WWW.KONFERENCIYA.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Конференции, лекции

 

Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |   ...   | 8 |

«Том II Ульяновск - 2013 Материалы международной научно-практической конференции Бактериофаги: Теоретические и практические аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой ...»

-- [ Страница 3 ] --

Следующим этапом осуществляли центрифугирование при 6000 об./мин. в течение 30 минут, фильтрацию через системы бактериальных фильтров Шамберленда и приготовление концентрированной суспензии бактериофагов. В качестве контроля служили отсутствие роста при посеве суспензии бактериофагов в разведенный МПБ и рост сальмонеллы без фагов по выраженной мутности питательной среды. Концентрированную суспензию бактериофагов контролировали по методу Аппельмана, доводя концентрацию до уровня 108 фаговых частиц в 1 см3 среды.

В качестве консерванта приготовленной суспензии фагов применяли раствор хинозола до его конечной концентрации в фаголизате – 0,01%. Готовый препарат формировали смешиванием консервированных суспензий бактериофагов в соотношении 1:1:1:1:1:1, после чего проводили расфасовку, упаковку, маркировку и контроль препарата бивалентный бактериофаг против сальмонеллеза птиц.

Контроль экспериментальных серий препарата на стерильность осуществляли высевом на МПА, в МПБ, среды Китта-Тароцци и Сабуро.

Отмечены высокие результаты при постановке контролей на активность бивалентного бактериофага, осуществленных на белых мышах и голубях при подкожном инфицировании, для чего лабораторным объектам внутримышечно вводили культуры S. typhimurium M-2ф t -ДЕП (1 группа), S. enteritidis 25 Яв e -ДЕП (2 группа) в дозах по 5 LD50 и смесь культур по 2, LD50 (3 группа), а спустя 20 минут – препарат. Наблюдение и учет заболевших и павших голубей с бактериологическим исследованием проводили в течение 14 дней.

Результаты исследования активности бивалентного бактериофага против сальмонелБактериофаги в медицине и ветеринарии леза птиц в остром лабораторном опыте на мышах и голубях показали их сохранность 90- % при сохранности в контрольных группах без фагообработки – 0-10 %. При этом единичные летальные случаи в опытных группах могли быть спровоцированы высокой дозой экзо- и эндотоксинов введенных сальмонелл, т.к. гибель по 1 голубю отмечали в первые 1-2 суток после начала эксперимента при введении S. enteritidis или смеси с ее присутствием. Причем от погибших голубей в опытных группах сальмонеллу не выделяли, при этом в контроле ее выделяли из материала, как от трупов, так и от клинически здоровых голубей.

Препараты сальмонеллезных фагов: как в моноисполнении, так и в виде бивалентного бактериофага против сальмонеллеза птиц, способы их производства и применения были успешно апробированы в условиях птицеферм, голубятен, зоопарков, частных подворий и вольеров для содержания птиц различных видов, неблагополучных по сальмонеллезу.

Основываясь на представленных материалах, Бактериофаг тифимуриум против сальмонеллеза голубей, бивалентный бактериофаг против сальмонеллеза птиц и способ лечения сальмонеллеза птиц при помощи этих препаратов были внедрены в практику и рекомендованы ветеринарным специалистам. Препарат против сальмонеллеза голубей и способ лечения сальмонеллеза голубей запатентованы. Фаговые препараты рекомендованы для борьбы с сальмонеллезом птиц, что нашло отражение в одобренных Департаментом ветеринарии МСХ РФ «Рекомендациях по диагностике, профилактике и ликвидации сальмонеллеза кур» [5], «Рекомендациях по диагностике, профилактике и ликвидации сальмонеллеза голубей» [6].

Заключение. Резюмируя вышеизложенное необходимо отметить, что возвращение препаратов на основе активных бактериофагов в практику ветеринарной медицины при борьбе с сальмонеллезом птиц является перспективным направлением противоэпизоотической работы, особенно в условиях множественной антибиотикорезистентности возбудителя и ограничительных требований по применению химиотерапевтических препаратов для профилактики и лечения болезней в птицеводстве.

1. Данилевская В.Н., Пименов Н.В. Проблема антибиотикорезистентности на примере лечения сальмонеллеза у домашних голубей//Российский ветеринарный журнал, 2005, №4, с.

21-24.

2. Ленев С.В. Сальмофаг энтеритидис//Состояние, проблемы и перспективыразвития ветеринарной науки в России: Сб. мат-лов науч. сессии РАСХН/ Под ред. А.М. Смирнова. – М.:

РАСХН, 1992, с. 258-259.

3. Михаэль А. Сальмонеллез – вопросы и ответы?//Сб. докладов VI Междунар. вет.

конгресса по птицеводству, 26-29 апреля 2010, М., 2010, с. 114-121.

4. Кузьмин В.А. Сальмонеллезная инфекция в условиях птицефабрик, методы профилактики и оздоровления: Автореф… дис. докт. вет. наук. – СПб: СПбГАВМ, 1995, 16 с.

5. Куриленко А.Н., Пименов Н.В., Ленев С.В., Малахов Ю.А., Яковлев С.С. Рекомендации по диагностике, профилактике и ликвидации сальмонеллеза кур. – М.: МСХ-МГАВМиБ, 2002, 34 с.

6. Пименов Н.В., Куриленко А.Н., Чиркова И.В., Яковлев С.С. Рекомендации по диагностике, профилактике и ликвидации сальмонеллеза голубей. – М.: МСХ; «МегАрт», 2008, 43 с.

BACTERIOPHAGES AGAINST AVIAN SALMONELLOSIS

Key words: bterphge, e br, tretet, rehbtt, ee The rte preet the reut f reerh the reee f the tve bterphge the ret f ee gt e br. retg bvet bterphge be Ph.

S. typhuru Ph. S. etert, the evepet tehgy f t’ bg prut uefu tetg f phge preprt pe ew prpet tepzt gt e.

УДК 576.9+579.842./4.598.2/.

ИССЛЕДОВАНИЕ ФАРМАКОКИНЕТИКИ САЛЬМОНЕЛЛЁЗНЫХ

БАКТЕРИОФАГОВ В ОРГАНИЗМЕ ЦЫПЛЯТ КРОССА ИЗА

Пугачев В.Г., заведующий сектором; Тотменина О.Д., научный сотрудник;



Тимакова О.И., инженер; Агиенко А.И., студентка ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор», р.п. Кольцово, Новосибирской области тел. 8(383)363-47-79, pugachev@vector.ncs.ru Юшков Ю.Г., кандидат ветеринарных наук; Леонов С.В., научный сотрудник;

Селиверстова Н.А., младший научный сотрудник ГНУ ИЭВСиДВ Россельхозакадемии, п. Краснообск, Новосибирской области тел. 8(383)348-39-31, 348-39-31@mail.ru Ключевые слова: бактериофаг, сальмонелла, птицеводство, фаготерапия.

В работе исследовали распределение бактериофагов по органам и тканям цыпленка при выпаивании суспензии бактериофага здоровым птицам и инфицированным сальмонеллой.

Результаты исследования показали, что фаги быстро распространяются по органам цыплёнка при оральном введении и постепенно выводятся в отсутствие бактерий для размножения. Через 20 часов фаговые частицы остаются только в кишечнике. В случае заражения сальмонеллой бактериофаги концентрируются и размножаются в тканях печени, в селезенке и в кишечнике. Значительное увеличение концентрации бактериофага к 20 часам показывает, что в органах идет размножение на специфичных бактериях патогена.

В настоящее время бактериофаги находят широкое применение в медицине, ветеринарии и биотехнологии. Узкая специфичность действия на бактериальную микрофлору, способность избирательно воздействовать на патогенные микроорганизмы, позволяет использовать их для диагностики, профилактики и лечения человека, животных и птиц.

Возникновение антибиотикорезистентных штаммов микроорганизмов предполагает поиск новых препаратов для борьбы с ними. Современные лечебно-профилактические препараты бактериофагов составлены из вирулентных фагов широкого диапазона действия, активных и в отношении бактерий, устойчивых к антибиотикам.

Спектр негативного влияния применения антибиотиков в сельском хозяйстве настолько широк (аллергенность, токсичность, селекция антибиотикорезистентных штаммов), что Бактериофаги в медицине и ветеринарии правительства ряда стран с 1998г проводят политику, направленную на максимальное ограничение, а в перспективе – и на полный запрет применения антибиотиков в сельском хозяйстве.

[1] Появление антибиотикорезистентных штаммов микроорганизмов привело к неэффективности лечения бактериальных болезней у животных, к увеличению заболеваемости и смертности и, как следствие, к продолжительному бактерионосительству. Антибиотикорезистентность появляется у многих видов возбудителей, в том числе таких как Escherichia coli, Salmonella, Staphylococcus.[2] В связи с ограничениями, вводимыми на применение антибиотических препаратов, еще более актуальным является вопрос о включении бактериофагов в противоэпизоотические мероприятия в промышленном птицеводстве. Поэтому в ветеринарной практике все более широкое применение находят экологически безопасные методы лечения, которые в комплексе с другими лечебными мероприятиями часто дают более высокий терапевтический эффект. К последним относят и бактериофаготерапию.[3] Значительная доля всех инфекционных болезней в птицеводстве приходится на болезни бактериальной этиологии. На первом месте стоит колибактериоз (49%), а затем микоплазмоз, сальмонеллез (25%), пастереллез.[4, 5, 7].

Целью настоящей работы явилось изучение распределения бактериофагов по органам и тканям цыпленка при выпаивании суспензии бактериофага здоровым птицам и инфицированным сальмонеллой.

Материалы и методы. В работе использовали бактериофаги – Ps-1 и Ps-2, выделенные из стоков и напольной подстилки птицефабрики и селектированные на штаммах №465 и №105.[6,8] Штаммы сальмонелл - Se etert - №465 и Se gru - № – выделены и охарактеризованы в лаборатории болезней птиц ГНУ ИЭВСиДВ.

Бактериофаги Ps-1 и Ps-2 размножали на специфичных штаммах №465 и №105, лизаты были очищены фильтрованием. Литическую активность проверяли на ряде коллекционных штаммов.

Суспензию бактериофагов с концентрацией 108б.о.е./мл выпаивали 3-х суточным цыплятам в количестве 2-3 108б.о.е. В контрольную партию входили здоровые цыплята, а опытная партия состояла из цыплят, предварительно инфицированных штаммами сальмонелл.

Органы забирали через 2, 4, 6, 8 и 20 часов после выпаивания суспензии фагов. Далее ткани взвешивали, гомогенизировали и суспендировали в физиологическом растворе. Полученную суспензию высевали на агаризованные питательные среды для проверки на наличие сальмонелл, к оставшейся суспензии добавляли хлороформ (2%), осветляли центрифугированием и аликвоты раскапывали на агар из чувствительной культуры. Чашки инкубировали при 370С, 20 часов.

Таблица 1 - Специфичность выделенных фагов к коллекционным и лабораторным штаммам микроорганизмов.

Штаммы микроорганизмов Таблица 2 - Чувствительность выделенных штаммов к антибиотикам.

Результаты. В процессе работы были выделены два бактериофага, специфичных штаммам сальмонелл №465 и №105. Литическая активность бактериофагов проверяли на коллекционных штаммах. В таблице 1 показано, что бактериофаги Ps-1 и Ps-2 имеют достаточно узкую специфичность.

Штаммы сальмонелл №465 и №105 проверили на чувствительность к антибиотикам.

Результаты представлены в таблице 2.

Исследование органов цыплят контрольной группы показало, что уже через 2 часа фаговые частицы распределяются по тканям печени, селезенки и кишечника. В пробах, отобранных через 4, 6 и 8 часов, также найдены фаговые частицы в кишечнике и печени, к 20 часам фаг остается только в кишечнике и обнаружен лишь у одной особи из двух.





При исследовании органов цыплят экспериментально инфицированных штаммами сальмонелл и пропоенных суспензией бактериофага мы наблюдали несколько иную картину.

В первых пробах (2 часа и 4 часа) при использовании 1 модели: штамм №105 – РS-2 – фага не обнаружено, а в модели 2: штамм №465 – РS-1 – количество фага в органах значительно меньше по сравнению с контрольными образцами. Однако к 20 часам картина кардинально меняется: в модели 1 наблюдается накопление фаговых частиц во всех исследуемых органах до концентрации 5-7 104 б.о.е./г ткани, а в модели 2 - найдены во всех исследуемых органах, Таблица 3 - Распределение бактериофагов по органам цыплят.

Органы Группа птиц предварительно инфицированная РS-1 (модель2) Бактериофаги в медицине и ветеринарии но с меньшей концентрацией - до 1-3 104 б.о.е./г. Результаты представлены в таблице 3.

Заключение. При введении препарата бактериофага цыплятам методом выпаивания бактериофаг обнаруживается в органах цыплёнка через 2 часа, постепенно выводится из тканей органов и через 20 часов остаётся только в кишечнике. При заражении птицы сальмонеллой бактериофаги концентрируются и размножаются в тканях печени, в селезенке и в кишечнике. Значительное увеличение концентрации бактериофага к 20 часам показывает, что в органах идет размножение на специфичных бактериях патогена.

1. Скобликов Н.Э. КубГАУ, №78(04), 2012г.

2. Антибиотикорезистентность сальмонелл, выделенных у домашних голубей / Н.В.

Пименов, Н.В. Данилевская. - // Ветеринария. - 2006. - № 9. - С.20-24.

3. Бактериофаги: биология и практическое применение / под ред. Э. Каттер, А. Сулаквелидзе. – М.: Научный мир, 2012. –640 с.

4. Бобылева Г.А. Состояние и перспективы развития отрасли птицеводства// VI Межд.

ветер. конгр. по птицев.(апрель 2010 г., М.).-М., 2010.- С.7-14.

5. Мельникова А.А. III Межд. Ветер. Конгр. по птицев, (апрель 2007г), Москва.

6. Методики клинических лабораторных исследований: Справочное пособие. Том 3.

Клиническая микробиология / под ред. В.В. Меньшикова. – М.: Лабора, 2009. – 880 с.

7. Эпидемиологический надзор за сальмонеллезной инфекцией. Методические рекомендации (Рачковская Ю.К., и др.) – Л., 1987.- 26 с.

8. Цыганова C.B. Выделение бактериофагов против возбудителей бактериальных болезней птиц и изучение их биологических свойств: авт. дисс. канд. вет наук.- СПб, 2009. - 23 с.

PHARMACOKINETIC STUDIES OF SALMONELLA PHAGES

IN CHICKEN CROSS AZI

Pugachev V.G., Totmenina O.D., Timakova O.I., Agienko A.I., Leonov S.V., Seliverstova N.A., Yushkov Yu.G.

Key words: bterphge, Se, putry, phgtherpy fter ufete fete wth Se br were fe wth upe f bterphge.

The reut hwe tht the phge quky pre t rg f hke wth the r wy f trut gruy pper the bee f bter t utpy. After 20 hur phge prte re y the tete. I the e f fet wth Se bterphge re etrte utpy the tue f the ver, the pee, the tete. A gfit ree the etrt f bterphge t 20 hur hw tht utpt f phge the pefi pthge bter wth the rg f fete hke urre.

CREATING A WWWW COLLECTION OF THERAPEUTIC

BACTERIOPHAGES ACTIVE AGAINST GLOBAL

BACTERIAL INFECTIONS

Rakin A., Max von Pettenkofer-Insititut, LMU, Munich, Germany Bacteriophages are natural predators of bacteria also those pathogenic to humans. Phages outnumber bacteria at least tenfold and are the most abundant life form on the Earth. Typically phages are highly specific and demonstrate narrow host ranges oftheir lytic activity restricted to single bacterial clones. Phages together with the sensitive bacteria form predator-prey pairsinevolutionary arms racethat tends to keep the populations of both species in unbalanced equilibrium. Thus phages and bacteria must have a history of previous contacts and interactions and physically close to each other. Accordinglyphages isolated in certainplaces may not be active against bacterial strains isolated from the other locations simply due to the fact that they do nothave such a history of previous interactions. n the other hand, if bacteria from one part of the globe are successfully attacked by the phages isolated from the other part, this meanseither a global dissemination of the bacterial-phage pair or an extremely wide phage host range due to commonly used receptors.

We have tested the sensitivity of 65 clinical bacterial pathogens including MRSA, multiple resistant Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumanii and Klebsiella pneumoniae, carbapenem resistant Escherichia coli and Enterobacter cloacae, as well as vancomycin resistant Enterococcus faecium isolated in Singapore hospitals against a collection of the corresponding resident bacteriophages isolated from the waste waters of Munich. Although some specieslike MRSA and Pseudomonas demonstrated 80% and 90% sensitivity to the locally isolated phage preparations, respectively; 80% Kl. pneumonia and 80% E. coli were resistant to the corresponding phages. Moreover all tested Acinetobacter and E. cloacae strains were resistant to the phages previously isolated in Germany.

We have used different water samples from Munich waste water collectors to isolate phages active against the phage-resistant bacteria isolated in Singapore. We have successfully isolated lytic phages to the representatives of each group of the pathogenic bacteria. The phages demonstrated different host ranges and activities. The DNAs of the collected lytic bacteriophages were NG sequenced, their genomes assembled and compared to the phage DNAs presented in the available public databases. Such detailed characterization of the therapeutic bacteriophages allow us covering both potential threats present in the phage genomes and epidemiological and evolutionary linkages of these abundant life forms.

Thus, Munich waste waters already contain phages active against bacterial cultures isolated in Singapore hospitals that make it possible to establish a representative well characterized “worldwide” collection of therapeutic bacteriophages active against both locally and globally disseminated pathogenic microorganisms.

Бактериофаги в медицине и ветеринарии УДК 579.842.23:578.1:575.

МОЛЕКУЛЯРНОЕ ТИПИРОВАНИЕ (RAPD-АНАЛИЗ) ДНКСОДЕРЖАЩИХ БАКТЕРИОФАГОВ ПАТОГЕННЫХ ИЕРСИНИЙ

Романова Л.В., доктор биологических наук, с.н.с., alexvod@gmail.com Мишанькин Б.Н., доктор медицинских наук, вед.н.с.

Кудрякова Т.А., доктор медицинских наук, вед.н.с., Бородина Т.Н., Македонова Л.Д., Гаевская Н.Е., Качкина Г.В.

ФКУЗ Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора Ключевые слова: ДНК-содержащие бактериофаги, универсальные праймеры, однопраймерная ЦР (RAPD-анализ), генотипическая характеристика бактериофагов иерсиний оказана возможность применения метода О-ЦР (RAPD-анализ), для генотипической характеристики ДНК-содержащих бактериофагов патогенных иерсиний. одбор оптимального набора праймеров будет способствовать углубленному анализу фагов на межвидовом и внутривидовом уровнях.

Введение. Одной из основных проблем медицинской микробиологии, имеющей теоретическое и практическое значение, является разработка новых методов диагностики и дифференциации возбудителей бактериальных и вирусных инфекций, которые позволили бы установить источник инфекции, изучить механизмы и пути передачи возбудителя, резервуары и ареалы его распространения. Использование в эпидемиологическом анализе рутинных методов диагностики и типирования возбудителей, основанных на выявлении фенотипических признаков, часто неэффективно. Тогда как молекуляро-биологические методики позволяют надежно устанавливать степень гомологии или, наоборот, расхождения между отдельными микроорганизмами. Открытие ПЦР [1], ее внедрение в практику микробиологических и особенно эпидемиологических исследований внесли огромный вклад информации в этой области.

Обычно классический метод ПЦР предусматривает амплификацию ДНК с использованием специфических олигонуклеотидных праймеров. Однако, существует и другой способ амплификации ДНК в ПЦР, это так называемая однопраймерная ПЦР (ОП-ПЦР) с использованием универсальных, или случайных (random), праймеров. В зарубежной литературе этот способ амплификации обозначают - RAPD (random amplified polymorphic DNA) [2,3,4,5,6]. Каждые из выбранных праймеров или их комбинация дают возможность обнаружить специфические микролокусы в геноме изолята, которым свойственна различная степень нуклеотидной изменчивости на внутри - и межвидовом уровне.

Классификация бактериофагов на данном этапе является сложным и одним из наиболее трудных разделов современной биологии, так как бактериальные вирусы имеют эволюционно выработанные, присущие им структурные и биологические особенности. Современный этап развития систематики бактериофагов характеризуется расширением круга таксономических подходов, созданием системы, основанной на данных молекулярной биологии. Поэтому для повышения достоверности при выявлении тонких внутривидовых различий между фагами может оказаться полезным использование новых молекулярно-биологических методических приемов.

Материалы и методы исследований. В своих исследованиях по генотипированию возбудителей особо опасных заболеваний и их бактериофагов мы использовали преимущественно однопраймерный вариант ПЦР и следующий набор универсальных праймеров: Ap – GTG GAT GCG A [7], 45 – TGA CCG GCA GCA AAA TG [3], 2 –ATT GCG TCC A [8], pUC/ M13 [9].

Исследовали ДНК следующих бактериофагов: 1030, 1055 (выделены из Y.pestis), 12253, 10623, 2339 (выделены изY.pseudotuberculosis), 5531, 43, 12374, 826, 1998, 5423, 19 (выY.pseudotuberculosis), делены изY.enterocolitica). ДНК фагов изолировали, как описано [10]. Качество нативной ДНК и результаты ПЦР контролировали электрофорезом в 5 %-ном полиакриламидном геле в аппарате для электрофореза типа «Midget» (Hoefer Scientific Instrument, США) в присутствии маркеров, представляющих собой смесь MspI-гидролизата плазмидной ДНК pUC19 и PstIгидролизата ДНК фага l.

Амплификацию проводили на амлификаторе «Терцик» производства «ДНКТехнология» (Москва) в следующем режиме: 940С (денатурация) - 15 сек; 420С (отжиг) – сек; 720С (синтез) – 15 сек (всего 40 циклов). Инкубационная смесь (15мкл) для ПЦР содержала 20 mM трис-HCl, рН 8,6; 7mM MgCl2; 10 mM (NH4)2S4; 0,5mM EDTA; 100 мкг/мл бычьего сывороточного альбумина, по 250 мкМ каждого из дезоксинуклеозидтрифосфатов (Serva), 0,1мкМ соответствующего праймера, 2 ед. Taq-полимеразы и 1-10 нг ДНК исследуемого фага.

Результаты исследований и их обсуждение. Исследования показали, что использованные праймеры оказались способны амплифицировать последовательности хромосомной ДНК исследуемых бактериофагов и образовывать ПЦР - профили в виде фрагментов ДНК количеством от 15 до 2 и размером от 1650 до 170 п.н. (Рис.1,2).

При использовании праймера АР7 (Рис.1) наблюдали следующее: картины распределения фрагментов ДНК чумных и псевдотуберкулезных фагов очень похожи как по их числу (примерно 11-12, в диапазоне 1650-100 п.н.), так и по интенсивности свечения полос. Имеются небольшие различия в картине амплификации ДНК псевдотуберкулезных фагов – у фага нет одной из сдвоенных полос в районе 690 п.н., присутствующей у фагов 12253 и 2339. Что касается амплификации ДНК фагов Y.enterocolitica, то для каждого вида наблюдали свою ему присущую картину распределения фрагментов. Диапазон полос распределялся от 1450 до п. н. с различной интенсивностью свечения.

Рис. 1 - Амплификация ДНК бактериофагов патогенных видов иерсиний с праймером АР7: М –маркер молекулярных весов (М1 – Bg I-гидролизат ДНК фага ); дорожка 1 – ДНК фага12253; 2 -10623; 3 -2339 (выделены из Y.peutuberu); 4 - 1030; 5 -1055 (выделены из Y.pet); 6-5531; 7-43; 8-12374; 9-826; 10-1998; 11-5423; 12- 19 (выделены изY.etert).

Бактериофаги в медицине и ветеринарии При использовании в амплификации праймера 45 (Рис.2) ДНК псвдотуберкулезных фагов давала большее количество ампликонов, чем в случае Ар7 – их было 14-15. Картина амплификации у трех изученных видов почти одинаковая с небольшими различиями по минорным полосам, кроме того у фага 10623 наблюдали сдвоенную интенсивно светящуюся полосу в районе 500 – 400 п.н. Картина распределения ампликонов чумных фагов резко отличалась от таковой как для псевдотуберкулезных фагов, так и внутри вида. Ампликон фага 1030 отличался от ампликона фага 1055 по следующим признакам – у 1055 наблюдаются мощные полосы в районе 780 и 404 п.н., у 1030 присутствует фрагмент размером 1140 п.н., которого нет у 1055, также у 1030 имеются минорные полосы в районе 210 и 186 п.н., которых нет у ДНК фага 1055. Амликоны ДНК фагов выделенных от Y.enterocolitica сильно отличаются от амликонов чумных и псевдотуберкулезных фагов (как по картине распределения фрагментов, так и по интенсивности свечения полос). Каждый фаг внутри вида имеет свою индивидуальную картину распределения полос. Например, у фага 5429 наблюдали только одну мощную полосу в районе 1140 п.н., а у фага 19 фрагментов было 10 в диапазоне 1250-210 п.н.

Рис. 2 - Амплификация ДНК бактериофагов патогенных видов иерсиний с праймером 45: М –маркер молекулярных весов (М1 – Bg I-гидролизат ДНК фага, М2- HIII- гидролизат ДНК фага ); дорожка 1-5531; 2-43; 3-12374; 4-826; 5-1998; 6-5423; 7- 19 (выделены изY.etert); 8–ДНК фага12253; 9 -10623; 10 -2339 (выделены из Y.peutuberu);

11 - 1030; 12 -1055 (выделены из Y.pet).

Амплификация с праймером 2 и pUC/M13 (данные не представлены) выявила таM кие же различия между чумными, псевдотуберкулезными фагами и фагами, выделенными из Y.enterocolitica. Чумные и псевдотуберкулезные фаги сильно отличаются по числу амплифиenterocolitica.

enterocolitica.

цированных фрагментов (у первых их много меньше -4-5 к 10-11). Кроме того, псевдотуберкулезные фаги 12253 и 10625 отличаются от фага 2339 по числу ампликонов – у последнего их больше -11.

Заключение. Таким образом, проведена генотипическая характеристика (паспортизация) каждого из изученных изолятов и выявлены различия на видовом и внутривидовом уровнях, которая проявляется в различной картине ПЦР ампликонов. Исследование показало возможность применения ОП-ПЦР для углубленной генотипической характеристики ДНК бактериофагов различных видов патогенных иерсиний, что, возможно, позволит уточнить таксономию ряда новых фагов, имеющих сходный цикл развития, морфологию и антигенную структуру, и предложить новый подход к их классификации и идентификации. Дальнейшие исследования по генотипированию фагов с использованием праймеров различной длины будут способствовать подбору оптимальных вариантов набора праймеров для проведения углубленного анализа фагов на межвидовом и внутривидовом уровнях.

1. Mullis K.B., Faloona F.A. Specific synthesis of DNA in vitro via a polymerase-catalyzed chain reaction // Methods Enzymol. - 1987. - Vol.155. - P. 335-350.

2. Williams J.G.K., Kubelik A.R., Livak K.J. et al. DNA polymorphisms amplified by arbitrary primers are useful as genetic markers // Nucl. Acids Res. - 1990. - Vol.18. - P. 6531-6535.

3. Булат С.А., Кабоев О.К., Мироненко Н.В. Полимеразная цепная реакция с универсальными праймерами для изучения геномов // Генетика. - 1992. -Т. 28, №5. - С. 19-28.

4. Lin M., Payhe D.A., Schwaez J.R. Intraspecific divercity of Vibrio vulnificus in Galveston Bay wate and uster as determined by randomly amplified polymorphic DNA PCR // Appl. Environ.

Microbiol. - 2003. - Vol.69, N.6. - P. 3170-3175.

5. Лукин Е.П., Воробьев А.А., Малеев В.В., Быков А.С.Лукин, Е.П. Молекулярно-генетическое разнообразие риккетсий // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. - 2006.

- №1. - С. 92-99.

6. Викторов Д.В., Захарова И.Б., Меринова Л.К., Алексеев В.В. Молекулярное типирование штаммов Burkholderia pseudomallei с различной чувствительностью к антибиотикам // Мол. генет., микробиол. и вирусол. - 2006. -№1. - С. 7-11.

7. Marticocian G., van Belkum W., van Lecuwen А. et al. PCR ribotyping and arbitrarily primed PCR for the comparison of enterotoxigenic Bacteroides fragilis strains from two Polish university hospital // Clinic.Microbiol. Infect.- 1997.- Vol.3.- N.1.- P.102-106.

8. Berche P., Poyart C., Abachin E. et al. The novel epidemic strain 139 is closely related to the pandemic strain 1 of Vibrio cholerae // J. Infect. Dis. -1994. - Vol.170. - N.3. - P. 701-704.

9. Валидов Ш.З., Панькова Н.В., Козлова Е.В. и др. Схема быстрого выделения и идентификации Lactobacillus plantarum с использованием НП-ПЦР// Микробиология.-1998.Т.67,№3.-С.384-390.

10. 10. Yamamoto K.R., Alberts B.M., Berzinger R., Lawhorne L., Treiber G. Rapid bacteriophage sedimentation in the presence of polyethylene glycol and its application to large-scale virus purification // Virology. - 1970. - Vol.40, N.3. -P. 734-744.

MOLECULAR TYPING (RAPD-ANALISIS) OF PATOGENIC YERSINIA

DNA-CONTAININGE BACTERIOPHAGES

Romanova L.V., Mishankin B.N., Kudriakova T.A., Borodina T.N., Makedonova L.D., Gaevskaya N.E., Kachkina G.V.

Key words: DNA-tg bterphge, r prer, e-prer PR (RAPD getype hrtert f yer bterphge rre ut ug e-prer PR (RAPD - ). It w hw tht e-prer PR be ue fr the getype hrtert f the DNA-tg bterphge. The eet f the ptu prer et wu prve the prgre the terpee trpee tuy f the phge.

Бактериофаги в медицине и ветеринарии УДК 619:

ОПЫТ ПРИМЕНЕНИЯ НЕТРАНСДУЦИРУЮЩИХ БАКТЕРИОФАГОВ

ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ТЕРАПИИ

КИШЕЧНОГО ЭШЕРИХИОЗА СВИНЕЙ

Скобликов Н.Э., кандидат медицинских наук ГНУ Северо-Кавказский научно-исследовательский институт животноводства Россельхозакадемии (СКНИИЖ) тел. 8(918)4989891, skoblikow@yandex.ru Зимин А.А., кандидат биологических наук ФГБУН Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им.Г.К.Скрябина 8(4967)730479, zimin@ibpm.pushchino.ru Ключевые слова: бактериофаги, трансдукция, колибактериоз, свиньи, биобезопасность, фаготерапия,фагопрофилактика роведено сравнительное исследование различных схем применения нетрансдуцирующих фагов для поросят с пост-отъёмным синдромом в целях повышения сохранности поголовья, сокращения продолжительности протекания пост-отъёмной диареи, улучшения показателей динамики коли-титра. Установлено, что оптимальной схемой является их трёхкратное (с интервалом в три дня) применение в дозировке 1,01010 БОЕ на голову животным 28-дневного возраста.

Введение. Начиная с первой работы по изучению эффективности применения бактериофагов в лечении эшерихиозной диареи свиней [1], опубликовано значительное количество исследований, посвящённых исследованиям фаготерапии инфекций, вызванных представителями семейства Eterbteree и вида Eherh в частности [2]. Несмотря на высокую эффективность бактериофагов в отношении данной группы возбудителей [3], на пути широкого распространения бактериофагов возникает ряд проблем, среди которых одной из самых серьёзных является их способность к трансдукции и изменению генетических свойств в сторону расширения арсенала факторов патогенности [4].

В медицине важность определения трансдуцирующего потенциала фагов [5] признана одним из критериев отбора эффективных и безопасных бактериофагов [6], в то время как важность этого признака в аналогичных работах исследователей в области ветеринарии до последнего времени обходили вниманием. