WWW.KONFERENCIYA.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Конференции, лекции

 

Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 8 |

«Том II Ульяновск - 2013 Материалы международной научно-практической конференции Бактериофаги: Теоретические и практические аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой ...»

-- [ Страница 2 ] --

Для оценки эффективности лечебного и профилактического эффекта от применения фагов при сальмонеллезе на лабораторных животных использовали белых беспородных мышей массой от 8-10г до 14-16 грамм, а также цыплят и кур различного возраста кроссов «Смена - 4», «Хайсекс коричневый» и «Иза-Браун». Профилактические свойства экспериментальных препаратов бактериофагов изучали, вводя перорально белым мышам по 106 и цыплятам по фаговых частиц, с последующим заражением через 2 часа опытных и контрольных животных 5LD50 вирулентного штамма сальмонелл. Лечебные свойства фагов проверяли, вводя их аналогично, и в тех же дозах, через трое суток после инфицирования вирулентными штаммами сальмонелл.

Результаты исследований и их обсуждение. Из проб сточных вод птицеводческих хозяйств выделено 27 изолятов бактериофагов S. Enteritidis, 14 - S. Typhimurium и 10 фагов S.Gallinarum. Состав популяций выделенных фагов был гетерогенным и был представлен несколькими типами негативных колоний. После их клонирования и проведения пяти последовательных пассажей на штаммах бактерий -хозяинах, из выделенных фагов отобраны наиболее активные. В их фаголизатах в течение 3-5 часов культивирования в стационарных условиях накапливалось от 8,4х109 до 2,0х1011 жизнеспособных фаговых частиц. Среди этих штаммов фагов в свою очередь отобраны фаги, обладающие наименьшим периодом латентным периодом развития, высокой адсорбционной способностью и максимальной урожайностью. Установлено, что диапазон специфичности выделенных фагов ограничен пределами рода Salmonella.

Электронно-микроскопические исследования вирионов селекционированных фагов показали, что все они обладают бинальным типом симметрии, состоят из равносторонней головки в виде изометрического многогранника в форме икосаэдра с диаметром от 50 до нм, длинного несокращающегося отростка с поперечной исчерченностью длиной 105 -150 нм, имеют базальную пластинку и короткие фибриллы (рис.1). Фаги данного типа входят в семейство Siphoviridae, относятся к морфотипу В1 по классификации H.W. Ackermann, M.S. Dubow (6).

Бактериофаги в медицине и ветеринарии Рис. 1 - Морфология вирионов бактериофага F-6 S.etertds Таблица 1 - Сравнение чувствительности коллекционных штаммов к антибиотикам и изолятов сальмонелл поступивших в лабораторию в 2010-2012 гг.

коллекция изоляты коллекция изоляты коллекция изоляты Как следует из представленных данных, изученные штаммы сальмонелл в основном были чувствительны ко всем использованным в работе антибиотикам, за исключением доксициклина. Следует отметить, что среди изолятов, выделенных в 2010-2012гг., в 2 раза возросла частота обнаружения сальмонелл, устойчивых к ампициллину и доксициллину, в 1,8 раза - к стрептомицину (рис.2).

Рис. 2 - Штаммы и изоляты сальмонелл, устойчивые к антибиотикам Также у сальмонелл, выделенных в этот период, значительно возросло количество изолятов имеющих промежуточную устойчивость к ципрофлоксацину (в 3,9 раза) и норфлоксацину – в 5,6 раза (рис.3).

Рис. 3 - Штаммы и изоляты сальмонелл промежуточно-устойчивые к антибиотикам Таким образом, проведенный ретроспективный анализ чувствительности к антибиотикам штаммов сальмонелл, собранных в коллекции микроорганизмов ВГНКИ в период с 1948 по 2009 годы, а также изолятов сальмонелл поступивших в институт в 2010-2012 годах, свидетельствует о возрастающей тенденции распространения штаммов возбудителей сальмонеллеза антибиотирезистентных к тетрациклинам, аминогликозидам и фторхинолонам.

При испытании сальмонелл на чувствительность к селекционированным бактериофагам, установлено, что фаги S. Enteritidis способны лизировать 75 из 78 музейных и 101 из штаммов гомологичного серовара. Фаги S. Typhimurium – 35 из 37 музейных и 23 из 24 изолятов сальмонелл этого серовара. Среди изученных штаммов сальмонелл серовара S.Gallinarum к фагам были чувствительны 51 из 53 музейных штаммов и 42 из 42 изолятов. Фагорезистенные штаммы сальмонелл имели «R» и « S-» форму колоний и, по всей видимости, представляли собой мутанты адсорбционного типа. Наличие устойчивых к фагам штаммов сальмонелл не было связано с давностью и источником их выделения. В целом, изученные музейные штаммы и «полевые» изоляты сальмонелл обладали очень высокой чувствительностью к селекционированным бактериофагам.

При оценке профилактического и лечебного эффекта бактериофагов введенных лабораторным животным, установлено, что бактериофаги предохраняли от заболевания и гибели 90-100% белых мышей и 95-100% цыплят и оказывали лечебный эффект в 80-96% случаев, при гибели 80-100 животных в контрольной группе.

Заключение.Селекционированные штаммы бактериофагов S. Enteritidis, S. Gallinarum и S.Typhimurium используется в качестве производственных при изготовления фагового компонента Сальмофага, единственного в настоящий момент, лечебно - профилактического препарата содержащего фаги, зарегистрованного в РФ. Сальмофаг состоит из двух компонентов – сухой живой вакцины из фагоустойчивого аттенуированного штамма сальмонелл и бактериофага. Лечебный эффект препарата создается за счет высокоактивных бактериофагов широкого спектра действия. Фагоустойчивый вакцинный штамм обеспечивают формирование иммунитета к возбудителям после санации организма птиц бактериофагом.

Контролируемые опыты по применению промышленных серий препаратов сальмофаБактериофаги в медицине и ветеринарии га содержащих бактериофаги S. Enteritidis, S. Gallinarum и S. Typhimurium в птицеводческих хозяйствах различных регионов страны, неблагополучных по сальмонеллезу, показали их высокую лечебно-профилактическую эффективность.



1. Информационный бюллетень Референс – центра по мониторингу за сальмонеллезами №24, - М., 2012.- 66с.

2. R. J. Atterbury, M. A. P. Van Bergen, F. rtiz, M. A. Lovell, J. A. Harris et al., Bacteriophage Therapy To Reduce Se Colonization of Broiler Chickens // Appl Environ Microbiol. July; 73(14), 4543–4549.

3. S. Hagens, M. J. Loessner Bacteriophage for Biocontrol of Foodborne Pathogens:

Calculations and Considerations// Current Pharmaceutical Biotechnology, 2010, 11, 58- 4. Адамс М. Бактериофаги. – М.: Изд.ин. литературы,1961. – 527с.

5. Тихоненко А.С. Ультраструктура вирусов бактерий. – М.: Наука, 1968. – 89с.

6. Ackermann H.W., Dubow M.S. Viruses of prokaryotes. V.1. General properties of bacteriophages. CRC Press, Boca Raton, FL., 1987. - p. 96.

BACTERIOPHAGES IN SALMONELLOSIS CHICKENS

Key words: e, bterphge, tbt, hke, prevet, tretet Gve the reut f the tuy f bg prperte f bterphge S. Etert, S.

Typhuru S. Gru, we the pr f the t t f phge tbt fr Se.

ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКИЕ ПРЕПАРАТЫ БАКТЕРИОФАГОВ:

КРАТКИЙ ОБЗОР

Лыско К.А., Игнатьев Г.М., Отрашевская Е.В.

ФГУП «НПО «Микроген» Минздрава России, г. Москва Ключевые слова: антибактериальные препараты, антибиотики, антибиотикорезистентность, бактериофаги, бактериальные инфекции, производство, фаготерапия.

В обзорной статье приведены основные черты, характеризующие современное состояние производства и применения лечебно-профилактических препаратов бактериофагов в России и за рубежом. редставлен перечень выпускаемых препаратов бактериофагов, очерчена область применения, приведены конкретные примеры использования препаратов в клинической практике и в комплексе противоэпидемических мероприятий. Также сформулированы основные преимущества препаратов бактериофагов в сравнении с препаратами антибиотиков.

В ноябре 2009 года в Москве в рамках круглого стола «Эра антибиотиков заканчивается: альтернативные возможности в антибактериальной терапии» представителем объединенБактериофаги в медицине и ветеринарии ной рабочей группы ECDC и EMEA был особо отмечен тот факт, что в период с 70-х по 90-е годы прошлого века не было открыто ни одного нового класса антибиотиков. Лишь в 2000-х годах появились препараты класса циклических липопептидов и оксазолидинонов. Например, линезолид был допущен в медицинскую практику в США в апреле 2000 года. Но мутанты, устойчивые к данному препарату, стали выявляться в клиниках меньше, чем через год [1].

Экономический ущерб, наносимый возникновением антибиотикорезистентных форм бактерий, исчисляется десятками и сотнями миллионов долларов [2]. В сложившейся ситуации достойную альтернативу антибиотикам в терапии множества заболеваний бактериального происхождения способны составить бактериофаги (фаги), которые уже имеют историю успешного применения в мировом масштабе.

Бактериофаги широко применялись для лечения различных заболеваний с 20-х годов ХХ века как в СССР, так и за рубежом: в США, Канаде, в странах Западной и Восточной Европы, странах Ближнего Востока и Африки. Даже не смотря на начало «эры антибиотиков» в 50ых годах производство нескольких фаговых препаратов для медицинского использования продолжилось в Западной Европе, США, Африке.

Сегодня промышленное производство лечебно-профилактических препаратов осуществляется в Российской Федерации и Грузии. В польском центре препараты бактериофагов нарабатываются в ограниченном количестве для экспериментальной терапии. В 2010 – 2011 годах начато производство бактериофагов на Украине. Компанией Intralytix Inc. в 2008 году была завершена фаза I клинических испытаний препарата бактериофагов, содержащего восемь фагов, специфически лизирующих P. erug, S. ureu и E.. Показана безопасность препарата при лечении венозных язв. В 2007 году специалисты Novolytics Limited начали работы по созданию интраназальных мази и капель для профилактики и лечения внутригоспитальных инфекций, вызываемых метициллин-резистентными S. ureu (MRSA). Проведение клиничеMRSA). ).

ских исследований данных препаратов планировалось в 2009 году, но на сегодняшний день более подробная информация отсутствует. В 2008 году была завершена фаза II клинических исследований поливалентного препарата бактериофагов BioРhage-PA, показавшая его эффективность и безопасность. Препарат предназначен для терапии хронических отитов, вызываемых антибиотикорезистентными штаммами P. erug. В марте 2009 компания получила разрешение на проведение фазы III клинических исследований. [3-8].

В последнее время и в России набирают обороты исследования в области бактериофагов [9, 10]. Так, НПЦ «МикроМир» разработан лечебно-профилактический препарат бактериофагов для профилактики и лечения гингвита и пародонтита «Фагодент». Информации о составе препарата в открытых источниках нами не обнаружено. Так же отсутствуют сведения о данном препарате в Государственном реестре лекарственных средств. В начале 2013 года ФБУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора получено свидетельство о государственной регистрации специализированного пищевого продукта для диетического (профилактического) питания «Фудфаг». В гигиенической характеристике указано, что БАД обладает специфической литической активностью в отношении 5 видов бактерий. На конференции докладывалось, что разработанная БАД показана для профилактического применения декретированному контингенту, занятому на пищевых производствах и предприятиях общественного питания.





Т.о., единственным производителем лечебно-профилактических препаратов бактериофагов на территории России является ФГУП «НПО «Микроген» Минздрава России. На производственных площадках в городах Уфа, Пермь и Нижний Новгород лечебно-профилактические препараты бактериофагов производятся с 40-х годов прошлого века по сей день.

Производство лекарственных средств осуществляется под контролем государственБактериофаги в медицине и ветеринарии ных органов, что гарантирует качество, безопасность и эффективность препаратов бактериофагов. Кроме того, коллекция производственных штаммов бактерий ежегодно обновляется, т.е. препараты бактериофагов регулярно адаптируются к актуальным циркулирующим бактериальным возбудителям.

В России и странах СНГ препараты бактериофагов применяют для профилактики и лечения широкого спектра заболеваний (таблица 1).

Таблица 1 - Лечебно-профилактические бактериофаги Наименование пре- Спектр антибактериальОбласть применения Бактериофаг сальSe Sergrup ABCDE Лечение и профилактика гнойных инфекStpyu ureu и ряд ций кожи, слизистых, вызванных стафиБактериофаг стафи- других видов коагулазоо- лококками, а также при дисбактериозах.

трицательных стафило- Применяется для лечения циститов, холелококковый Бактериофаг стрепStreptu, Eteru также дисбактериозов. Обработка послетококковый Бактериофаг протейPrteu vugr, rb а также при дисбактериозах. Применяетный Бактериофаг коли Бактериофаг синегPeu erug для лечения абсцессов, хирургических нойный Бактериофаг колии лечение кольпитов колипротейной этиP. vugr, rb протейный Пиобактериофаг поStphyu, Eter- Лечение и профилактика различных ливалентный u, энтеропатогенная E. форм гнойно-воспалительных и энтеральных заболеваний. Применяется для Пиобактериофаг Stphyu, Eterкомплексный (Секu, энтеропатогенная E.

стафаг) Интести-бактериофаг ний: дизентерии, сальмонеллеза, диспепP.vugr, rb, S. u- Препараты бактериофагов используются в клинической практике наряду с антибиотиками. Интересен тот факт, что в некоторых случаях фаговые препараты превосходят другие антибактериальные препараты по активности в отношении антибиотикорезистентных возбудителей. Бактериофаги не вызывают побочных токсических и аллергических реакций и не имеют противопоказаний. Кроме того, они применяются при лечении ряда заболеваний беременных женщин в сочетании с другими лечебными препаратами [1, 11 - 15].

Использование препаратов бактериофагов стимулирует активизацию факторов специфического и неспецифического иммунитета [16-18, 1]. Поэтому фаготерапия особенно эффективна при лечении хронических воспалительных заболеваний на фоне иммунодепрессивных состояний. Бактериофаги не препятствуют реализации лечебного действия других препаратов (антибиотики, пробиотики, синбиотики) и не чувствительны к их воздействию [19, 17].

Бактерии родов Kebeа, Eherh, Prteu, Peu, Stphyu, Streptu относятся к разряду внутригоспитальных и являются причиной хирургических и кишечных инфекций, урогенитальной патологии, гнойно-септических и энтеральных заболеваний. Летальность при этих инфекциях достигает 30-60%. Вместе с тем лечение данных заболеваний затруднено высокой частотой (50-95%) антибиотикорезистентности, проявлением токсических и многочисленных аллергических реакций, а также осложнениями в виде явлений дисбактериоза [19-21]. В то же время многолетняя клиническая практика применения Бактериофаги в медицине и ветеринарии препаратов бактериофагов при данных инфекционных заболеваниях свидетельствует об их эффективности в 77 – 93% случаев [21-23].

В августе 2009 года корпорацией Nestl Nutrition были инициированы клинические исследования по изучению безопасности и эффективности применения бактериофага E.

в терапии кишечных инфекций детей в возрасте от 6 до 60 месяцев. [24, 25]. Вследствие безвредности и ареактогенности препаратов бактериофагов возможно их применение в педиатрической практике, в т.ч. и у новорожденных детей [22, 26].

Широкое распространение фагов в природе значительно упрощает (как по трудоемкости, так и по срокам и стоимости) процесс создания новых лекарственных препаратов к различным патогенам. Т.о., фаговая терапия может рассматриваться как перспективное направление современной медицины.

1. Катер Э., Сулаквелидзе А. Бактериофаги: биология и практическое применение – М.: Научный мир, 2012. – 640 с.

2. European Centre for Disease Prevention and Control [Electronic resource]-Mode acess:

http://www.ecdc.europa.eu/en/publications/Publications/ 0909_TER_The_Bacterial_Challenge_ Time_to_React.pdf.

3. A. Sulakvelidze et al. Bacteriophage Therapy. // Antimicrobal Agents and Chemotherapy – 2001. – Vol. 45, №3. – P. 649 – 659.

4. A. Wright, C.H. Hawkins et al. A controlled clinical trial of a therapeutic bacteriophage preparation in chronic otitis due to antibiotic-resistant Pseudomonas aeruginosa; a preliminary report of efficacy. // Clinical tolaryngology - 2009. – Vol. 34 Issue 4. - Р. 349 – 357.

5. A service of the U.S. National Institutes of Health [Electronic resource]. – Mode acess:http:// www.clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT00945087?term=bacteriophage+preparation&rank=1.

6. Intralytix Inc. [Electronic resource].–Mode acess: http://www.intralytix.com/Intral_Products_ListShield.htm 7. Novolytics Limited [Electronic resource].–Mode acess: http://www.novolytics.co.uk/ technology.html 8. U.S. Food and Drug Administration [Electronic resource]. – Mode acess: http://www.

fda.gov/Food/FoodIngredientsPackaging/GenerallyRecognizedasSafeGRAS/GRASListings/ ucm154675.htm 9. Зурабов А.Ю. Создание отечественной коллекции бактериофагов и принципы разработки лечебно-профилактических фаговых препаратов / Зурабов А.Ю. и др. // Биомедицина.

– март 2012. - №1. - с. 134 – 138.

10. Алешкин А.В. Бактериофаги в качестве нового класса консервантов и биологически активных добавок к пище в профилактике инфекционных заболеваний / Алешкин А.В. и др. //Материалы IV Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням, Москва, 26-28 марта 2012 г. – Москва. 2012. – с. 16.

11. Захарова Ю.А. Использование бактериофагов у беременных с пиелонефритом: автореф. дис. … канд. мед. наук / Захарова Юлия Александровна. - Пермь, 2004. – 19 с.

12. Кисина В.И. и др. Фаготерапия воспалительных урогенитальных заболеваний у женщин // Вестник дерматологии и венерологии. – 1996. - № 5. – С. 45-48.

13. Падруль М.М., и др. Микробиологическая диагностика инфекций мочевых путей у женщин при беременности и использование препаратов бактериофагов при данной патологии.

Методические рекомендации. Пермь, 2007. – с. 29.

14. Трушков А.Г. Фагопрофилактика как метод предупреждения инфекционно-воспаБактериофаги в медицине и ветеринарии лительных осложнений при абдоминальном родоразрешении: автореф. дис. … канд. мед. Наук / Трушков Андрей Геннадьевич. – Пермь, 2003. – 21 с.

15. Акимкин В.Г. и др. Клинико-эпидемиологические особенности нозокомиального сальмоннелеза у больных с хирургической патологией. – Магнитогорск: ООО «АС», 2008. – 172 с.

16. Биопрепараты и ведущие направления их лечебно-профилактического применения: монография / Алсынбаев М.М. и др. – Уфа: РИО филиала «Иммунопрепарат» ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ, 2008. – 100 с.

17. Султанов Н.М. Антибактериальная активность и клиническая эффективность препарата пиобактериофага поливалентного очищенного при лечении хронического гнойного риносинусита: дис. … канд. мед. Наук / Султанов Назиф Мударисович; науч. рук. Н.Н. Ворошилова, Н.А. Арефьева Н.А.; ГОУВПО «Башкирский государственный медицинский университет». - Уфа, 2007. – 113 с.

18. B. Weber-Dabrowska, M. Zimecki, M. Kruzel et al. Alternative therapies in antibioticresistant infection. // Advances in Medical Sciences – 2006. – Vol. 51. – P. 242 – 244.

19. Ворошилова Н.Н. Изучение клинической эффективности препаратов бактериофагов при лечении энтеральных и гнойно-воспалительных заболеваний. / Н.Н. Ворошилова и др.

// Актуальные вопросы разработки и применения иммунобиологических и фармацевтических препаратов: материалы всероссийской конф. - Уфа. 2000. - с.87-94.

20. Карабелеш Е.Е., Ткаченко С.А., Панкратов С.М., Демедюк О.И. Применение бактериофагов, как концепция лечебного и профилактического направления в медицине // Актуальные проблемы транспортной медицины. – 2008. - № 1 (11). – С. 135-139.

21. Парфенюк Р.Л. Микробиологические основы пероральной фаготерапии гнойновоспалительных заболеваний: автореф. дис. … канд. биол. наук / Парфенюк Римма Леонтьевна. - Москва, 2004. – 24 с.

22. Сенцова Т.Б., Сергеева Т.В., Яцык С.П. и др. Алгоритм диагностики и лечения инфекции мочевой системы у детей. Методические рекомендации (№ 41). Москва, 2003. – 21 с.

23. Перепанова Т.С., Дарбеева О.С., Майская Л.М. и др. Бактериофаготерапия урологических инфекций. Методические рекомендации. Москва, 2007. – с. 9.

24. A service of the U.S. National Institutes of Health [Electronic resource] – Modeacess:http:// www.clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT00663091?term=bacteriophage&rank=2.

25. A service of the U.S. National Institutes of Health [Electronic resource]– Mode acess:http://www.clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT00937274?term=nestle+phage&rank=1.

26. Воротынцева Н.В. и др. Фаготерапия и фагопрофилактика острых кишечных инфекций у детей. Методические рекомендации. Москва, 1991. – с. 11.

THERAPEUTIC AND PROPHYLACTIC DRUGS BACTERIOPHAGES:

AN OVERVIEW

Lysko K.A., Ignatieff G.M., Otrashevskaya E.V.

Keywords: tbt, tbt, tbt rete, bterphge, bter fet, prut, bterphge tretet.

