятельность современных методов диагностики и лечения аэромонозов рыб.





Применение биопрепаратов на основе бактериофагов для диагностики, лечения и профилактики основано на использовании гомологичных бактериофагов бактерий рода AerПрименение данного биопрепарата в целях диагностики, лечения и профилактики аэромоноза рыб имеет ряд преимуществ перед существующими методиками:

- типирование возбудителя осуществляется до вида, - время постановки диагноза сокращается до 18 часов, - не требуется наличие дорогостоящего оборудования и материалов, - не требуется высококвалифицированного труда специалистов, - биопрепарат для лечения активен только в отношении конкретного вида возбудителя, - применение биопрепарата для лечения не вызывает нежелательных последствий (таких как ухудшение иммунитета животного, дисбактериоз, адаптация бактерий к антибиотикам и появление мутантных антибиотикоустойчивых форм бактерий) [2].

Таким образом, в целях диагностики, лечения и профилактики аэромонозов рыб, наиболее приемлемыми являются методы, основанные на использовании бактериофагов. В настоящее время коллективом авторов проводятся работы по выделению, изучению биологических свойств и селекции бактериофагов, активных в отношении бактерий рода Aer, в частности Aer, Aer br, Aer ver, Aer vee, Aer hyrph для дальнейшей разработки на их основе диагностических и лечебно-профилактических биопрепаратов.

1. Блинов А.И., Глушанова Н.А. // Аэромонады: выделение, идентификация и дифференциация, учебно-методические рекомендации, Новокузнецк, 1997.

2. Васильев, Д.А. Выделение бактериофагов бактерий Peu put и их селекция в целях создания биопрепарата для диагностики псевдомоноза рыб / Д.А. Васильев, Д.А.

Викторов, И.И. Богданов // Естественные и технические науки. – 2011. – №2(52). – С. 79-82.

3. Гольдфарб Д.М. Бактериофагия. М., Государственное издательство медицинской литературы медгиз, 1961.

4. Инструкция о мероприятиях по борьбе с аэромонозом карповых рыб, 1998 г.

5. Инструкция по борьбе с фурункулезом лососевых рыб, 1997 г., 6. Методические указания по санитарно - бактериологической оценке рыбохозяйственных водоемов. Указание министерство Здравоохранения РФ. 27 сентября 1999г. № 13-4-2/1742.

7. Ревенко И.П. Бактериофаги и их использование в ветеринарной практике. К., «Урожай», 1978.

PROSPECTS OF APPLICATION OF BACTERIOPHAGES

FOR THE DISPLAY OF THE PATHOGENIC AEROMONADS

Gorshkov I.G., Кuklina N.G., Viktorov D.А., Nasibullin I.R., Vasilev D.А., Zolotukhin S.N.

Keywords: Bterphge er fih, btehgy, krbgy, gt.

I wrk there the revew f the er terture the ubjet f fetu te f fih, the urrety ppe eth f tretet f fih prevet f fetu te, we the ubttt f the ppt e f gt tretet f bg preprt the b f bterphge.

УДК 619:

ОПТИМИЗАЦИЯ СХЕМЫ ВЫДЕЛЕНИЯ БАКТЕРИОФАГОВ

PSEUDOMONAS CHLORORAPHIS

Гринева Т.А., соискатель,тел. 9033201410, e-mail: tag78@mail.ru Викторов Д.А., кандидат биологических наук, старший научный сотрудник, тел. 9084775573, viktorov_da@mail.ru Васильев Д.А., доктор биологических наук, профессор Тел. 8(8422) 55-95-47, dav_ul@mail.ru ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А.Столыпина»

Ключевые слова: псевдомонады, Peu hrrph, псевдомонозы рыб, бактериофаги, схема выделения.

В результате проведённых исследований была оптимизирована схема выделения бактериофагов Peu hrrph. С использованием разработанной методики из водных объектов выделено 2 изолята бактериофагов, активных в отношении названого вида бактеБактериофаги в медицине и ветеринарии рий.

Интенсивный рост аквакультуры обуславливает повышенный интерес к бактериальным заболеваниям пресноводных рыб.

Патогенные штаммы флюоресцирующих видов бактерий рода псевдомонад (Peuput, Peu ypreptu, Peu uree, Peu urefuree, e, Peu hrrph, Peu erb, Peu tet) способны вызывать псевдомонозы карповых рыб [2].

P. сhrrph является нормальным обитателем дистальных отделов кишечника рыб, но способна вызывать заболевания, когда концентрация бактерий в водоемах превышает естественный фон. В тоже время, бактерии P. сhrrph могут быть использованы в качестве потенциальных пробиотиков в борьбе с бактериальными заболеваниями пресноводных рыб [3].

Бактериологические методы диагностики, используемые в настоящее время, являются трудоемкими и продолжительными.

Нами оптимизирована схема получения бактериофагов P. сhrrph для их дальнейшей селекции и разработки тест-систем для видового типирования P. сhrrph.

Цель исследования: оптимизация схемы выделения бактериофагов P. сhrrph из объектов окружающей среды.

Для выделения бактериофагов P. сhrrph исследовано 18 проб из водных источников Ульяновской области. Индикаторными культурами служили 5 полевых штаммов, выделенных ранее из сточных вод, образцов почвы и прудовой воды. Исследование проводили по схеме, предложенной Викторовым Д.А., для выделения фагов [1]. Температурный режим и продолжительность культивирования были модифицированы с учетом биологических особенностей объекта исследования.

В колбы с 50 мл концентрированного мясопептонного бульона добавляли исследуемую воду в количестве 50 мл, таким образом доводя концентрацию среды до обычной, и по мл 18-часовой бульонной индикаторной культуры. После 48 часов культивирования при 28 С полученную взвесь в количестве 5 мл переносили в стерильные пробирки и центрифугировали 20 минут при 3000 об/мин. Супернатант фильтровали через бактериальные фильтры с диаметром пор 0,2 мкм. Наличие бактериофагов в фильтрате определяли с помощью спот-теста.

На чашки Петри с мясопептонным агаром проводили посев 18-часовой бульонной культуры индикаторных штаммов сплошным газоном. После подсыхания газона на поверхность агара наносили 1 каплю исследуемого фильтрата. Контроль бактериального загрязнения фильтрата проводили на чашках Петри со стерильным мясопептонным агаром. Посевы просматривали через 24, 36, 48 часов. Присутствие в исследуемом материале бактериофагов определяли по наличию зон лизиса бактериального газона или отдельных негативных колоний.

В результате исследования были выделены 2 культуры бактериофагов P. сhrrph.

В дальнейшем они были протестированы на референс-штамме P. сhrrph В-1246, полученном во Всероссийской коллекции микроорганизмов (г. Пущино). Результаты тестирования положительные.

Вывод: Таким образом, нами были выделены 2 культуры бактериофагов бактерии P.

сhrrph.

1. Викторов, Д.А. Выделение и изучение биологических свойств бактериофагов Peuuree / Д.А. Викторов, А.М. Артамонов, Д.А. Васильев // Ветеринария и кормлеБактериофаги в медицине и ветеринарии ние. – Москва: «ВЕТКОРМ», 2012. – №5. – С. 8-9.

2. Методические указания по лабораторной диагностике псевдомонозов рыб, Минсельхозпрод России, Департамент ветеринарии, 1998.

3. Goldschmidt-Clermont, E., Wahli, T., Frey, J. & Burr, S. E. (2008).Identification of bacteria from the normal flora of perch, Per uvt L., and evaluation of their inhibitory potential towards Aer species. J Fh D 31, 353–359.

OPTIMIZATION OF THE SCHEME OF ALLOCATION

OF BACTERIOPHAGES PSEUDOMONAS CHLORORAPHIS

Grineva Т.А., Viktorov D.А., Vasilev D.А.

Key words: Peu, Peu hrrph, peu fih, bterphge, the rut eet.

hrrph h bee ptze. Ug the evepe ethgy, 2 te f bterphge tve repet f the bve type f bter were te fr wter bjet.

УДК 619:616.98:579.

ВЛИЯНИЕ БАКТЕРИОФАГОВ НА МИКРОФЛОРУ ТОЛСТОЙ КИШКИ

Затевалов А.М., кандидат химических наук, 4520896@mail.ru Киселева И.А., (495)452-18-16, irina6804@mail.ru Копанев Ю.А., кандидат медицинских наук, info@gabrich.com Алешкин А.В., доктор биологических наук, ava@gabri.ru Афанасьев С.С., доктор медицинских наук, профессор, ФБУН «МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского» Роспотребнадзора Ключевые слова: функциональная активность микрофлоры кишечника, летучие жирные кислоты, фагочувствительность и фагорезистентность, препараты бактериофагов.

Выявление критериев оценки и эффективности применения бактериофагов для коррекции и нормализации кишечного микробиоценоза остается важной задачей, которая может быть решена с помощью сравнения параметров функциональной активности и фенотипических свойств микрофлоры кишечника, а так же путем определения избирательности действия препаратов бактериофагов на нормальную и условно-патогенную микрофлору кишечника vtr и vv.

Введение. В микробном сообществе нормальной микрофлоры человека эволюционно сформировались межклеточные сети, которые представляют собой систему трофических и энергетических взаимосвязей внутри кишечного микробиоценоза[1].

Представление о микробиоте кишечника, как об отдельном органе человеческого орБактериофаги в медицине и ветеринарии ганизма не противоречит исторически сложившемуся определению органа, как части организма, представляющей собой эволюционно сложившийся комплекс тканей, объединенный общей функцией, структурной организацией и развитием [2].

Методы клинической биохимии – определение концентраций ЛЖК газо-жидкостной хроматографией дают важные критерии функциональной активности микробиоты кишечника, а именно концентрацию масляной кислоты, соотношение уксусной, пропионовой и масляной кислот, суммарную концентрацию ЛЖК, структурный индекс и индекс изокислот. На основании этих критериев можно сделать вывод о типе и степени нарушения функциональной активности микробиоценоза кишечника [3].

Не теряет своей актуальности микробиологический анализ кала, несмотря на небольшой процент высеваемости представителей нормобиоценоза и непропорциональное соотношение микроорганизмов в кишечнике и в кале. Такие свойства микроорганизмов, как чувствительность к антибиотикам, чувствительность к бактериофагам коррелируют с некоторыми показателями функциональной активности микрофлоры кишечника и могут характеризовать состояние микробиоценоза кишечника[3].

Материалы и методы исследований. Исследование корреляции средней антибиотико- (САЧ) и фагочувствительности (СФЧ) выделенной микрофлоры со структурным индексом (СИ), индексом изокислот (ИИ), а так же других показателей ЛЖК [3], проведенное на пациентов консультативно-диагностического центра МНИИЭМ Габричевского, проводилось по результатам комплексного анализа микрофлоры кишечника, включающего биохимический, копрологический, и микробиологический анализ кала.

Влияние интести-бактериофага (производство ФГУП «НПО Микроген») in vivo на уровень бифидобактерий и лактобацилл в толстой кишке у 30-ти пациентов проводилось путем сравнения содержания этих бактерий до и спустя неделю после курсового приема препарата. Нормофлору определяли с помощью микробиологического исследования кала, используя жидкие селективные агаризованные среды MRS и Блаурокк.

Также проводили исследования влияния интести-бактериофага на нормальную микрофлору, полученную от 63 пациентов КДЦ ФБУН «МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского», in vitro.

Сравнивали титры бифидобактерий и лактобацилл, исходно содержавшиеся в кале пациентов, с их количеством, определяемым на тех же средах при добавлении бактериофага.

Влияние интести-бактериофага на нормальную E.coli и условно-патогенную микрофлору (гемолизирующую E.coli и S.aureus) определялось spot-тестом, заключающимся в оценПротеолитический индекс Структурный индекс Средняя чувствительность к антибиотикам, отн. ед. (0 - 4) Рис. 1 - Зависимость структурного индекса а) и индекса изокислот б) от средней антибиотикочувсвительности на большой выборке пациентов КДЦ МНИИЭМ им. Г.Н.

Габричевского.

ке зоны лизиса на газоне исследуемых культур, посеянных на плотных селективных агаризованных средах, после нанесения на него капли интести-бактериофага.

Результаты исследований и их обсуждение. В ходе проведения 3000 комплексных исследований микрофлоры кишечника получена корреляция СИ и ИИ с САЧ. Результаты представлены на рисунке 1.

Известно, что продуцентами уксусной кислоты могут быть как аэробная, так и анаэробная микрофлора. Продуценты пропионовой, масляной и далее по гомологическом ряду кислот являются анаэробные бактерии. Снижение СИ – доли анаэробных кислот указывает на сокращение численности анаэробных бактерий, снижению толщины защитной биопленки и о большей уязвимости стенок кишечника.

Известно, что при взаимоотношениях макроорганизма и микробиоты, макроорганизм управляет своей микробиотой, используя разные механизмы, в том числе и селективное подавление различных групп микроорганизмов секрецией антибактериальных агентов (лизоцима и т.д.). Микрофлора, имеющая высокую антибиотикорезистентность, способна к самоорганизации микробного сообщества переориентированного на иные метаболические пути переработки субстрата и нарушению функциональной активности.

Положительная корреляция СИ и САЧ (рис. 1) свидетельствует о взаимосвязи структуры функциональной активности микробиоты кишечника с ее управляемостью. При увеличении антибиотикорезистентности микробиоценоза увеличивается концентрация уксусной кислоты и снижается продукция анаэробных кислот.

Выявлена так же корреляция САЧ с индексом изокислот (ИИ), который рассчитывается как отношение суммы изоформ к сумме линейных форм масляной, валериановой и капроновой кислот. ИИ характеризует протеолитическую активность микрофлоры, так как изоформы ЛЖК образуются при гидролизе белков. Увеличение индекса изокислот свидетельствует о повышении протеолитической активности микрофлоры.

Положительная корреляция ИИ и САЧ (рис. 1) указывает на взаимосвязь между увеличением доли сахаролитической микрофлоры в «неуправляемых микробных сообществах» и общей антибиотикорезистентностью микробного сообщества.

По аналогии с САЧ был предложен критерий средней фагочувствительности (СФЧ).

Средняя чувствительность к фагам – это величина, полученная усреднением всех значений чувствительности к фагам (нормированных в баллы для унификации использования) по набору фагов (интести-бактериофаг, пиобактериофаг комплексный) и микроорганизмов, выделенСуммарная концентрация ЛЖК Концентрация, ммоль/г Рис.2 - Зависимость а) суммарной концентрации ЛЖК и б) индекса изокислотот средней антибиотикочувсвительности на большой выборке пациентов КДЦ МНИИЭМ им. Г.Н.

Габричевского.

Бактериофаги в медицине и ветеринарии ных из биоматериала пациента.

Предложенный критерий был исследован на предмет корреляции с показателями функциональной активности микрофлоры кишечника, в том числе со структурным индексом и индексом изокислот на 3000 пациентах КДЦ МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского. Отрицательная корреляционная зависимость была найдена между СФЧ и суммарной концентрацией (СК) ЛЖК.

На рисунке 2 видно, что с увеличением устойчивости микробиоценоза к фагам увеличивается СК ЛЖК в кале и растет индекс изокислот. Снижение ИИ и СК при увеличении фагочувствительности можно объяснить спецификой подбора фагов для комплексного анализа микрофлоры кишечника. В связи с тем, что практикующих врачей интересует чувствительность к фагам условно-патогенной, протеолитической микрофлоры, был задействован соответствующий набор фагов (интести-бактериофаг, пиобактериофаг комплексный). Таким образом, можно отметить, что такие свойства микробиоценоза как фагочувствительность (резистентность) и функциональная активность связаны между собой.

Для определения влияния интести-бактериофага на симбиотическую микрофлору толстой кишки (бифидобактерии и лактобациллы) было обследовано 30 человек. Сравнивали частоту встречаемости бифидобактерий и лактобацилл в кале пациентов в титрах их средних (медианных) значений в пределах доверительного интервала (р=95%) для бифидобактерий до 109 (107-109), после фаготерапии 108 (108-108); для лактобацилл до 106 (105-107), после фаготерапии 106 (105 - 106). Результат представлен на рисунке 3.

Рис.3 - Встречаемость бифидо- и лактофлоры до и после приема интестибактериофага пациентами.

Из рисунка 3 видно, что встречаемость лактобацилл и бифидобактерий достоверно не изменилась, интенсивность роста так же осталась прежней, а коэффициенты корреляции бифидобактерий (r=-0,080) и лактобацилл (r=-0,070) до и после принятия фагов показывают отсутствие тенденций к увеличению или снижению интенсивности роста определяемой микрофлоры. Таким образом, очевидно, что применение интести-бактериофага не влияет на рост симбиотической нормальной микрофлоры толстого кишечника.

Влияние интести-бактериофага на рост бифидобактерий, лактобациллы было исследовано методом серийных разведений in vitro на средах MRS и Блаурокк с добавлением и без добавления в среду этого фага. Проведенная работа показала, что большая часть штаммов нормофлоры является устойчивой к действию данного фага (таблица 1).

Таблица 1 - Частота выявления штаммов нормальной микрофлоры кишечника, чувствительных к интести-бактериофагу.

Микроорганизмы, (количество Частота выявления штаммов нормофлоры, исследованных штаммов) чувствительных к исследуемому фагу, в % +m Однако, некоторые штаммы (20 - 30%) оказались лизированными, что на наш взгляд, может свидетельствовать о проявлении этим коктейлем фагов неспецифической литической активности. Но, вопрос остается открытым и требует дальнейшего изучения.

Влияние этого бактериофага на рост E.coli (hem-) (табл. 1), E. coli (hem+) и S.aureus исследовали в spot-тесте. Определяли частоту выявления штаммов, устойчивых и чувствительных к этому бактериофагу. Результаты показаны в таблице 2:

Таблица 2 - Частота выявления фагорезистентных штаммов, % +m.

Микроорганизмы, (количество Частота выявления фагорезистентных штаммов в % Наши данные по нормальной микрофлоре совпадают с данными, представленными в литературе [4], но для условно-патогенных микроорганизмов значения частоты выявления фагорезистентных штаммов имеют большие значения. Это может быть связано как с изменчивостью представителей нормальной и условно-патогенной микрофлоры в составе микробиоценоза кишечника и особенностями данных микробиоценозов, отличающихся высокой степенью биоразнообразия системы в условиях дисбиотических изменений микрофлоры кишечника, так и с неспецифичной активностью штаммов бактериофагов в отношении бифидобактерий, лактобацилл и нормальной кишечной палочки.

Заключение. Избирательность действия бактериофагов зависит от индивидуальности микробиоценоза, от изменения фенотипических и эпигенетических свойств отдельных микроорганизмов. В связи с этим, необходим постоянный мониторинг чувствительности бактерий различных биотопов к существующим фаговым препаратам, с целью повышения их эффективности по отношению к патогенной микрофлоре и снижению побочного действия на нормофлору за счет обновления банка штаммов бактериофагов.

1. Бондаренко В. Микрофлора человека: норма и патология. Наука в России, №1, 2007.

2. QinJ., LiR., RaesJ., ArumugamM. etal. A human gut microbial gene catalogue established by metagenomicsequencing.MetaHITConsortium // Nature. 2010. Vol. 464 (7285). P. 59–65.

3. Затевалов А.М., Алешкин А.В., Селькова Е.П., Гусарова М.П., Затевалова Е.А.

БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЙ ПОДХОД К ОЦЕНКЕ МИКРОБИОТЫ КИШЕЧНИКА //

Международная научная конференция «Достижения и перспективы развития биотехнологии», Сборник тезисов с. 137.

4. Бочков И.А., Лавренов Э.С., Юрко Л.П. Влияние лечебных бактериофагов на Бактериофаги в медицине и ветеринарии условнопатогенную и симбиотическую микрофлору толстой кишки // Эпидемиология и инфекционные болезни, «2,

THE INFLUENCE OF BACTERIOPHAGE ON THE GUT MICROFLORA

Zatevalov A.M., Kopanev J.A., Aleshkin A.V., Afanasiev S.S.

Key words: fut tvty f tet rr, vte ftty, fghuvtvtet fgreztett, preprt f bterphge.

Ietfit f evut rter effetvee f bterphge fr rret rzt f the tet rbt the prtt whh be ve by prg the preter f fut tvty phetyp prperte f the tet rr, we by eterg eetvty f bterphge preprt fr r ty pthge tet rr vtr vv.

УДК 619:579.852.

ЗНАЧЕНИЕ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ФАГОВ ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ

BACILLUS ANTHRACIS

Капустин А. В., кандидат ветеринарных наук, доцент, kapustin_andrei@mail.ru Моторыгин А. В. кандидат ветеринарных наук, motor.86@mail.ru ФГБУ «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов»

Ключевые слова: сельскохозяйственные животные, бациллы, сибирская язва, вакцинация, патологический материал, фагодиагностика.

В работе приведены данные по изучению диагностических свойств бактериофагов и их применение для идентификации возбудителя сибирской язвы. о результатам проведенных исследований установлено, что исследуемые культуры Bu thr обладали высокой чувствительностью к бактериофагу, что позволило дифференцировать возбудителя сибирской язвы от других видов Bu.

Введение. Сибирская язва – острое инфекционное заболевание из группы зоонозов, отнесенное к списку наиболее опасных карантинных инфекций. Болезнь главным образом травоядных животных, при этом смертность может достигать 80%. В последние годы в РФ ежегодно регистрируется от 3 до 11 вспышек сибирской язвы [5]. Этиологическим агентом является спорообразующие, грамположительные, палочки Bacillus anthracis, единственный облигатный патоген из рода Bacillus. Большинство других видов Bacillus являются повсеместно распространенными обитающими в окружающей среде сапрофитами, некоторые из них, а именно Bacillus cereus, Bacillus licheniformis и Bacillus subtilis, могут ассоциироваться с пищевыми отравлениями у людей и с другими клиническими проявлениями, как у людей, так и у животных [1-3,8].

На встрече Экспертного комитета по биологической стандартизации в 1998 году были проанализированы имеющиеся международные стандарты и список используемых биологичеБактериофаги в медицине и ветеринарии ских препаратов ветеринарного назначения для диагностики и профилактики сибирской язвы и в результате были предложены новые методики и составлен актуальный список препаратов.

Однако эти меры не позволяют отказаться от используемых в настоящее время методов диагностики и профилактики, в частности, ветеринарных вакцин против сибирской язвы, разработанных ещё в 60-х и 70-х годах. В некоторых странах для диагностики сибирской язвы в разложившихся тушах или продуктах животного происхождения до сих пор используют термопреципитиновый тест, описанный А. Асколи в 1910 г.

Основные трудности лабораторной диагностики сибирской язвы заключаются в том, что при естественном разложении туши животного большинство вегетативных организмов уничтожается под действием гнилостных бактерий. В жарком климате это может происходить в течение одного или двух дней, если туша остается нетронутой. В мазках из образцов крови, отобранных после этого, капсулированные бациллы обнаружить достаточно сложно, хотя культура может сохраняться в крови более 1-2 суток [6,9]. В жидкостях, вытекающих из естественных отверстий, может наблюдаться споруляция, и множество спор контаминируют окружающую среду, особенно когда туша вскрыта животными-падальщиками. В случае сильного разложения туш, культивирование образцов почвы контаминированной выделениями, является основным способом подтверждения диагноза.

В качестве дополнительных лабораторных исследований помимо микроскопии мазков и термопреципитиновой кольцевой пробы, так же используют тесты: определение подвижности, чувствительность к пенициллину и специфическому диагностическому бактериофагу.

Цель и задачи исследования. В этой связи, из-за трудностей диагностики сибирской язвы, возникающих при проведении анализов почвы, шкур и разложившихся трупов животных, использование бактериофагов для идентификации возбудителя сибирской язвы является на сегодняшний день актуальной задачей.

Материалы и методы исследований.

Работа проведена в лаборатории качества и стандартизации лекарственных средств против бактерийных болезней животных ФГБУ «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов». Для проведения исследований использовали вакцинные штаммы: Bu thr 55-ВНИИВВиМ, Bu thr М71, Bu ereu, Bu ubt. Исследования проводили в соответствии с «Методическими указаниями по лабораторной диагностике и обнаружению возбудителя сибирской язвы [4].

Чувствительность бактерий Bu thr к бактериофагам была впервые описана Brown и Cherry в 1955 [7]. Бактериофаги различных производителей находятся в национальных центральных ветеринарных лабораториях и других справочных лабораториях по сибирской язве («Гамма», «К», Fah-ВНИИВВиМ и др.). В связи с тем, что стандартизированных треВНИИВВиМ бований к диагностическим биологическим препаратам не существует – используемый нами в работе бактериофаг был получен по следующей схеме: аттенуированная культура Bu thr на чашках Петри с агаром Mueller-Hinton + 5% овечьей кровью инкубация в течеinton ние 4-6 часов при 37 С засевание культуры фагом (при наличии интенсивного и видимого невооруженным глазом роста) посев 2 мл исходного гамма бактериофага каплями наносят на всю поверхность культуры 37 оС, 12-14 ч помещают чашки в морозильник при -20оС на 12-14 ч 18-20 оС, 2 ч отбор и фильтрация жидкости через фильтровальную бумагу повторное стерильное фильтрование (фильтр 0,22мк) проверка эффективности фага и проверка чувствительности к культуре Bu thr (в разведениях 1/1, 1/10 до 1/10 000). Полученный бактериофаг хранили при 2-8 ос.

Бактериофаги в медицине и ветеринарии Результаты исследований и обсуждение.

Бактерии Bacillus anthracis без труда поддаются выделению из крови и тканей животных, недавно павших от сибирской язвы, и в чистой культуре на стандартных питательных средах, при 37оС, наиболее оптимальной средой является 10% кровяной агар. Но в то же время при разложении туши, особенно в теплом климате, бактерии, вызывающие гниение, оказываются вне конкуренции и, в конечном счете, они уничтожают инфицирующий организм в туше.

Подтверждение наличия сибирской язвы в таких случаях может зависеть от результатов выделения возбудителя из почвы, контаминированной предсмертными выделениями.

Принцип реакции основан на свойствах бактерий Bacillus anthracis лизироватся сибиреязвенными фагами. Для проведения реакции чашки с агаром Mueller-Hinton перед постаinton новкой пробы размечали на квадратные сектора со стороной 2 см. На каждый сектор наносили каплю 5—6-часовой бульонной культуры Bacillus anthracis. Чашку подсушивали в течение мин в термостате, после чего в центр подсохшей капли наносят петлей каплю (10-15 мкл) сибиреязвенного бактериофага, в качестве дополнительного теста на другую сторону помещали диск с пенициллином (10 ед). Учет результатов проводили через 12—24 ч инкубации чашек при 37оС. В случае положительного результата на участке из-за лизиса наблюдали зоны просветления и отсутствие бактериального роста, вокруг пенициллинового диска наблюдалась чистая просветленная зона.

В результате проведенных исследований было установлено, что штаммы Bu thr 55-ВНИИВВиМ и Bu thr М71 были высокочувствительны к бактериофагу и пенициллину, и образовывали характерные зоны просветления диаметром от 30-50 мм; у штаммов Bu ereu, Bu ubt задержки роста на месте нанесения сибиреязвенного бактериофага не наблюдалось, культура Bu ubt была резистентна к антибиотику. Согласно полученным результатам, использование бактериофагов является и легко выполнимым и высокочувствительным методом, позволяющим идентифицировать Bu thr от других видов Bacillus.

1. Бакулов, И.А. Сибирская язва (антракс): новые страницы в изучении «старой» болезни / И.А. Бакулов, В.А. Гаврилов, В.В. Селиверстов. -Владимир: «Посад», 2001. 218 с.

2. Ипатенко Н.Г., Гаврилов В.А. и др. Сибирская язва. - М.: Колос, 1996.

3. Лобанова Т.П., Кихтенко Н. В. Сибирская язва. Монография. М., 2003. - 45 с.

4. МУК 4.2.2413-08 «Лабораторная диагностика и обнаружение возбудителя сибирской язвы. Методические указания».

5. Онищенко Г.Г. Сибирская язва: актуальные аспекты микробиологии, эпидемиологии, клиники, диагностики, лечения и профилактики /Г.Г. Онищенко и др, М.: ВУНМЦ МЗ РФ, 1999. - 448 с.

6. Рязанова, А.Г. Характеристика биологических свойств атипичных штаммов сибиреязвенного микроба, усовершенствование методов их индентификации и дифференцирования от близкородственных бацилл: Автореф. дис.. канд. мед. наук: (03.00.07)/ А.Г. Рязанова.

Ростов-на-Дону, 2006. - 23 с.

7.Brown E.R. & Cherry W.B. Specific «Identification of Bacillus anthracis by meen of a variant bacteriphage. J. Infect. Dis., 96, - P. 34-39.

8. Dieter, C., Dagmar F. II Bacillus Ed. C. R. Harwood. New York, London. Plenum Press.

1989. - P. 5-26.

9. Fellows, P.F. A survey of worldwide strains of Bacillus anthracis / P.F. Fellows // Proc.

Inter. Workshop on anthrax. Winchester, England. September 19-21. 1996. -N 87. - P. 33.

VALUE OF DIAGNOSTIC PHAGES FOR BACILLUS ANTRACIS

IDENTIFICATION

Keywords: grutur, b, gt thrx, btert, pthg ter, phgeg.

prve wrk fr etfit f the rgtr f gt thrx. By reut f the ute reerhe t etbhe tht tue uture f Bu thr pee hgh etvty t e t bterphge tht we t fferette the rgtr f gt thrx fr ther type f Bu.

УДК 602.3:579.

ОЦЕНКА ЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ НЕКОТОРЫХ

БАКТЕРИОФАГОВ

Катаева Л. В., кандидат медицинских наук, ведущий научный сотрудник, тел. 8(3452) 29-99-90, KataevaLV@tniikip.rospotrebnadzor.ru Вакарина А. А., младший научный сотрудник Нижегородцева Н. Ф., младший научный сотрудник ФБУН ТНИИКИП Роспотребнадзора Ключевые слова: бактериофаги, чувствительность, устойчивость, штаммы бактерий, метод определения.

Работа посвящена определению чувствительности/устойчивости некоторых условно-патогенных бактерий к бактериофагам различными методами (на плотной и в жидкой питательной среде). ри проведении исследования установлено, что чувствительность штаммов бактерий к различным бактериофагам не одинакова, поэтому необходимо назначать фаготерапию после исследования фаголитической активности. Кроме того, существующая методика определения и оценки активности фагов субъективна.

Введение. Современная ситуация снижения эффективности антибиотикотерапии очень сложна вследствие повышения устойчивости патогенных и условно-патогенных бактерий к антибактериальным препаратам. Хорошие перспективы в качестве антимикробной терапии имеют бактериофаги, которые эффективны в отношении как чувствительных, так и устойчивых к антибиотикам бактерий. Бактериофаги обладают рядом преимуществ: специфичность действия, отсутствие угнетения нормальной микрофлоры и аллергической реакции, стимуляция факторов специфического и неспецифического иммунитета [1], применение бактериофагов вместе с антибиотиками и иммунопрепаратами [2, 3]. Кроме того, весомым аргументом в пользу целесообразности клинического применения бактериофагов является практически полное отсутствие побочных эффектов, а следовательно, и противопоказаний [4].

Бактериофаги в медицине и ветеринарии Чувствительность к бактериофагам бактерий, выделенных из стационаров различного профиля несколько варьирует. Так, литическая активность стафилококкового бактериофага и пиобактериофага к стафилококкам, выделенным из очагов гнойной инфекции, составляет 72 – 88 %, стрептококковый фаг лизировал 60 – 82 % штаммов стрептококков [5, 3]. Вместе с тем, результаты исследований чувствительности штаммов Staphylococcus aureus и Streptococcus pneumonia, выделенных от больных гастроэнтерологического отделения показали, что стафилококковый фаг лизировал 37,1 % штаммов, стрептококковый фаг – 12 – 21 % стрептококков [6]. Клебсиеллы сохраняли чувствительность как к клебсиеллезному, так и к пиобактериофагу в 87 % случаев. При сравнении литической активности монофагов и ассоциированных подчеркивают, что у монофагов она более выражена [6, 3].

Таким образом, существенное различие данных о литической активности бактериофагов условно-патогенных микроорганизмов, тем более, если речь идет о применении фагов в лечебных целях, свидетельствует о том, что в каждом конкретном случае необходимо предварительное определение чувствительности конкретных микроорганизмов к бактериофагам определенных производителей [7].

Целью исследования явилось сравнение литической активности монофагов и ассоциированных фагов к штаммам Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumonia и Klebsiella pneumonia, а также характеристика эффективности методов определения чувствительности к фагам на плотной и в жидкой питательных средах.

Материалы и методы исследований.

Чувствительность исследуемых штаммов определялась к следующим бактериофагам: стафилококковый бактериофаг, пиобактериофаг поливалентный очищенный и бактериофаг клебсиелл поливалентный (ФГУП НПО «Микроген» МЗ РФ, г. Уфа), интестибактериофаг (ФГУП НПО «Микроген» МЗ РФ, г. Нижний Новгород), пиокомбинированный, фаг клебсиелл пневмонии очищенный (ФГУП НПО «Микроген» МЗ РФ, г. Пермь).

Действие монофагов и комбинированных бактериофагов было изучено на 159 культурах Staphylococcus aureus и 62 штаммах бактерий Klebsiella pneumoniae, выделенных от больных с дисбиозами и здоровых новорожденных детей при еженедельном мониторировании родильного дома № 2 г. Тюмени. Фаголитическую активность стафилококкового, пиобактериофага поливалентного, интестибактериофага и пиокомбинированного фага исследовали со штаммами Staphylococcus aureus на плотной (1,5 % мясопептонный агар - МПА) и в жидкой (мясопептонный бульон - МПБ) питательных средах.

Фаголитическую активность бактериофага клебсиелл пневмонии, клебсиеллезного поливалентного бактериофага и пиобактериофага поливалентного исследовали со штаммами Klebsiella pneumoniae.

Бактериальную суспензию суточной агаровой культуры (5 ед по ОСО 42-28-85-01 п) исследуемого штамма равномерно наносили на поверхность чашки Петри с хорошо подсушенной питательной средой. На поверхность агара с впитавшейся культурой наносили одну каплю бактериофага. После подсыхания капли фага, чашки инкубировали в термостате при 370С в течение 18-20 ч. Степень лизиса культуры оценивали по схеме: полный лизис – «++++»/ «+++», свидетельствует о чувствительности изучаемого штамма к бактериофагу; не полный лизис и отсутствие лизиса – « - », указывает на устойчивость штамма.

Применяли также вариант метода, при котором бактериофаги (5 капель) добавляли пастеровской пипеткой в 5 мл МПБ, в который вносили петлю суточной агаровой исследуемой культуры. Термостатировали 18-24 часа при 370С.

Статистическая обработка выполнена лицензионным программным обеспечением SPSS версия 14.0, предназначенным для научных исследований, отвечающих требованиям клинической эпидемиологии.

В исследовании использовались дискретные данные (типа Да/Нет – устойчивые/чувствительные). Дискретные данные анализировались таблицами сопряженности, которые применялись для расчета отношения шансов встречаемости исследуемых явлений в анализируемых группах. Гипотеза о равенстве шансов встречаемости отвергалась, когда величина соответствующего критерия не равна 1, а его 95% доверительные интервалы не включали в себя 1.

Результаты исследований и их обсуждение.

Итоги изучения сравнительных характеристик методов определения фаголитической активности монофагов и ассоциированных бактериофагов на плотной и в жидкой питательной среде показали следующие результаты. Литическая активность фагов: стафилококкового, интестибактериофага и пиокомбинированного к бактериям S. aureus на МПА, практически не отличаются, различия статистически не значимы. Исключение составляет пиобактериофаг поливалентный, устойчивость к которому оказалась выше, чем у стафилококкового и интестибактериофага, разница статистически достоверна, о чем свидетельствует критерий оценки статистической значимости, таблица 1.

Аналогичные исследования фаголитической активности в МПБ показали, что более высокая устойчивость стафилококков выявлена к стафилококковому и пиокомбинированному фагам, по сравнению с интестифагом и пиобактериофагом поливалентным, разница статистически достоверна, что подтверждают показатели таблицы 2.

При сравнении показателей устойчивости золотистого стафилококка к исследуемым бактериофагам на плотной и жидкой питательной среде с помощью расчета отношения шансов различие установлено только по пиобактериофагу поливалентному (46,5 % и 24,3% соответственно).

Таблица 1 - Устойчивость бактерий S. aureus к бактериофагам при определении на МПА 1.Стафилококковый валентный 3.Интести бактериофаг 4. П и о ком б и нированный При использовании МПА для определения устойчивости к указанному фагу шансы литической способности оказались в 2,7 раза меньше, чем при использовании МПБ, а с учетом 95 % доверительного интервала величина этого показателя колебалась в пределах от 1,5 до 4, раз. Так как нижний доверительный интервал оказался более единицы, имеющееся различие шансов статистически значимо.

По результатам наших исследований не представляется возможным утверждать, что литическая активность монофага стафилококкового к штаммам S.aureus выше, чем у ассоциaureus Бактериофаги в медицине и ветеринарии Таблица 2 - Устойчивость бактерий S. aureus к бактериофагам при определении на МПБ Бактериофаг ство куль- штаммов к ковый лентный териофаг ированных фагов. Показатели свидетельствуют о значимых различиях при определении чувствительности бактерий к пиобактериофагу поливалентному на плотной и жидкой питательных средах. Аналогичные результаты получены и при сравнении литической активности моно и ассоциированных бактериофагов к штаммам K. pneumoniae.

Исследование литической активности фагов по отношению к штаммам K. pneumoniae при использовании МПА показало наиболее высокую устойчивость их к пиополивалентному фагу. Критерий оценки статистической значимости различий средних свидетельствует о достоверности различий, таблица 3.

Таблица 3 - Устойчивость бактерий K.euoae к бактериофагам при опредеeuoae лении на МПА 1. Клебсиелла пневмония 2. Клебсиелла поливалентный 3.Пиобактерио- фаг поливалентный Устойчивость к фагам бактерий K.pneumoniae в жидкой питательной среде оказалась наиболее высокой у бактериофага клебсиелл пневмонии, таблица 4.

Расчет отношения шансов частоты обнаружения устойчивых штаммов K.pneumoniae к бактериофагу клебсиелл пневмонии на плотной питательной среде с учетом 95 % доверительного интервала был от 3,0 до 14,5 раз выше, чем в жидкой питательной среде. Вместе с тем, указанные показатели устойчивости этих штаммов к бактериофагу клебсиелл поливалентному и пиополивалентному составил от 7,0 до 45,0 и от 7,7 до 60,0 соответственно.

Таблица 4 - Устойчивость бактерий K.euoae к бактериофагам при опредеeuoae лении на МПБ пневмонии ливалентный Заключение. Сравнительная характеристика литической активности монофага стафилококкового и ассоциированных фагов (пиобактериофаг поливалентный, интестибактериофаг и пиокомбинированный), к золотистому стафилококку показала, что статистически достоверные отличия отмечены только с пиобактериофагом поливалентным при исследовании на плотной питательной среде. При аналогичном исследовании в жидкой питательной среде результаты получаются противоположными. Штаммы клебсиелл пневмонии также были более устойчивы к пиобактериофагу поливалентному при определении на плотной питательной среде и более чувствительны при исследовании в жидкой питательной среде, хотя различия статистически не достоверные. На наш взгляд, этот факт свидетельствует о несовершенстве существующих методик определения чувствительности бактерий к фагам.

Указанные методы определения устойчивости к фагам, применяемые в настоящее время бактериологическими лабораториями в практическом здравоохранении не позволяют объективно оценить литические свойства бактериофагов, так как результаты оцениваются очень субъективно - в «крестах». Кроме того, широкое применение фаготерапии в лечении и профилактике бактериальных инфекций требует определения чувствительности к определенным бактериофагам конкретных производителей. Это выдвигает приоритетную задачу разработки методики, позволяющей количественно определять и оценивать чувствительность бактерий к бактериофагам.

1. Майская Л. М., Дарбеева О. С., Парфенюк Р. Л. и др. Методика определения фагочувствительности штаммов, выделенных от больных, к препаратам бактериофагов. //Научнопрактический журнал «БИО препараты». – 2003. - № 2. – С. 22-23.

2. Лазарева Е. Б. бактериофаги для лечения и профилактики инфекционных заболеваний. //Антибиотики и химиотерапия. – 2003. – 48. - № 1. –С.36-40.

3. Лазарева Е. Б., Спиридонова Т. Г., Киселевская-Бабина И. В. И др. Эффективность бактериофагов при лечении внутрибольничных инфекций у больных ожогами. //Стерилизация и госпитальные инфекции. – 2007. - № 2. – С. 48-50.

4. Дроздова О. М., Брусина Е. Б. Применение бактериофагов в эпидемиологичкой практике: взгляд через столетие. //Эпидемиология и инфекционные болезни. – 2010. - № 5. – С.

20 – 24.

5. Меньшиков Д. Д., Янискер Г. Я., Савельева Г. Ф. и др. Чувствительность возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний к лечебным бактериофагам. //Антибиотики. – 1980.

Бактериофаги в медицине и ветеринарии - № 5. – С. 356-359.

6. Веселов А. Я., Карманова С. Ю. Литическая активность и специфичность коммерческих бактериофагов. //Клиническая лабораторная диагностика. -1992. - № 9. – С.55-57.

7. Зуева В. С., Дмитриенко О. А., Клицунова Н. В. Роль профагов в формировании антибиотикоустойчивых популяций стафилококков в процессе трансформации, трансдукции и коньюгации. //Антибиотики и химиотерапия. – 1996. – 41. - № 10. – С.35-42.

EVALUATION OF LYTIC ACTIVITY OF SOME BACTERIOPHAGES

Kataevа L. V., Vakarina A. A., Nizhegorodtseva N. F.

Key words: bterphge, etvty, tbty, tr f bter, the eth efit.

Setvty / rete f e pprtut bter t bterphge were vetgte by vru eth (fr qu eu). It w fu tht bter tr etvty f t ever bterphge re fferet, yu ut g phge therpy y fter tuy fgt tvty. Furtherre, the urret eth f eterg eg the phge tvty ubjetve.

УДК 579.843:578.1:616-092:612.015.

БАКТЕРИОФАГИ ПАТОГЕННЫХ ДЛЯ ЧЕЛОВЕКА ВИБРИОНОВ

Кудрякова Т.А., доктор медицинских наук, Тел.8(863) 240-27-03, e-mail: plague@aaanet.ru Македонова Л.Д., кандидат медицинских наук, ФКУЗ «Ростовский-на-Дону противочумный институт» Роспотребнадзора Ключевые слова: бактериофаги Vbr here O1, O139, не О1/не О139 серогрупп, V.be, V.prheytu, V.gytu, V. u, V.ethkv, биологическая харакbe,.prheytu,.gytu,.

be, prheytu, gytu, теристика, применение.

Работа посвящена изучению свойств новых и имеющихся в коллекции фагов патогенных вибрионов. оказана принадлежность бактериофагов Vbr here 1 к пяти морфологическим типам, V.be и V.prheytu – к четырем, V. u – к одному и V.ethkv – к одному. Охарактеризованы серологические свойства и установлены разethkv ethkv личия и сходства в антигенном строении. Специфичность литической активности бактериофагов использована в лабораторной диагностике патогенных вибрионов.

Введение. Большой фактический материал, накопленный в последние три десятилетия, свидетельствует о широком распространении патогенных вибрионов, для большой группы которых бактериофаги неизвестны. Показано, что на территории России и некоторых зарубежных государств возможно обнаружение бактериофагов холерных и парагемолитических вибрионов, Vbr uv, Vbr vufiu [1, 2, 3, 4]. В центре патогенных вибрионов Ростовского-на-Дону противочумного института были идентифицированы представители десяти видов патогенных вибрионов, коллекция культур которых нуждается в дополнении соответствующими бактериофагами и разработке методов фагодиагностики. Детальное изучение взаимоотношения бактериофагов с клеткой хозяина имеет не только теоретическое, но и важБактериофаги в медицине и ветеринарии ное практическое значение в диагностике заболеваний, вызываемых патогенными для человека вибрионами.

Целью работы явилось сравнительное изучение свойств свежевыделенных и имеющихся в коллекции рас бактериофагов Vbr here O1, O139, не О1/не О139 серогрупп, V.be, V.prheytu, V.gytu, V. u, V.ethkv для их дифференциации и применения.

Материалы и методы исследований. В работе использовали 301 фаг патогенных для человека вибрионов, выделенных из лизогенных штаммов и объектов внешней среды (таблица 1). Титры бактериофагов составляли 108-109 БОЕ/мл. В качестве индикаторных штаммов использовали V. here here 145, V. here etr 75, КМ-199, V. here О139-КМ 152, V. here не О1 – 16 штаммов, V.prheytu КМ-97, КМ- 184, V.be-КМ 41, V.ethkv КМ 185, V. here О37 серовара 1322-69.

При выращивании вибрионов применяли 0,7% и 1,5% агар и бульон Мартена (рН 7,6для галофильных вибрионов V.prheytu, V.gytu использовали те же среды с 3% NaCl. Результаты учитывали через 18-20 часов инкубации при 370С. биологические свойства фагов изучали классическими методами [5]. Строение корпускул исследовали в электронном микроскопе Gem-100B [6, 7]. Антифаговые сыворотки получали путем внутривенной иммунизации кроликов по методу Марьиной Ю.Н. [8]. Специфичность фагов испытывали на 135 штаммах микроорганизмов родственных видов, родов и семейств (Vbree, Peu-, ee, Eterbteree).

В работе применяли препараты диагностических холерных бактериофагов производства ФКУЗ РосНИПЧИ «Микроб»: классический, эльтор, ДДФ, ctx+ и ctx-.

Результаты исследований и их обсуждение. Материалы исследования показали, что бактериофаги патогенных вибрионов представляют собой неоднородную по свойствам группу. В таблице 1 суммированы основные морфологические типы [6] изученных 301 ДНКсодержащих бактериофагов патогенных вибрионов. Впервые охарактеризованы новые фаги V.ethkv и V. u, выделенные нами из лизогенных штаммов (патент № 2375437).

Установлено, что бактериофаги объединены у V. here O1 и не О1/не О139 – пятью морфогруппами, у V. here О139 – двумя, V.be и V.prheytu – четырьмя, у V. u – 1, V.ethkv – 1 по классификации А.С.Тихоненко [6]. У бактериофагов отмечены три типа негативных колоний: 1 - мелкие с ободком по периферии; 2 - мутные; 3 - прозрачные, от 0,5 до 2мм в диаметре.

При анализе антигенных свойств бактериофагов выявлено большое разнообразие серологических типов: 12 – у холерных фагов, 18 – у неагглютинирующихся О-сывороткой и О-139 сывороткой вибрионов, 11 – у парагемолитических и 4 – у алгинолитических вибрионов. Наряду с высокой специфичностью антифаговых сывороток представленных рас фагов, установлено сходство антигенного строения у фагов V. here O1 и О139 серогрупп (фаги II и XII серотипов), а также фагов V. u с холерными (XII серотип), дающими перекрестные реакции нейтрализации.

Для дифференциации бактериофагов I морфотипа от остальных (III –V) использоваIII V)) ли действие инактивирующих агентов – хлороформа и прогревание при температуре 650С.

Установлена чувствительность к химическому агенту филаментозных фагов и устойчивость к прогреванию. Специфичность литического действия фагов патогенных вибрионов, проверенная на 135 штаммах различных видов бактерий, соответствовала таксономическим группам, и их активность не распространялась на представителей семейств Vbree, Peuee, Eterbteree. Для идентификации фагов V. u от серологически родственных холерных, присутствие которых возможно в пробах речной воды при мониторинге объектов Бактериофаги в медицине и ветеринарии Таблица 1. - Особенности структурной организации бактериофагов патогенных для человека вибрионов О окружающей среды на наличие вибриофлоры, нами предложен фагочувствительный к ним штамм V. here О37 серогруппы, устойчивый к холерным фагам [9].

Данные ретроспективного анализа более 700 штаммов вибрионов, выделенных в последние 20 лет в разных эпидемиологических ситуациях, свидетельствовали о различии лизогенных систем вибрионов, циркулировавших на контролируемых территориях в период седьмой пандемии холеры. Нами создана система из восьми тест-культур, позволяющая идентифицировать обнаруживаемые умеренные фаги, из которых V. here КМ 199, КМ 152;

V.prheytu КМ 184, КМ 97; V.ethkv КМ 185 – депонированы в ГКПБ «Микроб».

Холерные вибрионы О139 серогруппы проявили лизогенные свойства на индикаторных штаммах холерных вибрионов О1 и О139 серогрупп. Эти биологические особенности были использованы для внутривидовой дифференциации вибрионов «Бенгал» [10].

Бактериофаги применяются в диагностике некоторых видов патогенных вибрионов: в идентификации холерных вибрионов О1 и не О1/не О139 серогрупп используется фаг ДДФ, в индикации биовара – классические и эльтор фаги, проводится определение фаготипа, дифференциация штаммов на серовары и внутривидовая дифференциация с помощью метода прямого фаготипирования.

По результатам фаготипирования холерных вибрионов, изолированных из объектов окружающей среды на территории Российской Федерации, была установлена принадлежность штаммов к различным фаготипам (ф/т) в период с 2007 по 2011 годы: к трем – в 2007 году (13, 14, 19 ф/т), четырем – в 2010 (13, 14, 16, 19 ф/т) и в 2011 году – (5, 13, 15, 17 ф/т). Токсигенные холерные штаммы при использовании фагов ctx+ и ctx- в комплексе с гемолитической активностью по Грейгу были идентифицированы в 94%. Фаготипирование более 200 штаммов парагемолитических вибрионов с помощью авторского набора бактериофагов позволило определить принадлежность штаммов к одиннадцати фаготипам.

Заключение. Анализ полученных данных о свойствах большой группы бактериофагов различных видов патогенных вибрионов позволяет установить не только их общность как представителей вирусов бактерий, но и различия признаков. По данным детекции и идентификации бактериофагов V. here, V.prheytu, V.be, V. u, V.ethkv определены серологические свойства и морфология фагов. При сравнительном изучении бактериофагов обнаружены особенности по чувствительности к химическому агенту (хлороформу) и устойчивости к повышенной температуре. Специфичность литического действия бактериофагов использована для тестирования на соответствующих видах микроорганизмов.

Создана База данных «Коллекция бактериофагов и тест-штаммов патогенных для человека вибрионов» (Свидетельство о гос.регистрации базы данных № 2010620549 от 24.09.2010 г.), расширяющая возможность использования в научно-практических исследованиях по проблеме «Холера и патогенные вибрионы». По мере накопления новых данных о фагах патогенных вибрионов, выяснение особенностей и специфичности лизогенных тест-систем может быть полезным в решении вопросов об эволюционных взаимоотношениях в пределах вида и между видами.

1. Кудрякова Т.А. Лизогения холерных и парагемолитических вибрионов и её практическое значение. //Автореф.дисс….д-ра мед.наук.-Ростов – на – Дону, 1996.-42с.

2. Chen K, Lin Y, Chen G. Studies on diagnostic bacteriophage of Vibrio fluvialis. // ChungHua Yu Fang i Hsuch Tsa chih (chinex Yornal of Preventive Medicine), 1995, 29 (3): 138-140.

3. Pelon W, Siebeling K.I., Simonson I, Liftig R.B. Isolation of bacteriophage infection for Vibrio vulnificus. // Current Microbiology, 1995, 30 (6): 331-336.

4. Остроумова Н.М., Агапова З.М., Мороз В.П. и др. Лизогения у НАГ - вибрионов О-41 серотипа. //Генетика и биохимия особо опасных инфекций. Саратов, 1980. с.56-61.

5. Адамс М. Бактериофаги: Пер.с англ.-М., 1961,-527с.

6. Тихоненко А.С. Ультраструктура вирусов бактерий. - М., 1968, 89с.

7. Ackerman H.W. Bacteriophage taxonomy in 1987. // Microbiol. Sci.-1987.-Vol.4, № 7.Р.214-218.

8. Марьина Ю.Н. Получение антифаговой сыворотки и изучение антигенной структуры фага.//Тр.Рост.н/Д противочум. ин-та.-1941.-Т.2.-с.3-7.

9. Кудрякова Т.А., Македонова Л.Д., Качкина Г.В., Авдеева Е.П., Саямов С.Р. Патент РФ на изобретение № 2375437 – Способ выделения и дифференциации фага Vibrio mimicus. // Бюллетень № 34 от 10.12.2009г.

10. Кудрякова Т.А., Гаевская Н.Е., Македонова Л.Д., Качкина Г.В. Патент РФ на изобретение № 2268942 – Способ внутривидовой дифференциации Vibrio cholerae 139. //Бюллетень № 03 от 27.01.2006г.

BACTERIOPHAGES OF PATHOGENIC VIBRIOES FOR THE PERSON

Kudryakova T.A., Makedonskaya L.D, Gaevskaya N.E. Kachkina G.V.

Key words: bterphge Vbr here 1, 139, ether 1/r 139 ergrup, V.be, V.prheytu, V.gytu, V.u, V.ethkv, bg prperte, ppt.

vbe et.The begg f bterphge f Vbr here 1 t five rphgtype tte, V.be и V.prheytu – t fur, V.u – t e V.ethkv –t e. The erg prperfie re hrterze tt rte t-gee truture re tte. Spefit f yt tvty f bterphge ue brtry gt f pthge vbre.

Бактериофаги в медицине и ветеринарии УДК 619:616.98:579.

БАКТЕРИОФАГИ ПРИ САЛЬМОНЕЛЛЕЗЕ КУР

Ленев С.В., кандидат биологических наук, ФГБУ Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов (ФГБУ «ВГНКИ»), г. Москва, Тел. (8 495) 982 50 83, slenev@yandex.ru Ключевые слова: сальмонеллез, бактериофаги, антибиотики, куры, профилактика, лечение риведены результаты изучения биологических свойств бактериофагов S. Etert, S. Typhuru и S. Gru, а также сравнения литического действия фагов и антибиотиков на сальмонеллы.

Введение. В России, как и во многих странах мира, среди пищевых зоонозов с установленным бактериальным агентом, сальмонеллез имеет наибольшую эпидемиологическую значимость. Показатель заболеваемости сальмонеллезом в РФ составил в 2011году 35,89 на сто тысяч населения, его доля составляла 17,9% от всех этиологически расшифрованных кишечных инфекций (1).

Ситуация по сальмонеллезу в настоящее время не может считаться благополучной, что делает необходимым применение в практике ветеринарии и здравоохранения эффективных мер борьбы с заболеванием.

Установлено, что интенсивность циркуляции сальмонелл в природе во многом связана с интенсификацией процессов выращивания и переработки птицы. При этом, продукция птицеводства рассматривается как главный путь передачи возбудителя человеку.

Проблема поиска эффективной альтернативы антибиотикам, а также ограничения по химической обработке птицы (использование хлорированной воды при убое) возродила интерес к использованию бактериофагов в качестве средства профилактики зоонозных заболеваний, в том числе и сальмонеллеза птиц (2).

Концепция, по обеспечению безопасной продукции животного происхождения, в том числе и птицеводства, рекомендованная МЭБ и ФАО ВОЗ, направлена на предотвращения распространения сальмонелл вдоль всей пищевой цепи (по принципу - «от фермы до стола»).

В этой связи препараты бактериофагов обладают уникальными возможностями, так как могут быть эффективно использованы на разных стадиях пищевой цепи. Бактериофаги для контроля пищевых патогенов предлагается использовать в первичной звене для санации возбудителя при выращивании птицы, обработке тушек и оборудования при убое, а также обработке продукции готовой для употребления (3).

Основными сероварами сальмонелл инфицирующими кур в Российской Федерации являются: S. Enteritidis, S. Gallinarum и S. Typhimurium, составляющие вместе около 95% сальмонелл циркулирующих в птицеводческих хозяйствах. Этиологическая структура сальмонеллеза птиц за последние 15 лет существенно не изменилась. В этот период возросла этиологическая значимость серовара S. enteritidis и уменьшилась серовара S. Gallinarum.

В данной работе приведены результаты изучения биологических свойств бактериофагов S. Enteritidis, S. Typhimurium и S. Gallinarum, а также сравнения литического действия фагов и антибиотиков на сальмонеллы.

Материалы и методы исследований. Выделение изолятов фагов проводили из сточных вод птицефабрик, неблагополучных по сальмонеллезу кур. Для повышения вероятности обнаружения фагов использовали метод обогащения, описанный М. Адамсом (4). Чистые линии фагов получали последовательным клонированием морфологически однотипных негативных колоний. Сравнительную оценку морфологии негативных колоний различных фагов проводили, используя одну партию питательной среды и одинаковые условия культивирования.

Электронограммы вирионов бактериофагов выполняли на электронном микроскопе JEM-100-CX, при ускоряющем напряжении 80 киловольт, с использованием метода негативного контрастирования фосфорно-вольфрамовой кислотой по А.С. Тихоненко (5). В качестве модельного тест объекта использовали бактериофаг Т2.

Активность бактериофагов определяли общепринятыми способами – по количеству жизнеспособных фаговых частиц методом Грациа, и по литической активности фагов методом Аппельмана.

Чувствительность сальмонелл к 8 антибиотикам определяли диско-диффузионным методом, в соответствии с рекомендациями Института клинических и лабораторных стандартов (CLSI), США.

Для изучения антибиотикорезистентности использовали 308 штаммов сальмонелл.

200 из них, представляли собой штаммы, собранные в коллекции микроорганизмов ВГНКИ в период 1948 по 2009 годы, а 108 - были изолятами сальмонелл, выделенными из пищевых продуктов, кормов и биоматериалов от животных в различных регионах РФ в 2010 - 2012 годах.

Штаммы сальмонелл, относящиеся к основным сероварам сальмонелл инфицирующих кур - S. Enteritidis, S. Typhimurium и S. Gallinarum, были испытаны на чувствительность к бактериофагам.



Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 8 |








Похожие работы:

«УСТАВ РУССКОГО ЭНТОМОЛОГИЧЕСКОГО ОБЩЕСТВА ПРИ РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ НАУК (Принят Бюро Отделения общей биологии РАН 27 марта 1995 г.) 1. Общие положения 1.1. Русское энтомологическое общество при Российской академии наук, в дальнейшем именуемое РЭО, является некоммерческой организацией — научным обществом Отделения общей биологии при РАН — и осуществляет свою деятельность в соответствии с существующим законодательством и настоящим Уставом. 1.2. РЭО является юридическим лицом. Оно имеет свои...»

«Институт систематики и экологии животных СО РАН Териологическое общество при РАН Новосибирское отделение паразитологического общества при РАН ВСЕРОССИЙСКАЯ НАУЧНАЯ КОНФЕРЕНЦИЯ АКТУАЛЬНЫЕ ПРОБЛЕМЫ СОВРЕМЕННОЙ ТЕРИОЛОГИИ 18–22 сентября 2012 г., Новосибирск Тезисы докладов Новосибирск 2012 УДК 599 ББК 28.6 А43 Конференция организована при поддержке руководства ИСиЭЖ СО РАН и Российского фонда фундаментальных исследований (грант № 12-04-06078-г) Редакционная коллегия: д.б.н. Ю.Н. Литвинов...»

«МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ Московская международная научно-практическая конференция ЭКОЛОГИЯ КРУПНЫХ ГОРОДОВ Проводится в рамках Московского международного конгресса Биотехнология: состояние и перспективы развития 15 - 17 марта 2010 March, 15 - 17 Под патронажем Правительства Москвы Sponsored by Moscow Government The Moscow International Scientific and Practical Conference ECOLOGY OF BIG CITIES Held within the framework of Moscow International Congress Biotechnology: State of the Art and Prospects...»

«Московский государственный университет им. М.В.Ломоносова Студенческий союз МГУ Биологический факультет ТЕЗИСЫ ДОКЛАДОВ XIII МЕЖДУНАРОДНОЙ КОНФЕРЕНЦИИ СТУДЕНТОВ, АСПИРАНТОВ И МОЛОДЫХ УЧЕНЫХ ЛОМОНОСОВ-2006 12–15 апреля 2006 г. Секция Биология Москва – 2006 УДК 57 Председатель оргкомитета секции Биология Проф. Гостимский С.А. Члены оргкомитета: С.н.с. Ботвинко И.В. Проф. Максимов Г.В. Доц. Медведева М.В. Проф. Соколов Д.Д. Проф. Онищенко Г.Е. С.н.с. Авилова К.В. Ст. преп. Сергеев И.Ю. Доц....»

«CBD Distr. GENERAL КОНВЕНЦИЯ О БИОЛОГИЧЕСКОМ UNEP/CBD/COP/8/12 РАЗНООБРАЗИИ 15 February 2006 RUSSIAN ORIGINAL: ENGLISH КОНФЕРЕНЦИЯ СТОРОН КОНВЕНЦИИ О БИОЛОГИЧЕСКОМ РАЗНООБРАЗИИ Восьмое совещание Куритиба, Бразилия, 20–31 марта 2006 года Пункты 13 и 20 предварительной повестки дня* РЕЗЮМЕ ВТОРОГО ИЗДАНИЯ ГЛОБАЛЬНОЙ ПЕРСПЕКТИВЫ В ОБЛАСТИ БИОРАЗНООБРАЗИЯ Записка Исполнительного секретаря 1. В пункте 8 а) решения VII/30 Конференция Сторон поручила Исполнительному секретарю при содействии со стороны...»

«НИИЦМиБ ФГБОУ ВПО Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина Кафедра микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ВСЭ Научно-исследовательский инновационный центр микробиологии и биотехнологии АКТУАЛЬНЫЕ ПРОБЛЕМЫ ИНФЕКЦИОННОЙ ПАТОЛОГИИ И БИОТЕХНОЛОГИИ Материалы VI-й Международной студенческой научной конференции, посвящённой 70-летию ФГБОУ ВПО Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина 14 – 15 мая 2013 года Часть I Ульяновск – 2013 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии НИИЦМиБ ФГБОУ ВПО...»

«Отделение биологических наук РАН Научный Совет по гидробиологии и ихтиологии РАН Российский фонд фундаментальных исследований Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биологии внутренних вод им. И.Д. Папанина Российской академии наук Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Тюменский государственный университет МАТЕРИАЛЫ ВСЕРОССИЙСКОЙ КОНФЕРЕНЦИИ С МЕЖДУНАРОДНЫМ УЧАСТИЕМ Борок 2012 Отделение биологических наук...»

«Компании-участницы выставки в рамках XXIII международной конференции РАРЧ Репродуктивные технологии сегодня и завтра 4 – 7 сентября 2013, Волгоград ГЕНЕРАЛЬНЫЙ СПОНСОР КОНФЕРЕНЦИИ Merck Serono Мерк Сероно является фармацевтическим подразделением компании Мерк 125445, Москва, КГаА (г.Дармштадт, Германия). В 150 странах мира Мерк Сероно ул. Смольная, д.24Д поставляет на рынок препараты ведущих брендов, помогающие пациентам в борьбе с онкологическими заболеваниями, рассеянным склерозом, (495)...»

«CBD Distr. GENERAL КОНВЕНЦИЯ О UNEP/CBD/COP/7/21 БИОЛОГИЧЕСКОМ 13 April 2004 РАЗНООБРАЗИИ RUSSIAN ORIGINAL: ENGLISH КОНФЕРЕНЦИЯ СТОРОН КОНВЕНЦИИ О БИОЛОГИЧЕСКОМ РАЗНООБРАЗИИ Седьмое совещание Куала-Лумпур, 9-20 и 27 февраля 2004 года ДОКЛАД О РАБОТЕ СЕДЬМОГО СОВЕЩАНИЯ КОНФЕРЕНЦИИ СТОРОН КОНВЕНЦИИ О БИОЛОГИЧЕСКОМ РАЗНООБРАЗИИ СОДЕРЖАНИЕ Страница ВВЕДЕНИЕ. ПУНКТ 1 ПОВЕСТКИ ДНЯ. ОТКРЫТИЕ СОВЕЩАНИЯ Приветственное обращение министра наук и, технологии и окружающей 1. среды Малайзии Дато Сери Ло...»

«Фундаментальная наук а и технологии - перспективные разработки Fundamental science and technology promising developments III Vol. 2 spc Academic CreateSpace 4900 LaCross Road, North Charleston, SC, USA 29406 2014 Материалы III международной научно-практической конференции Фундаментальная наука и технологии перспективные разработки 24-25 апреля 2014 г. North Charleston, USA Том 2 УДК 4+37+51+53+54+55+57+91+61+159.9+316+62+101+330 ББК 72 ISBN: 978-1499363456 В сборнике собраны материалы докладов...»

«1-е информационное письмо Федеральное агентство научных организаций Российская академия наук Всероссийский научно-исследовательский институт биологической защиты растений Министерство сельского хозяйства и перерабатывающей промышленности Краснодарского края Министерство образования и науки администрации Краснодарского края ВПРС Международной организации по биологической борьбе с вредными животными и растениями (МОББ) Российская Технологическая Платформа Биоиндустрия и Биоресурсы – БиоТех2030...»

«Труды VI Международной конференции по соколообразным и совам Северной Евразии ОСЕННЯЯ МИГРАЦИЯ СОКОЛООБРАЗНЫХ В РАЙОНЕ КРЕМЕНЧУГСКОГО ВОДОХРАНИЛИЩА М.Н. Гаврилюк1, А.В. Илюха2, Н.Н. Борисенко3 Черкасский национальный университет им. Б. Хмельницкого (Украина) 1 gavrilyuk.m@gmail.com Институт зоологии им. И.И. Шмальгаузена НАН Украины 2 ilyuhaaleksandr@gmail.com Каневский природный заповедник (Украина) 3 mborysenko2905@gmail.com Autumn migration of Falconiformes in the area of Kremenchuh...»

«01 – 31 августа 2013 2013 Содержание Общие тенденции инновационной сферы Биотехнологии Медицина и здравоохранение Новые материалы и нанотехнологии Транспортные и космические системы Рациональное природопользование Энергоэффективность и энергосбережение Список источников 2 Общие тенденции инновационной сферы Российские ученые создают искусственное человеческое тело Российские ученые приступили к разработке протеза всего человеческого тела. Об этом в ходе пресс-конференции заявил профессор МГУ,...»

«алтайский государственный университет Ботанический институт им. в.л. комарова ран Центральный сиБирский Ботанический сад со ран алтайское отделение русского Ботанического оБЩества Проблемы ботаники Южной сибири и монголии Сборник научных статей по материалам Деcятой международной научно-практической конференции (Барнаул, 24–27 октября 2011 г.) Барнаул – 2011 уДК 58 П 78 Проблемы ботаники Южной сибири и монголии: сборник научных статей по материалам X международной научно-практической...»

«CBD Distr. GENERAL КОНВЕНЦИЯ О БИОЛОГИЧЕСКОМ UNEP/CBD/COP/8/3 РАЗНООБРАЗИИ 19 December 2005 RUSSIAN ORIGINAL: ENGLISH КОНФЕРЕНЦИЯ СТОРОН КОНВЕНЦИИ О БИОЛОГИЧЕСКОМ РАЗНООБРАЗИИ Восьмое совещание Куритиба, Бразилия, 20-31 марта 2006 года Пункт 9 предварительной повестки дня* ДОКЛАД О РАБОТЕ ОДИННАДЦАТОГО СОВЕЩАНИЯ ВСПОМОГАТЕЛЬНОГО ОРГАНА ПО НАУЧНЫМ, ТЕХНИЧЕСКИМ И ТЕХНОЛОГИЧЕСКИМ КОНСУЛЬТАЦИЯМ СОДЕРЖАНИЕ Страница ПУНКТ 1 ПОВЕСТКИ ДНЯ. ОТКРЫТИЕ СОВЕЩАНИЯ ПУНКТ 2 ПОВЕСТКИ ДНЯ. ОРГАНИЗАЦИОННЫЕ...»

«Уважаемые коллеги! Миркин Б.М., д.б.н., профессор, Башкирский Оргкомитет планирует опубликовать научные гос. университет материалы конференции к началу ее работы. Приглашаем Вас принять участие в работе П е н ч у ко в В. М., а к а д е м и к РАСХ Н, Для участия в работе конференции Международной научной конференции необходимо до 1 февраля 2010 года Ставропольский гос. аграрный университет Теоретические и прикладные проблемы П е т р о в а Л. Н., а к а д е м и к РА С Х Н, н ап р а в и т ь...»

«Камчатский филиал Тихоокеанского института географии (KФ ТИГ) ДВО РАН Камчатский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства и океанографии (КамчатНИРО) Биология Численность Промысел Петропавловск-Камчатский Издательство Камчатпресс 2009 ББК 28.693.32 Б90 УДК 338.24:330.15 В. Ф. Бугаев, А. В. Маслов, В. А. Дубынин. Озерновская нерка (биология, численность, промысел). Петропавловск-Камчатский : Изд-во Камчатпресс, 2009. – 156 с. В достаточно популярной форме представлены научные данные о...»

«ФОРМА ЗАЯВКИ ПРЕДСТАВЛЕНИЕ МАТЕРИАЛОВ Министерство природных ресурсов и экологии на участие в конференции: Заявки и материалы, объемом до 5 страниц Российской Федерации (включая таблицы, рисунки и библиографический Фамилия Управление Федеральной службы список), принимаются в печатном и электронном по надзору в сфере природопользования виде до 12 мая 2014 г. по Кировской области Имя Федеральное государственное бюджетное Электронный вариант: стандартный формат Word учреждение Государственный...»

«Ukraine, Russia, Kazakhstan and Turkmenistan, shows its relationship with the 11-year cycle of solar activity, when it peaks occur during periods of sharp increase or decrease in solar activity near the maximum, and minimum - for periods of low solar activity ( fig.) Among the countries of Eastern and Western Europe is characterized by similar dynamics only for Romania. For other countries the situation is not so clear, it is associated with dominance or high-frequency oscillation periods of...»

«АССОЦИАЦИЯ СПЕЦИАЛИСТОВ ПО КЛЕТОЧНЫМ КУЛЬТУРАМ ИНСТИТУТ ЦИТОЛОГИИ РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ НАУК ISSN 2077- 6055 КЛЕТОЧНЫЕ КУЛЬТУРЫ ИНФОРМАЦИОННЫЙ БЮЛЛЕТЕНЬ ВЫПУСК 27 CАНКТ-ПЕТЕРБУРГ 2011 ISSN 2077- 6055 УДК 576.3, 576.4, 576.5, 576.8.097, М-54 Клеточные культуры. Информационный бюллетень. Выпуск 27. Отв. ред. М.С. Богданова. - СПб.: Изд-во Политехн. ун-та, 2011. - 94 с. Настоящий выпуск содержит информацию об основных направлениях фундаментальных и прикладных исследований на клеточных культурах, о...»









 
2014 www.konferenciya.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Конференции, лекции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.