I revew rte preet the feture tht hrterze the urret tte f the prut ue f heth re prut bterphge Ru br. Preet ufture Бактериофаги в медицине и ветеринарии rug bterphge eete pe, pefi expe f the ue f rug prte the pex epeg eure. A tte the vtge f bterphge rug veru tbt rug.

УДК 619:

ИНДИКАЦИЯ БАКТЕРИЙ РОДА KLEBIELLA,С ПОМОЩЬЮ

СПЕЦИФИЧЕСКИХ БАКТЕРИОФАГОВ, В ОБЪЕКТАХ

ВЕТЕРИНАРНОГО НАДЗОРА

Ляшенко Е.А., кандидат биологических наук, доцент, elena-l18@mail.ru Васильев Д.А., доктор биологических наук, профессор, dav_ul@mail.ru Золотухин С.Н., доктор биологических наук, профессор, 8(8422) 55-95-47, fvm.zol@yandex.ru ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А.Столыпина»

Ключевые слова: бактериофаги, индикация, клебсиелла, бактерии.

Работа основывается на изучении использования РНФ с индикаторными бактериофагами для обнаружения бактерий рода Kebe.

В результате проведенных исследований, можно утверждать об успешном применении метода – РНФ с индикаторными бактериофагами К - 10 УГСХА и К - 81 УГСХА диагностическая чувствительность которого позволяет обнаруживать бактерии рода Kebe в минимальной концентрации 103 – 104м.к./мл за 18 – 22 часа.

Введение. Этиологическая роль клебсиелл известна при маститах, септицемиях коров, свиней, лошадей, обезьян, инфекционной диареи молодняка животных [2, 6].Альтернативой существующим методам лабораторной диагностики, которые либо не позволяют быстро идентифицировать бактерии, либо пока недоступны для большинства лабораторий, являются специфические бактериофаги [2, 3, 4, 5].

По литературным данным об использовании специфических бактериофагов для индикации бактерий сообщают ряд исследователей [2, 3, 4, 5]. Учитывая выраженную специфичность индикаторных бактериофагов и простоту количественного учета фага, был предложен метод определения патогенных бактерий из исследуемого материала без выделения чистой культуры – реакция нарастания титра фага (РНФ) [1]. Сущность РНФ в том, что если в материале присутствует искомый возбудитель, то добавленный в исследуемый материал гомологичный фаг, вступив во взаимодействие с ним, размножится и дальнейшее увеличение свободного фага укажет на наличие возбудителя. Цель исследования: изучение возможности использования РНФ с индикаторными бактериофагами для обнаружения бактерий рода Kebe.

Материалы и методы исследования. Исследованию подвергались пробы комбикорма, воды, фекалий, мяса. В качестве индикаторных бактериофагов использовали штаммы К - 10 и К - 81 серии УГСХА. Индикацию бактерий рода Kebe в объектах ветеринарного надзора проводили с помощью реакции нарастания титра фага по методике описанной В.Д. Тимаковым, Д.М. Гольдфарбом (1961), В.Я. Ганюшкиным (1988). Одновременно исследования проводили бактериологическим методом, в соответствии с правилами, представленными в «Методических указаниях по бактериологической диагностике смешанной кишечной инфекции молодняка животных, вызываемой патогенными энтеробактериями». Полученный в исследованиях цифровой материал обрабатывали с использованием стандартных программ статистического анализа «STATISTIKA».

Результаты исследований и их обсуждения. Пробы водопроводной воды, комбикорма, мяса и фекалий в количестве 5 мл(г) вносили в колбы и контаминировали бактериями рода Kebe в концентрации 105, 104, 103, 102, 101м.к./мл, заливали МПБ из расчета 10 мл бульона на 1 мл воды и ставили контроль – колбу с пробой (воды, комбикорма, мяса и фекалий) не контаминированной бактериями рода Kebe.Результат реакции учитывали по количеству образовавшихся негативных колоний фага в опытных и контрольных чашках.

Положительная реакция характеризовалась увеличением количества корпускул фага по сравнению с контролем в 5 и более раз.

Увеличение количества фагов в искусственно инфицированной водопроводной воде, представлена в табл. 1.

Таблица 1 – Увеличение количества фагов в искусственно инфицированной штаммами бактерий рода Kebe водопроводной воде Концентрация «дикого» фага По результатам проведенных исследований водопроводной воды установлено, что увеличение титра фагов К - 10 УГСХА и К - 81 УГСХА более чем в 5 раз произошло при концентрации бактерий рода Kebe 103 микробных клеток в 1 мл водопроводной воды.

Увеличение количества фага в искусственно инфицированном комбикорме, показано в табл. 2.

Бактериофаги в медицине и ветеринарии Таблица 2 – Увеличение количества фагов в искусственно инфицированном штаммами бактерий рода Kebe комбикорме Концентрация Контроль «дикого» фага В результате проведенного опыта, увеличение титра фагов К - 10 УГСХА и К - 81 УГСХА более чем в 5 раз произошло при концентрации бактерий рода Kebe 103м.к./г комбикорма, при наличии посторонней микрофлоры.

Увеличение титра фагов К - 10 УГСХА и К - 81 УГСХА более чем в 5 раз произошло при концентрации бактерий рода Kebe 103м.к./г мяса (табл. 3).

Таблица 3 – Увеличение количества фага в искусственно инфицированном штаммами бактерий рода Kebe мясе Концентрация Контроль «дикого» фага Таблица 4 – Увеличение количества фага в искусственно инфицированных штаммами бактерий рода Kebe фекалиях Концентрация «дикого» фага Из результатов опыта видно, что увеличение титра фагов К - 10 УГСХА и К - 81 УГСХА более чем в 5 раза произошло при концентрации бактерий рода Kebe 104 микробных клеток в 1 г фекалий. Такое снижение чувствительности связано с высокой обсемененностью данного объекта посторонней микрофлорой. С увеличением инкубации бактериофагов с материалом до 10 часов диагностическая чувствительность повышалась и позволяла обнаруживать указанные бактерии в концентрации 103м.к./г за 22 часа.

Полученные данные при исследовании воды, комбикорма и мяса подтверждают увеличение титра фагов более чем в 5 раз при минимальной концентрации бактерий рода Kebe 103м.к./мл. При исследовании фекалий бактерии рода Kebe обнаруживались в концентрации 104м.к./г, а с увеличением инкубации бактериофагов с материалом до 10 часов обнаруживали данные бактерии в концентрации 103м.к./г за 22 часа.

Бактериологическим методом в исследованных пробах воды, комбикорма, мяса и фекалий бактерии рода Kebe обнаруживались в концентрации 104м.к./мл за 96 часов.

Заключение. В результате проведенных исследований по обнаружению бактерий рода Kebe в контаминированных указанными микроорганизмами объектах ветеринарного надзора, можно утверждать об успешном применении метода – РНФ с индикаторными бактериофагами К - 10 УГСХА и К - 81 УГСХА диагностическая чувствительность которого позволяет обнаруживать бактерии рода Kebe в минимальной концентрации 103 – 104м.к./мл за 18 – 22 часа. Из чего следует, что РНФ является высокочувствительным методом, позволяющим обнаружить бактерии рода Kebe даже в случаях, когда выделение культуры в чистом виде практически невозможно из-за наличия большого количества посторонней микрофлоры.

1. Ганюшкин В.Я. Бактериофаги сальмонелл и их применение в ветеринарии. – Ульяновск, 1988. – 45 с.

2. Золотухин С.Н. Создание и разработка схем применения диагностических биопрепаратов на основе выделенных и изученных бактериофагов энтеробактерий: Автореф. дис. … до-ра биол. наук. – Ульяновск, 2007. – 39 с.

3. Тимаков В.Д., ГольдфарбД.М. Реакция нарастания титра фага (РНФ).– М., 1962.– 32 с.

Бактериофаги в медицине и ветеринарии 4. Молофеева Н.И. Выделение и изучение основных биологических свойств бактериофагов E. сoli 0157 и их применение в диагностике: Автореф. дис. … канд. биол. наук. – Саратов, 2004. – 20 с.

5. Пульчеровская Л.П. Выделение и изучение основных биологических свойств бактериофагов trbter и их применение в диагностике: Автореф. дис. … канд. биол. наук. – Саратов, 2004. – 21 с.

6. Семенцов В.И., и др. Клебсиеллез поросят. / В.И. Семенцов, И.А. Болоцкий, О.П.

Ольховик и др.// Ветеринария Кубани. – 2009. - № 6. - С. 15-17.

DISPLAY TYPE BACTERIA KLEBIELLA, WITH SPECIFIC

BACTERIOPHAGE, IN VETERINARY SURVEILLANCE OBJECTS

Liashenko E.A., Vasilyev D.A., Zolotukhin S.N.

Keywords: bterphge py, Kebe, bter.

geu Kebe.

tr bterphge t - 10 UGSKHA K - 81 UGSKHA gt etvty tht etet bter f the geu Kebe t u etrt f 103 - 104.k./ fr 18 - 22 hur.

УДК: 679.

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ

БАКТЕРИОФАГОВ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЬНЫХ С ИНФЕКЦИОННЫМИ

ОСЛОЖНЕНИЯМИ В КЛИНИКЕ ТРАВМАТОЛОГИИ И ОРТОПЕДИИ

Мидленко В.И.*, доктор медицинских наук, профессор Золотухин С.Н.**, доктор биологических наук, профессор тел. 8(8422) 55-95-47, fvm.zol@yandex.ru Шевалаев Г.А. *, кандидат медицинских наук, доцент, shga63@rambler.ru Ефремов И.М.*, ассистент кафедры госпитальной хирургии efremov-im@rambler.ru Пичугин Ю.В., врач рентгенолог, udgin-777@mail.ru *ФГБОУ ВПО «Ульяновский государственный университет»

**ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина»

Ключевые слова: бактериофаги, хронический остеомиелит, инфекция области хирургического вмешательства Анализ этиологической структуры возбудителей гнойных послеоперационных осложнений показал ведущую роль стафилококков в развитии этих процессов у травматологических больных, при хирургическом вмешательстве в 83% и при хроническом остеомиелите в 70% случаев.

оливалентный пиобактериофаг лизировал 78% грамположительных бактерий, в том числе полирезистентных к антибиотикам штаммов St. ureu.

Введение. Лечение инфекционных осложнений у больных в клинике травматологии и ортопедии вызывает большие трудности. Увеличение числа антибиотикорезистентных штаммов микроорганизмов способствует увеличению количества отрицательных клинических результатов лечения данной группы больных [1,2].

Анализ литературных данных показывает, что основными возбудителями инфекционных осложнений у больных травматолого-ортопедического профиля являются: грамположительные кокки - St.aureus и St.epidermidis; неферментирующие грамотрицательные палочки - Ps. aeruginosa и бактерии рода Acinetobacter spp.; энтеробактерии - Proteus spp., Enterobacter spp., Klebsiella spp., E.coli и т.д. [3].

В комплексе лечебных мероприятий, наряду с хирургическим вмешательством, одним из важных методов лечения инфекционных осложнений служит воздействие на этиологического агента гнойных осложнений. В практической медицине это осуществляется применением различных антибактериальных химиопрепаратов и антисептиков [4-6].

Однако применение антибиотиков не всегда возможно и оправдано, ввиду наличия побочных действий лекарственных препаратов, антибиотикорезистентности возбудителей болезни, ограничений применения в детском возрасте, наличия тяжелых сопутствующих соматических заболеваний, являющихся противопоказанием для антибактериальной терапии, высокая стоимость лекарственных препаратов.

Для лечения больных с инфекцией области хирургического вмешательства (ИОХВ) и хроническим остеомиелитом (ХО) антибиотики с успехом применяются местно в комбинации с носителем: полиметилметакрилат [8,9], ГАП-материалы [10], биодеградируемые композиции [11] и т.д.

Лечебно-профилактические бактериофаги являются одной из альтернатив антибактериальной химиотерапии [12-14]. Кроме того, имеются сообщения о более эффективном воздействии бактериофагов в комплексе с антибактериальной терапией [15], а также с озонотерапией [16].

Нами проведено изучение этиологической структуры возбудителей гнойных инфекций, выделенных из содержимого воспалительных процессов от 35 больных с послеоперационными инфекционными осложнениями, проходивших стационарное лечение во 2-ом, 3-ем и 4-ом травматологических отделениях ГУЗ «Ульяновский областной клинический центр специализированных видов медицинской помощи» в 2012 году.

Среди исследуемых больных у 30 инфекционные осложнения возникли после оперативного лечения закрытых переломов длинных трубчатых костей, у 2-х после операций на мягких тканях, у 2-х после оперативного лечения деформирующего коксартроза (тотального эндопротезирования тазобедренного сустава). Из них, у 12 больных после операций накостного остеосинтеза пластинами различной конструкции, 10 после блокируемого интрамедуллярного остеосинтеза, 4 после фасцикулярного остеосинтеза и остеосинтеза аппаратами внешней фиксации, 6 больных после тотального эндопротезирования тазобедренного сустава (цементное – 4, бесцементное – 2). У одного больного консервативное лечение переломов лодыжек осложнилось развитием гнойного остеоартрита голеностопного сустава и остеомиелитом костей, формирующих голеностопный сустав.

Помимо этого, проведен ретроспективный анализ микрофлоры, выделенной у 50 больных ХО костей конечностей. Из них у 18 больных - хронический посттравматический остеомиелит, у одной больной - первично-хронический остеомиелит Гарре, у 31 больного - хронический послеоперационный остеомиелит. Послеоперационный остеомиелит у 9 больных явился осложнением операций накостного остеосинтеза, у 11 интрамедуллярного остеосинтеза, у Бактериофаги в медицине и ветеринарии двух фасцикулярного остеосинтеза, у 6 остеосинтеза аппаратами внешней фиксации, удвух операций на мягких тканях.

Для изучения фагочувствительности возбудителей инфекционных осложнений у больных травматолого-ортопедического профиля, проанализированы результаты бактериологического исследования (in vitro) посевов из свищей и гнойно-некротических ран у 30-ти госпитальных больных, проходивших стационарное лечение в клинике травматологии и ортопедии ГУЗ «УОКЦ СВМП» в 2012 году.

Из них, у 21-го больного диагностирован ХО, у 3-х ранняя ИОХВ после металлоостеосинтеза закрытого перелома, у одного ранняя ИОХВ после операции на мягких тканях, у одного ранняя глубокая ИОХВ после эндопротезирования тазобедренного сустава, у 4-х открытые переломы длинных трубчатых костей нижних конечностей, осложненные инфекционно-воспалительным процессом. Свищи – у 13-ти больных, гнойно-некротические раны - у 17-ти больных.

Посев материала производился на стандартные питательные среды. Далее определяли родовую и видовую принадлежность микроорганизмов после выделения чистых культур возбудителей по совокупности тинкториально-морфологических, культуральных и ферментативных свойств с последующим исследованием антибиотикочувствительности выделенных штаммов диско-диффузионным методом в соответствии с методическими указаниями МУК 4.2.1980-04 «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам».

Фагочувствительность 38-ми выделенных штаммов микроорганизмов определяли в отношении поливалентного пиобактериофага «Секстафаг», из них у 32 грамположительных штаммов и у 6 грамотрицательных бактерий. Чувствительность к препарату определяли на плотных питательных средах методом «стекающая капля».

Результаты исследований. При анализе полученных данных нами установлено, что основными возбудителями ранних и поздних послеоперационных инфекционных осложнений у больных в клинике травматологии и ортопедии являются стафилококки - 83% (рис. 1).

Рис.1 - Микробный пейзаж у больных с послеоперационными инфекционными осложнениями в клинике травматологии и ортопедии 73% штаммов стафилококков нами были отнесены к виду St.aureus, остальные 27% штаммов были коагулазонегативные и принадлежали к видам St.epidermidis, St.saprophyticus, St.hominis, St.capitis. Из всех St.aureus и St.epidermidis - 28% штаммы MRSA и MRSE. Из граhominis,.capitis.

hominis, capitis.

мотрицательных неферментирующих палочек 75% были бактериями рода Acinetobacter spp.

Рис. 2 - Микробный пейзаж у больных хроническим остеомиелитом При анализе результатов изучения этиологической структуры возбудителей гнойных осложнений у больных ХО (рис. 2) установлено, что основной причиной воспалительных процессов являются также стафилококки, которые составляют 70% от общего количества выделенных штаммов бактерий. Из них 72% принадлежали к виду St.aureus, 14% - к St.epidermidis, и 14%, такие как, St.saprophyticus, St.hominis, St.capitis, St.haemolyticus, были идентифицироsaprophyticus,.hominis,.capitis,.haemolyticus, ваны как КОС.

11% штаммов St.aureus и 29% штаммов St.epidermidis были отнесены нами к MRSE.

На втором месте были грамотрицательные неферментирующие палочки. Среди них 57% бактерии вида Ps.aeruginosa, 43% принадлежали к роду Acinetobacter spp.

Третье место в этиологической структуре составили энтеробактерии: три штамма принадлжали к виду E.coli, по одному штамму Proteus vulgaris, En. Cloacae и Kl. pneumoniae.

Энтерококки выявлены в 6% случаев и были представлены видом Enterococcus feacalis. Кроме того, выделен один штамм Streptococcus piogenes.

Коринебактерии составили один процент от общего количества выделенных микробов. Грибы рода Candida выделены только у одного больного (один штамм).

По результатам исследований 78% штаммов грамположительных бактерий были чувствительны к поливалентному пиобактериофагу. Наибольшая чувствительность была отмечена у St.aureus (95% изучаемых штаммов). Меньшую чувствительность проявили КОС, что составило составила 29% от общего количества выделенных штаммов этих микроорганизмов.

Все штаммы MRSA были чувствительны к поливалентному пиобактериофагу. Три штамма стафилококков обладали устойчивостью к изучаемому препарату.

75% бактерий рода Enterococcus spp. были чувствительны к изучаемому фаговому препарату.

50% штаммов бактерий синегнойной палочки лизировались поливалентным пиобактериофагом.

Остальные штаммы синегнойной палочки, оказались устойчивыми к поливалентному пиобактериофагу и специфическому синегнойному бактериофагу.

Чувствительность к поливалентному пиобактериофагу проявили по одому штамму Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae и Streptococcus piogenes.

Выводы. 1. Основным возбудителем послеоперационных и посттравматических инфекционных осложнений у больных в клинике травматологии и ортопедии является St.aureus, обнаруженные в 73% случаев при ИОХВ, и 72% - при ХО.

2. Поливалентный пиобактериофаг – «Секстафаг» лизировал 95% бактерий St.aureus, Бактериофаги в медицине и ветеринарии 29% КОС, 75% бактерий рода Enterococcus spp. и 50% бактерий Ps. aeruginosae.

1. Афиногенова, А.Г. Микробные биопленки ран: состояние вопроса / А.Г. Афиногенова, Е.Н. Даровская // Травматология и ортопедия России. – 2011. – №3. – С. 119-125.

2. Гостев, В.В. Антибиотикорезистентность микрофлоры ран открытых переломов (II сообщение) / В.В. Гостев, З.С. Науменков, И.И. Мартель // Травматология и ортопедия России.

– 2010. – №1. – С. 33-37.

3. Гординская, Н.А. Резистентность основных возбудителей инфекции в отделении гнойной остеологии / Н.А. Гординская, Е.В. Сабирова, Н.В. Абрамова, Е.В. Дударева, В.Н.

Митрофанов // Вопросы травматологии и ортопедии. – 2012. – №2. – С. 14-17.

4. Божкова, С.А. Современные принципы диагностики и антибактериальной терапии инфекции протезированных суставов (обзор литературы) / С.А. Божкова // Травматология и ортопедия России. – 2011. – №3. – С. 126-136.

5. Кузнецов, Н.А. Современные антисептические препараты в лечении параэндопротезной инфекции / Н.А. Кузнецов, В.Г. Никитин, Е.Б. Телешова, А.А. Мильчаков // Инфекции в хирургии. – 2009. – №4. – С. 46-50.

6. Савельев, В.С. Хирургические инфекции кожи и мягких тканей. Российские национальные рекомендации / В.С. Савельев [и др.]. – 2009. – С. 90.

7. Федянин, С.Д. Рациональная антибиотикотерапия у пациентов с гематогенным и посттравматическим остеомиелитом / С.Д. Федянин // Вестник ВГМУ. – 2004. – №2. – С. 61-68.

9. Куропаткин, Г.В. Костный цемент в травматологии и ортопедии / Г.В. Куропаткин. – Самара: «Издательство Самара», «БМВ и К», 2006г. – 48с.: ил.

10. Уразгильдиев, З.И. Применение коллапана для пластики остеомиелитических дефектов костей / З.И. Уразгильдиев, О.М. Бушуев, Г.Н. Берченко // Вестник травматологии и ортопедии им. Н.Н. Приорова. – 1998. – №2. – С. 31-34.

11. Афиногенов, Г.Е. Антимикробная биодеградируемая композиция на основе высокомолекулярного поливинилпирролидона для профилактики экспериментального остеомиелита / Г.Е. Афиногенов, Р.М. Тихилов, А.Г. Афиногенова, Т.Я. Богданова, М.В. Краснова, И.В.

Козлов, Е.Н. Даровская, Л.О. Анисимова, И.К. Лебедева, Т.М. Петрова // Травматология и ортопедия России. – 2010. – №3. – С. 47-54.

12. Асланов, Б.И. Бактериофаги как факторы формирования госпитальных штаммов и средства борьбы с внутрибольничными инфекциями / Б.И. Асланов, Л.П. Зуева, В.Ю. Хорошилов // Инфекции в хирургии. – 2009. – №1. – С. 25-29.

13. Габриэлян, Н.И. Исследование антибиотико- и фагочувствительности нозокомиальных штаммов микробов, выделенных от пациентов трансплантологической клиники / Н.И.

Габриэлян, Е.М. Горская, Т.С. Спирина, С.А. Прудникова, Л.Ю. Ромашкина // вестник трансплантологии и искусственных органов. – 2011. – №3. – С. 26-32.

14. Красильников, И.В. Применение бактериофагов: краткий обзор современного состояния и перспектив развития / И.В. Красильников, К.А. Лыско, А.К. Лобастова // Сибирский медицинский журнал. – 2011. – №2. – С. 33-37.

15. Курбангалеев, С.М. Гнойная инфекция в хирургии / С.М. Курбангалеев // – М.:

«Медицина», 1985. – С. 272.

16. Чандра-Д,Мелло, Р. Методика комбинированного использования озоно- и бактериофаготерапии в комплексном лечении хронических аднекситов / Р. Чандра-Д,Мелло, Г.О. Гречканев, Н.Н. Никишин, Н.С. Перетягина // Медицинский альманах. – 2009. – №4. – С. 140-142.

MICROBIOLOGICAL SUBSTANTIATION OF BACTERIOPHAGE’S

TO TREATMENT OF PATIENTS WITH INFECTIOUS COMPLICATIONS

IN TRAUMATOLOGY AND ORTHOPAEDICS

Midlenko V.I., Zolotukhin S.N., Shevalaev G.A., Efremov I.M., Pichugin U.V.

Key words: bterphge, hr teyet, fet f the urg tervet the evepet f fet f the urg tervet trutg ptet. Stphyu w bte 83% f t f reg f urg tervet 70%f hr teyet.

Pyvet pbkterfg ye 78% f gr-ptve bter, ug utrug-rett tr f St. ureu.

УДК 619:

ИССЛЕДОВАНИЕ ЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ БАКТЕРИОФАГОВ

AEROMONAS HYDROPHILA

Насибуллин И.Р., соискатель, nir72@mail.ru Куклина Н.Г., научный сотрудник, ul_nk@mail.ru Горшков И.Г., научный сотрудник, i.o.gun@mail.ru Викторов Д.А., кандидат биологических наук, старший научный сотрудник, тел. 9084775573, viktorov_da@mail.ru Васильев Д.А., доктор биологических наук, профессор, dav_ul@mail.ru Нафеев А.А., доктор медицинских наук, nafeev@mail.ru ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А.Столыпина»

Ключевые слова: Aer hyrph, бактериофаги, диагностика, изолят фагов, литическая активность.

Статья посвящена методам изучения литической активности бактериофагов бактерий Aer hyrph, выделенных из окружающей среды в Ульяновской области. Выделенные бактериофаги проявили различную литическую активность, варьирующуюся в широких пределах.

Введение. Литическая активность является одним из биологических свойств бактериофагов, оцениваемых при их селекции для создания диагностических биопрепаратов [1, 4, 5]. Литическая активность бактериофага оценивается по его способности вызывать лизис бактериальной культуры в жидких или плотных средах и выражают это тем максимальным разведением, в котором испытуемый бактериофаг проявил свое литическое действие. Более точным методом оценки активности бактериофага является определение количества активных корпускул фага в единице объема. Активность бактериофага определяется в конкретных, стандартных условиях. Бактериофаг по отношению к одной и той же культуре, но в разных средах, так же как и при испытании его в одной среде на разных штаммах одного и того же вида бактерий, может проявлять разную литическую активность и формировать неодинаковое число Бактериофаги в медицине и ветеринарии колоний на плотной среде [2, 3]. Важными условиями при изучении литического действия бактериофагов является: состав питательной среды, особенно наличие в ней ионов кальция и магния, органических кофакторов лизиса типа триптофана, концентрация агара и толщина его слоев, возраст и количество добавляемой тест-культуры, температура инкубации посевов, ее продолжительность [5].

Материалы и методы исследований. В работе были использованы: 1 референсштамм, полученный из музея кафедры микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы УГСХА, 14 «полевых» штаммов, выделенных нами из объектов окружающей среды, 5 штаммов бактериофагов, выделенных нами из озер и рек Ульяновской области. Культуры бактерий Aer hyrph для определения литической активности бактериофагов выращивали на стандартном мясо-пептоном бульоне в течение 18-24 часов. Литическую активность селекционированных бактериофагов определяли по методу Аппельмана и Грациа [1, 2, 3, 4, 5].

Метод Аппельмана.

В ряд пробирок из нейтрального стекла одинакового диаметра наливали по 4,5 мл бульона. В первую пробирку вносили 0,5 мл исследуемого бактериофага. Затем делали последовательные разведения, перенося отдельными стерильными пипетками из пробирки в пробирку по 0,5 мл бактериофага. Использовали 10 пробирок. Из последней пробирки 0,5 мл выливали в дезраствор, затем во все пробирки вносили по 0,2 мл 18-часовой бульонной индикаторной культуры. 11-я и 12-я пробирки являются контрольными, в первой из них находится бульон и культура (без фага), во второй - бульон с бактериофагом (контроль на стерильность). Все пробирок помещали в термостат при 30 С на 18 часов. Титр фага устанавливали по последней прозрачной пробирке ряда и выражали разведением фага [2, 4]. Результаты исследований представлены в таблице № 1.

Метод агаровых слоев по Грациа. Мясо-пептонный агар 1,5 % концентрации с генцианвиолетом накануне опыта разливают по чашкам Петри в количестве 25-30 мл. Чашки, прикрытые стерильной бумагой, подсушивают в термостате или под бактерицидной лампой в течении нескольких часов. Это необходимо для абсолютной сухости чашек, так малейшее их увлажнение может исказить результаты количественного изучения фага. Затем 0,7 % агар в количестве 2,5 мл, предварительно разлитый в стерильные пробирки, расплавляют и остужают до 46-47 С. Исследуемый фаг в количестве 1,0 мл помещают в 2,5 мл 0,7 % агара, туда же помещают 0,2 мл суточной индикаторной культуры, все быстро и тщательно перемешивают вращением пробирки в ладонях и выливают на поверхность 1,5 % агара. Смесь осторожными движениями распределяют по поверхности агара, чашки для затвердения оставляют на горизонтальной поверхности на 30-40 минут, затем инкубируют в термостате в перевернутом виде в течение 18-20 часов при 30 С. После инкубации в термостате подсчитывают количество негативных колоний и умножают полученное число на степень разведения [2, 3, 4, 5]. Результаты исследований в таблице 1.

Таблица 1 - Литической активности бактериофагов Aer hyrph Заключение. Из данных таблицы следует, что литическая активность бактериофагов бактерий вида Aer hyrph по Аппельману находится в пределах от 10-5 до 10-8, а по Грациа от 5 х 105 до 2 х 108 фаговых корпускул в 1 мл. Максимальный титр у бактериофага 43-УГСХА: по Аппельману 10-8, по Грациа 2 х 108. Необходимо дальнейшее изучение этого бактериофага для создания биопрепарата на его основе.

1. Викторов Д.А. Усовершенствование методов выделения, идентификации и индикации бактерий Peu put // Автореф. дис. … канд. биол. наук. – 2011. – 22 с.

2. Ганюшкин В. Я. Бактериофаги сальмонелл и их применение в ветеринарии. Учебное пособие. – Ульяновск. 1988. – С. 12-16.

3. Гольдфарб Д. М. Бактериофагия. – М.: Медгиз, 1961. – С. 14-17.

4. Золотухин С. Н. Бактериофаги М. morganii и их применение при желудочно-кишечных заболеваниях поросят //

Автореферат дис. канд. вет. наук.- Ульяновск, 1994.

5. Ревенко И. П. Бактериофаги и их использование в ветеринарной практике. – Киев:

Урожай, 1978. – С. 18-21.

RESEARCH OF LYTIC ACTIVITY OF BACTERIOPHAGES AEROMONAS

HYDROPHILA

Nasibullin I.R., Кuklina N.G., Gorshkov I.G., Viktorov D.А., Vasilev D.А., Nafeev А.N.

Key words: bter Aer hyrph, bterphge, g, te phge yt tvty.

The rte evte t the eth f the tuy f yt tvty f bterphge f bter Aer hyrph, te fr the evret Uyvk reg. Seete bterphge hve hw vryg yt tvty tht rge wey.

УДК 619:

О ПЕРСПЕКТИВАХ ФАГОДИАГНОСТИКИ

ФЛАВОБАКТЕРИОЗОВ РЫБ

Парамонова Н.А., аспирант, paramonnat@rambler.ru Викторов Д.А., кандидат биологических наук, старший научный сотрудник, тел. 9084775573, viktorov_da@mail.ru Васильев Д.А., доктор биологических наук, профессор, dav_ul@mail.ru Золотухин С.Н., доктор биологических наук, профессор тел. 9272703480, fvm.zol@yandex.ru ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А.Столыпина»

Ключевые слова: Fvbteru pyhrphu, бактериальная холодноводная болезнь рыб, диагностика, лечение, профилактика, бактериофаги.

В работе приведён обзор литературных данных отечественных и зарубежных автоБактериофаги в медицине и ветеринарии ров, рассматривается проблема диагностики, лечения и профилактики бактериальной холодноводной болезни рыб, обусловленной Fvbteru pyhrphu. роведённый анализ указывает на актуальность разработки методов фагодиагностики и фаготерапии для названного заболевания рыб.

Среди многочисленных бактерий, ежегодно заражающих рыб, Fvbteru pyhrphu за последние годы вызывает большой интерес, как в экономической, так и в экологической сфере [20].

F. pyhrphu – тонкие, нитевидные грамотрицательные бактерии длиной 2-5 мкм, в диаметре 0,3-0,5 мкм. Образуют слизистые, блестящие, круглые, выпуклые, желтые колонии.

Для клеток характерны скользящие движения. Этот возбудитель вызывает холодноводную бактериальную болезнь (bacterial coldwater disease (BCWD)), которую впервые описал Борг в году [6]. В Европе данное заболевание называют «обжаренный синдром радужной форели»

(rainbow trout fry syndrome (RTFS)) [7].

Бактериальная холодноводная болезнь (cold-water disease, или RTSF - Rainbow trout fry syndrome), вызванная Fvbteru pyhrphu, встречается во всем мире [8]. Инфекции вызванные F. pyhrphu были обнаружены по всей Северной Америке [9], почти в каждой стране Европы [21], Австралии [23], Чили [26], Перу [15], Японии [10], Корее [13], и Турции [12]. F. pyhrphu имеет по крайней мере три основных серотипа [16].

F. pyhrphu удавалось выделить из патологического материала лососевых, сомовых, карпа, карася [14] и некоторых аквариумных рыб при температуре воды 4-10 0С.

Вирулентные формы условно-патогенных бактерий рода F.pyhrphu вызывают эпизоотии и массовую гибель при неблагоприятных или стрессовых для рыб условиях, способствующих повышению восприимчивости гидробионтов к инфекциям и усиливающих приспособляемость бактерий [4].

Смертность может составлять 90% [21], а также может быть очень низкой (1%) и непрерывной [22].

При холодноводной болезни у личинок происходит коагуляция желтка, эрозия кожных покровов и желточного мешка. Гибель личинок может достигать 50 %. У мальков отмечают потемнение окраски тела, появление характерных поражений в виде белых пятен. У сеголетков отмечают эрозию спинного и хвостового плавников, гиперемию в области анального отверстия, некроз спинного плавника, хвостового стебля с оголением скелета, нижней челюсти.

У годовиков выявляют разрушение кожи с оголением мышц на голове, челюстях, на разных участках тела, анемию и геморрагии жабр. Больные рыбы отказываются от корма. Гибель мальков, сеголетков и годовиков достигает 10-20 %. У форели первым поражается жировой плавник, который постепенно обесцвечивается к основанию. Хвостовой плавник рыбы приобретает грязно-белый цвет. Иногда разрушение хвостового плавника развивается до такой степени, что обнажаются мышцы и позвоночник. У балтийского лосося поражения кожи могут начаться на спине. У кижуча часто поражаются голова, рот и почки. Повышение температуры воды до 15—16 °С ведет к прекращению заболевания.

F.pyhrphu способны к образованию желтого пигмента, а также протеолитических ферментов, которые вызывают прямое повреждение тканей и расширение зоны поражения, что является одним из предлагаемых факторов вирулентности бактерии [18], а также выделяет эндотоксин.

При исследование пораженной кожи рыб F. psychrophilum выявились только на микротравмах, причем интактные участки кожи оставались неинфицированными. Бактерии имеют сродство к коллагену, благодаря чему при попадании на кожу мигрируют в миосепты через соединительную ткань. Впоследствии поражениераспространяется на основную мускулатуру, что приводит к развитию некротического миозита и формированию открытых язв [19].

Установлено, что бактерии могут передаваться от родителей потомству через инфицированное внутреннее содержимое икринки – так называемая вертикальная передача – и выживать даже после ее дезинфекции [10, 19], так и горизонтальным путем [17].

Имеются данные об изоляции микроорганизмов F. pyhrphu из внутреннего содержимого оплодотворенной икринки, а также из внутренних органов и половых продуктов рыб-производителей. Поэтому очень важно проведение бактериологического обследования производителей перед закладкой икры на инкубацию [3].

Подавляющее большинство изолированных штаммов бактерий F. pyhrphu чувствительны к эритромицину и тетрациклину – 83,3 и 80,0 % соответственно. Рост половины изолятов подавляла оксолиновая кислота. Более слабую чувствительность отмечали в отношении стрептомицина и гентамицина. Все выделенные штаммы F. pyhrphu были устойчивы к канамицину. Устойчивость к антибиотикам бактерий F. pyhrphu в настоящее время является серьезной проблемой [4].

Способность возбудителя холодноводной болезни образовывать оболочку, устойчивую к антибиотикам, вероятно, приводит к быстрому развитию резистентности к лечебным препаратам, а также к рецидивирующим инфекциям [24]. В настоящее время контролирование инфекций, вызванных F. pyhrphu, антибиотиками является малоэффективным методом [5].

Вышеперечисленное обуславливает научный и практический интерес к бактериям F.

pyhrphu. В значительной степени это связано с недостаточно разработанными методами индикации и идентификации данного микроорганизма при выделении из объектов внешней среды [1]. С середины прошлого столетия бактериофаги широко используются для диагностики различных бактериальных инфекций [2]. Вместе с тем, использование реакции нарастания титра фага, как быстрого и точного метода индикации бактерий, для F. pyhrphu ранее не изучалось.

В связи с этим для усовершенствования методов диагностики флавобактериозов рыб, в настоящее время коллективом авторов проводится выделение бактериофагов F. pyhrphu для их дальнейшей селекции и конструирования на их основе биопрепарата для индикации данных бактерий методом реакции нарастания титра фага.

1. Васильев Д.А. Учебно-методическое пособие по методам общей бактериологии / Д.А. Васильев, С.Н. Золотухин, Н.М. Никишина – Ульяновск, 1998. – 151 с.

2. Гольдфарб Д.М. Бактериофагия / Д.М. Гольдфарб // М.: Медгиз. – 1961. – 225 с.

3. Дзюба Е.В. Апробация системы высокочувствительной детекции патогенных микроорганизмов в аквакультуре обыкновенного карпа cyprinus carpio linnaeus, 1758 / Е.В. Дзюба [и др.]//Известия Самарского научного центра Российской академии наук - 2012. - том 14, №1(8). – С. 1883- 4. Устименко Е. А. Бактериальные инфекции у тихоокеанских лососей при искусственном воспроизводстве на камчатке // Автореф. дис. …канд. биол. Наук. – 2012. -22 с.

5. Barnes M.E. A Review of Fvbteru pyhrphu Biology, Clinical Signs, and Bacterial Cold Water Disease Prevention and Treatment /, M.E. Barnes, M.L. Brown//The pen Fish Science Journal - 2011, 4 –P.1- 6. Cipriano RC, Holt RA: Fvbteru pyhrphu, cause of Bacterial Cold-Water Disease and Rainbow Trout Fry Syndrome. Fish Disease Leaflet No. 86. United States Dept. of the Бактериофаги в медицине и ветеринарии Interior, U.S. Geological Service, National Fish Health Research Laboratory, Kearneysville, WV 2005, 1- 7. Ekman E. Natural and experimental infections with Fvbteru pyhrphu in salmonid fish. Ph.D. Thesis. Swedish University of Agricultural Sciences, Uppsala 8. Groff JM, LaPatra SE. In: Lim CE, Webster CD. Nutrition and Fish Health New York:

Haworth Press 2001; pp. 11- 9. Hesami S, Allen KJ, Metcalf D, stland VE, Maclnnes JI, Lumsden JS. Phenotypic and genotypic analysis of Fvbteru pyhrphu isolates from ntario salmonids with bacterial coldwater disease. Can J Microbiol 2008; 54: 619-29.

10. Iida Y, Mizokami A. utbreaks of coldwater disease in wild ayu and pale chub. Fish Pathol 1996; 31: 157-64.

11. Kumagai A. Bacterial coldwater disease in coho salmon. Journal of the Japanese Society of Fisheries Science 2005; 71: 645- 12. Kum C, Kirkan S, Sekkin S, Akar F, Boyacioglu M. Comparison of in vitro antimicrobial susceptibility in Fvbteru pyhrphu isolated from rainbow trout fry. J Aquat Anim Health 2008; 20: 245-51.

13. Lee KB, Heo GJ. First isolation and identification of ytphg pyhrph from cultured ayu Korea. Fish Pathol 1998; 33: 37-8.

14. Lehmann J., Mock D., Sturenberg F.J. & Bernardet J.F. (1991) First isolation of Cytophaga psychrophila from a systemic disease in eel and cyprinids. Diseases of Aquatic rganisms 10, 217Len J, valos R, Ponce M. Fvbteru pyhrphu and its pathology of alevins from the El Ingenio fish farm, Huancayo. Rev Peru Biol 2009; 15: 117-24.

16. Lorenzen E, lesen NJ. Characterization of isolates of Fvbteru pyhrphu associated with coldwater disease or rainbow trout fry syndrome II: serological studies. Dis Aquat rgan 1997; 31: 209-20.

17. Madetoja J., Nyman P. & Wiklund T. (2000) Fvbteru pyhrphu, invasion into and shedding by rainbow trout ncorhynchus mykiss. Diseases of Aquatic rganisms 43, 27- 18. Madsen, L. Comparative studies of Danish Fvbteru pyhrphu isolates:

ribotypes, plasmid profiles, serotypes and virulence / L. Madsen, I. Dalsgaard// J. Fish Dis. 2000. Vol.

23. P. 211- 19. Miwa, S. Pathogenesis of experimentally induced bacterial cold water disease in ayu Plecoglossus altivelis /S. Miwa, C. Nakayasu // Dis. Aquat. rg. 2005. Vol.67. P. 93- 20. Nicolas P, Mondot S, Achaz G, Bouchenot C,Bernardet J-F, Duchaud E: Population structure of the fish-pathogenic bacterium Fvbteru pyhrphu. Appl Env Microbiol 2008, 74: 3702. PMID: 21. Nilsen H, lsen AB, Vaagnes, et al. Systemic Fvbteru pyhrphu infection in rainbow trout ncorhynchus mykiss (Walbaum) farmed in fresh and brackish water in Norway. J Fish Dis 2011; 34: 403-8.

22. Post GP. Textbook of fish health. New Jersey; T.F.H. Publications 23. Schmidtke LM, Carson J. Characteristic of Fexbter pyhrphu isolated from Atlantic salmon in Australia. Dis Aquat rgan 1995; 21: 157- 24. Sundell, K., and T. Wiklund. Effect of biofilm formation on antimicrobial tolerance of Fvbteru pyhrphu. J Fish Dis 2011: 34: 373- 25. Taylor PW. Detection of Fvbteru pyhrphu in eggs and sexual fluids of pacific salmonids by a polymerase chain reaction assay: implications for vertical transmission of bacterial coldwater disease. J Aquat Anim Health 2004; 16: 104-8.

26. Wakabayashi H, Toyama T, Iida T. A study on serotyping of ytphg pyhrph isolated from fishes in Japan. Fish Pathol 1994; 29: 101-4.

ABOUT THE PROSPECTS OF PHAGES-DIAGNOSTICS

OF FLAVOBACTERIOSIS OF FISH

Paramonova N.А., Viktorov D.А., Vasilev D.А., Zolotukhin S.N.

Key words: Fvbteru pyhrphu, bter -wter fih ee, g, tretet, prevet, bterphge.

The pper prve revew f the pubhe t f t freg uthr, the prbe f gt, tretet prevet f bter -wter fih ee ue by Fvbteru pyhrphu ere. The y pt t the urgey f the evepet f eth phge-gt phgtherpy fr the ete ee f fih.

УДК 619:616.98:579.842.

БАКТЕРИОФАГИ В БОРЬБЕ С САЛЬМОНЕЛЛЕЗОМ ПТИЦ

Пименов Н.В., доктор биологических наук, доцент, ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И.Скрябина», тел. 8(495)3778567, pimenov-nikolai@yandex.ru Ключевые слова: бактериофаги, сальмонеллез птиц, лечение, оздоровление, препарат В работе изложены результаты исследований по выделению активных бактериофагов и созданию препарата против сальмонеллеза птиц. Создание бивалентного бактериофага на основе Phgu Se typhuru и Phgu Se etert, разработка технологии его биологического производства и успешная апробация фагового препарата открывают новые перспективы в противоэпизоотической борьбе с сальмонеллезом.

Введение. Сальмонеллез птиц продолжает оставаться острой проблемой для ветеринарной и гуманитарной медицины. По заключению экспертов Всемирной организации здравоохранения сальмонеллез, как зоонозная инфекция, не имеет себе равных по сложности эпизоотологии, эпидемиологии и трудностям борьбы с ней. В последние годы произошел серьезный дрейф в сторону развития у полевых штаммов сальмонелл множественной резистентности к антибиотикам. Латентно больные птицы (например, дикие и домашние голуби) могут являться причиной распространения опасного возбудителя и расширения границ эпизоотического очага, что в серьезной степени увеличивает социальную опасность [1].

Проблема антибиотикорезистентности актуализирует проблему переориентирования медикаментозных подходов при лечении сальмонеллеза от использования химиотерапевтических групп препаратов к применению других эффективных и менее опасных групп. Такими являются препараты, приготовленные на основе бактериофагов [2].

Бактериофаги в медицине и ветеринарии Материалы и методы, результаты исследований и их обсуждение. Для создания препарата бактериофагов против сальмонеллеза птиц нами по методу обогащения из сточных вод птицефабрик, пометных вод голубятен и зоопарков были выделены 39 изолятов Phagum Salmonella typhimurium. Изучили их происхождение, морфологию вирионов, морфологию колоний, активность, диапазон специфичности, спектр литической активности, что позволило отобрать, паспортизировать и депонировать производственные штаммы. Три наиболее активных штамма – Ph. S. typhimurium №5 ТЗ, 8 МЕ, 9 ММ отличались высокими литическими качествами. Их литическая активность составляла 10-8-10-10 по методу Аппельмана и превосходила 107 по методу Грациа. При последующих исследованиях еще 15 бактериофагов тифимуриум паспортизированы в качестве резервных для препарата. У всех фагов отмечен максимальный спектр литического действия при специфичности литической активности к бактериям вида Salmonella enterica.

По морфологической структуре выделенные и селекционированные бактериофаги отнесены к 4 классификационной группе по Тихоненко, В1 морфотипу и семейству Siphoviridae.

Фаги 5 ТЗ и 8 МЕ обладали выраженным лизинообразованием. Кроме того, депонированные фаги обладали выраженными свойствами адсорбции на клетках хозяев. При этом наибольшие показатели скорости адсорбции – (4,96±0,05)х10-9 см3мин-1 и количества адсорбировавшихся фаговых частиц – 91,7±0,25%, отмечены у бактериофага Ph. S. typhimurium № МЕ -ДЕП, который также наиболее интенсивно формировал литический фермент.

Проведение опытов одиночного цикла развития осуществляли в трех аналоговых повторностях согласно описанному методу Эллипса и Дельбрюкка на бульонных культурах депонированных штаммов сальмонелл. Учет результатов проводили после инкубации по исследованию посевов методом агаровых слоев, произведенных с интервалом в 2 минуты в течение 1 часа.

Отмечено, что среднее число негативных колоний в разведении 1:40 составляет 30- на протяжении 22 минут (фаг 5 ТЗ), с 26 минуты отмечается выраженный рост, на 28 минуте появляются негативные колонии в чашках, засеянных из разведения 1:100, и на 30 минуте проявляется полный лизис колоний в посевах из второго разведения (1:40). Таким образом, конец латентного периода начинает проявляться на 24-25 минутах и стабилизируется за 8 минут. Т.е.

у селекционированных фагов выявлен минимальный латентный период внутриклеточного развития. Среднее число негативных колоний, полученных из разведения фага 1:100 – 132, значит, по окончании лизиса бактерий количество фаговых частиц составило 13200 в 0,1 мл материала. Средняя урожайность фагов на одну бактериальную клетку также отмечена на достаточно высоком уровне для производственных штаммов – 185-206 фаговых частиц. Таким образом, проведенные исследования определили характеристики полученным нами сальмонеллезным фагам тифимуриум, которые удовлетворяют требованиям к производственным штаммам для создания лечебно-профилактических препаратов.

Для определения степени антигенного родства производственных штаммов мы проводили исследования серологических свойств фагов, получая к ним антисыворотки методом иммунизации кроликов. Через 7-10 дней после последнего введения антигена у кроликов брали кровь из краевой вены уха и испытывали нейтрализующую активность антисывороток в разведениях 1:25-1:800. Если антисыворотка вызывала нейтрализацию свыше 90 % фаговых частиц при пятиминутном контакте, то ее активность считали приемлемой для дальнейшей работы.

Полученные гипериммунные сыворотки на производственные штаммы бактериофагов проявляли нейтрализующую активность в разведениях 1:50-1:400. Константы скорости нейтрализации фагов с гомологичными антисыворотками составили 240,21-270,26 мин-1, с гетерологичными антисыворотками – 124,42-163,67 мин-1. Т.о. было установлено, что штаммы Ph. S. typhimurium №5 ТЗ, 8 МЕ, 9 ММ являются родственными и обладают выраженной иммуногенностью.

Принимая во внимание этиологическую структуру возбудителей сальмонеллеза для разных видов птиц, было отмечено, что S. enteritidis – доминирующий этиотропный серовариант для кур, второй из значимых (хотя и в принципиально меньшем соотношении) возбудителей сальмонеллеза голубей, некоторых декоративных и водоплавающих птиц. Кроме того, серовариант S. enteritidis является основным возбудителем пищевых токсикоинфекций у человека [3]. Сальмонеллоносительство у водоплавающих, синантропных, вольерных птиц с участием S. enteritidis довольно широко распространено, что отмечено нашими наблюдениями и исследовательскими данными [4].

Для создания бивалентного бактериофага против сальмонеллеза птиц были использованы фаги к S. enteritidis, выделенные нами при исследовании по методу обогащения проб птицефабрик и депонированные нами совместно с С.В. Леневым и Ю.А. Малаховым в качестве производственных – Ph. S. enteritidis А-1, ЮН-1, ЮН-2. Их характеризует литическая активность к эталонному штамму S. enteritidis №3-2 ВГНКИ по методу Аппельмана 10-9-10-10, специфичность и широкий спектр литического действия.

Бивалентный бактериофаг против сальмонеллеза птиц готовили, производя высев в разные емкости с предварительно нагретым до 37 °С разведенным 1:5 МПБ суспензий 6-часовой культуры штамма Salmonella typhimurium М-2ф t-ДЕП и фильтрата каждого из бактериофагов: Ph. S. typhimurium №5 ТЗ, 8 МЕ, 9 ММ, а также суспензий 6-часовой культуры S.

enteritidis 25 Яв e-ДЕП и фильтрата каждого из бактериофагов Ph. S. enteritidis А-1, ЮН-1, ЮН-2.

Фаговый препарат готовили поэтапно. Культивирование фагов на молодых культурах сальмонелл проводили 18 часов, после чего осуществляли очистку биологического препарата бактериофагов от биологической массы сальмонелл, остатков клеток и компонентов питательной среды.



Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 8 |
Похожие работы:

«ФГБОУ ВПО Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия Научно-исследовательский инновационный центр микробиологии и биотехнологии Ульяновская МОО Ассоциация практикующих ветеринарных врачей АКТУАЛЬНЫЕ ПРОБЛЕМЫ ИНФЕКЦИОННОЙ ПАТОЛОГИИ И БИОТЕХНОЛОГИИ Материалы V-й Всероссийской (с международным участием) студенческой научной конференции 25 – 26 апреля 2012 года Ульяновск – 2012 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии УДК 631 Актуальные проблемы инфекционной...»

«Российская Академия Наук Институт географии РАН Геологический институт РАН Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова Палинологическая комиссия России Комиссия по эволюционной географии Международного географического Союза Палинологическая школа-конференция с международным участием МЕТОДЫ ПАЛЕОЭКОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ (Москва, 16-19 апреля 2014) Тезисы докладов International Palynological Summer School METHODS OF PALAEOENVIRONMENTAL RESEARCHES (Moscow, April, 16-19, 2014) Book...»

«16.11.2013 (суббота) Регистрация, кофе, плюшки 8:30-9:30 Открытие конференции 9:30-10:30 Проректор по обеспечению реализации образовательных программ и осуществления научной деятельности по направлениям география, геология, геоэкология и почвоведение СПбГУ С.В. Аплонов Декан факультета географии и геоэкологии Н.В. Каледин Зав. кафедры гидрологии суши Г.В. Пряхина ООО НПО Гидротехпроект А.Ю. Виноградов Организационный Комитет Л.С. Лебедева Посвящение Ю.Б. Виноградову 10:30-11:00 Т.А. Виноградова...»

«CBD Distr. GENERAL КОНВЕНЦИЯ О БИОЛОГИЧЕСКОМ UNEP/CBD/COP/8/3 РАЗНООБРАЗИИ 19 December 2005 RUSSIAN ORIGINAL: ENGLISH КОНФЕРЕНЦИЯ СТОРОН КОНВЕНЦИИ О БИОЛОГИЧЕСКОМ РАЗНООБРАЗИИ Восьмое совещание Куритиба, Бразилия, 20-31 марта 2006 года Пункт 9 предварительной повестки дня* ДОКЛАД О РАБОТЕ ОДИННАДЦАТОГО СОВЕЩАНИЯ ВСПОМОГАТЕЛЬНОГО ОРГАНА ПО НАУЧНЫМ, ТЕХНИЧЕСКИМ И ТЕХНОЛОГИЧЕСКИМ КОНСУЛЬТАЦИЯМ СОДЕРЖАНИЕ Страница ПУНКТ 1 ПОВЕСТКИ ДНЯ. ОТКРЫТИЕ СОВЕЩАНИЯ ПУНКТ 2 ПОВЕСТКИ ДНЯ. ОРГАНИЗАЦИОННЫЕ...»

«Камчатский филиал Тихоокеанского института географии (KФ ТИГ) ДВО РАН Камчатский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства и океанографии (КамчатНИРО) Биология Численность Промысел Петропавловск-Камчатский Издательство Камчатпресс 2009 ББК 28.693.32 Б90 УДК 338.24:330.15 В. Ф. Бугаев, А. В. Маслов, В. А. Дубынин. Озерновская нерка (биология, численность, промысел). Петропавловск-Камчатский : Изд-во Камчатпресс, 2009. – 156 с. В достаточно популярной форме представлены научные данные о...»

«Труды VI Международной конференции по соколообразным и совам Северной Евразии ОСЕННЯЯ МИГРАЦИЯ СОКОЛООБРАЗНЫХ В РАЙОНЕ КРЕМЕНЧУГСКОГО ВОДОХРАНИЛИЩА М.Н. Гаврилюк1, А.В. Илюха2, Н.Н. Борисенко3 Черкасский национальный университет им. Б. Хмельницкого (Украина) 1 gavrilyuk.m@gmail.com Институт зоологии им. И.И. Шмальгаузена НАН Украины 2 ilyuhaaleksandr@gmail.com Каневский природный заповедник (Украина) 3 mborysenko2905@gmail.com Autumn migration of Falconiformes in the area of Kremenchuh...»

«Материалы международной научно-практической конференции Бактериофаги: Теоретические и практические аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой промышленности Том I Ульяновск - 2013 Материалы международной научно-практической конференции Бактериофаги: Теоретические и практические аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой промышленности / - Ульяновск: УГСХА им. П.А. Столыпина, 2013, т. I - 184 с. ISBN 978-5-905970-14-6 Редакционная коллегия: д.б.н., профессор Д.А. Васильев...»

«CBD Distr. GENERAL КОНВЕНЦИЯ О БИОЛОГИЧЕСКО UNEP/CBD/COP/8/11/Rev.1 2 February 2006 М РАЗНООБРАЗИИ RUSSIAN ORIGINAL: ENGLISH КОНФЕРЕНЦИЯ СТОРОН КОНВЕНЦИИ О БИОЛОГИЧЕСКОМ РАЗНООБРАЗИИ Восьмое совещание Куритиба, Бразилия, 20–31 марта 2006 года Пункт 12 предварительной повестки дня * ДОКЛАД ИСПОЛНИТЕЛЬНОГО СЕКРЕТАРЯ ОБ АДМИНИСТРАТИВНОМ ОБЕСПЕЧЕНИИ КОНВЕНЦИИ И БЮДЖЕТЕ ЦЕЛЕВЫХ ФОНДОВ КОНВЕНЦИИ Записка Исполнительного секретаря ВВЕДЕНИЕ 1. На своем седьмом совещании Конференция Сторон в пункте 28...»

«Институт биологии Коми НЦ УрО РАН РЕГИСТРАЦИОННАЯ ФОРМА КЛЮЧЕВЫЕ ДАТЫ Коми отделение РБО Заявка на участие и тезисы докладов в электронном виде 1.02.2013 Министерство природных ресурсов и охраны Фамилия Второе информационное письмо 1.03.2013 окружающей среды Республики Коми Оплата оргвзноса 15.04.2013 Имя Управление Росприроднадзора по Республике Коми Регистрация участников Отчество и открытие конференции 3.06. ФИО соавтора (соавторов) Представление материалов БИОРАЗНООБРАЗИЕ ЭКОСИСТЕМ для...»

«CBD Distr. GENERAL КОНВЕНЦИЯ О БИОЛОГИЧЕСКОМ UNEP/CBD/COP/8/12 РАЗНООБРАЗИИ 15 February 2006 RUSSIAN ORIGINAL: ENGLISH КОНФЕРЕНЦИЯ СТОРОН КОНВЕНЦИИ О БИОЛОГИЧЕСКОМ РАЗНООБРАЗИИ Восьмое совещание Куритиба, Бразилия, 20–31 марта 2006 года Пункты 13 и 20 предварительной повестки дня* РЕЗЮМЕ ВТОРОГО ИЗДАНИЯ ГЛОБАЛЬНОЙ ПЕРСПЕКТИВЫ В ОБЛАСТИ БИОРАЗНООБРАЗИЯ Записка Исполнительного секретаря 1. В пункте 8 а) решения VII/30 Конференция Сторон поручила Исполнительному секретарю при содействии со стороны...»

«CBD Distr. GENERAL КОНВЕНЦИЯ О UNEP/CBD/COP/6/3 БИОЛОГИЧЕСКОМ 27 March 2001 РАЗНООБРАЗИИ RUSSIAN Original: ENGLISH КОНФЕРЕНЦИЯ СТОРОН КОНВЕНЦИИ О БИОЛОГИЧЕСКОМ РАЗНООБРАЗИИ Шестое совещание Гаага, 8-19 апреля 2002 года Пункт 9 предварительной повестки дня* ДОКЛАД ВСПОМОГАТЕЛЬНОГО ОРГАНА ПО НАУЧНЫМ, ТЕХНИЧЕСКИМ И ТЕХНОЛОГИЧЕСКИМ КОНСУЛЬТАЦИЯМ О РАБОТЕ ЕГО ШЕСТОГО СОВЕЩАНИЯ СОДЕРЖАНИЕ Пункт Пункты Стр. повестки дня 1. ОТКРЫТИЕ СОВЕЩАНИЯ 2. ОРГАНИЗАЦИОННЫЕ ВОПРОСЫ 3. ДОКЛАДЫ 4. ИНВАЗИВНЫЕ...»

«ИНФОРМАЦИОННОЕ ПИСЬМО N 1 НАУЧНО-ОБЩЕСТВЕННЫЙ КООРДИНАЦИОННЫЙ ЦЕНТР ЖИВАЯ ВОДА НАУЧНО-ОБРАЗОВАТЕЛЬНЫЙ ЭКОЛОГИЧЕСКИЙ ЦЕНТР БПИ ДВО РАН ООО Экологическое бюро Эко-Экспертиза Дорогие друзья! Приглашаем Вас принять участие в VIII Дальневосточной экологической конференции школьных и студенческих работ Человек и биосфера. В 2011 году наша конференция расширяет сферу влияния, включая регион Сибири, и приглашает к ЗАОЧНОМУ участию всех заинтересованных. Заочная конференция будет оценивать письменные...»

«Учреждение образования Брестский государственный университет имени А.С. Пушкина Мониторинг окружающей среды Сборник материалов II Международной научно-практической конференции Брест, 25–27 сентября 2013 года В двух частях Часть 1 Брест БрГУ имени А.С. Пушкина 2013 2 УДК 502/504:547(07) ББК 20.1 М77 Рекомендовано редакционно-издательским советом учреждения образования Брестский государственный университет имени А.С. Пушкина Рецензенты: доктор геолого-минералогических наук, профессор М.А....»

«НАЦИОНАЛЬНАЯ АКАДЕМИЯ НАУК УКРАИНЫ СОВЕТ БОТАНИЧЕСКИХ САДОВ И ДЕНДРОПАРКОВ УКРАИНЫ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР ЭКОМОНИТОРИНГА И БИОРАЗНООБРАЗИЯ МЕГАПОЛИСА НАЦИОНАЛЬНЫЙ БОТАНИЧЕСКИЙ САД ИМ. Н.Н. ГРИШКА Международная научная конференция РОЛЬ БОТАНИЧЕСКИХ САДОВ И ДЕНДРОПАРКОВ В СОХРАНЕНИИ И ОБОГАЩЕНИИ БИОЛОГИЧЕСКОГО РАЗНООБРАЗИЯ УРБАНИЗИРОВАННЫХ ТЕРРИТОРИЙ 28-31 мая 2013 года Первое информационное письмо КИЕВ – 2012 ГЛУБОКОУВАЖАЕМЫЕ КОЛЛЕГИ! Приглашаем вас принять участие в работе Международной научной...»

«АССОЦИАЦИЯ СПЕЦИАЛИСТОВ ПО КЛЕТОЧНЫМ КУЛЬТУРАМ ИНСТИТУТ ЦИТОЛОГИИ РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ НАУК ISSN 2077- 6055 КЛЕТОЧНЫЕ КУЛЬТУРЫ ИНФОРМАЦИОННЫЙ БЮЛЛЕТЕНЬ ВЫПУСК 27 CАНКТ-ПЕТЕРБУРГ 2011 ISSN 2077- 6055 УДК 576.3, 576.4, 576.5, 576.8.097, М-54 Клеточные культуры. Информационный бюллетень. Выпуск 27. Отв. ред. М.С. Богданова. - СПб.: Изд-во Политехн. ун-та, 2011. - 94 с. Настоящий выпуск содержит информацию об основных направлениях фундаментальных и прикладных исследований на клеточных культурах, о...»

«МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РФ ФГБОУ ВПО БАШКИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПЕДАГОГИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМ. М.АКМУЛЛЫ СОВРЕМЕННЫЕ АСПЕКТЫ ИЗУЧЕНИЯ ЭКОЛОГИИ РАСТЕНИЙ Уфа 2013 МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РФ ФГБОУ ВПО БАШКИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПЕДАГОГИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМ. М.АКМУЛЛЫ СОВРЕМЕННЫЕ АСПЕКТЫ ИЗУЧЕНИЯ ЭКОЛОГИИ РАСТЕНИЙ Материалы Международного дистанционного конференции-конкурса научных работ студентов, магистрантов и аспирантов им. Лилии Хайбуллиной Уфа УДК 581. ББК 28. С Современные...»

«CBD Distr. GENERAL КОНВЕНЦИЯ О UNEP/CBD/COP/7/21 БИОЛОГИЧЕСКОМ 13 April 2004 РАЗНООБРАЗИИ RUSSIAN ORIGINAL: ENGLISH КОНФЕРЕНЦИЯ СТОРОН КОНВЕНЦИИ О БИОЛОГИЧЕСКОМ РАЗНООБРАЗИИ Седьмое совещание Куала-Лумпур, 9-20 и 27 февраля 2004 года ДОКЛАД О РАБОТЕ СЕДЬМОГО СОВЕЩАНИЯ КОНФЕРЕНЦИИ СТОРОН КОНВЕНЦИИ О БИОЛОГИЧЕСКОМ РАЗНООБРАЗИИ СОДЕРЖАНИЕ Страница ВВЕДЕНИЕ. ПУНКТ 1 ПОВЕСТКИ ДНЯ. ОТКРЫТИЕ СОВЕЩАНИЯ Приветственное обращение министра наук и, технологии и окружающей 1. среды Малайзии Дато Сери Ло...»

«Уважаемые коллеги! Миркин Б.М., д.б.н., профессор, Башкирский Оргкомитет планирует опубликовать научные гос. университет материалы конференции к началу ее работы. Приглашаем Вас принять участие в работе П е н ч у ко в В. М., а к а д е м и к РАСХ Н, Для участия в работе конференции Международной научной конференции необходимо до 1 февраля 2010 года Ставропольский гос. аграрный университет Теоретические и прикладные проблемы П е т р о в а Л. Н., а к а д е м и к РА С Х Н, н ап р а в и т ь...»

«НИИЦМиБ ФГБОУ ВПО Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина Кафедра микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ВСЭ Научно-исследовательский инновационный центр микробиологии и биотехнологии АКТУАЛЬНЫЕ ПРОБЛЕМЫ ИНФЕКЦИОННОЙ ПАТОЛОГИИ И БИОТЕХНОЛОГИИ Материалы VI-й Международной студенческой научной конференции, посвящённой 70-летию ФГБОУ ВПО Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина 14 – 15 мая 2013 года Часть I Ульяновск – 2013 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии НИИЦМиБ ФГБОУ ВПО...»

«UNEP/CBD/COP/7/21 Страница 112 Приложение РЕШЕНИЯ, ПРИНЯТЫЕ СЕДЬМЫМ СОВЕЩАНИЕМ КОНФЕРЕНЦИИ СТОРОН КОНВЕНЦИИ О БИОЛОГИЧЕСКОМ РАЗНООБРАЗИИ Решение Страница VII/1. Биологическое разнообразие лесов 113 VII/2. Биологическое разнообразие засушливых и субгумидных земель 114 VII/3. Биологическое разнообразие сельского хозяйства 124 VII/4. Биологическое разнообразие внутренних водных экосистем 125 VII/5. Морское и прибрежное биологическое разнообразие 159 VII/6. Процессы проведения оценок 216 VII/7....»









 
2014 www.konferenciya.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Конференции, лекции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.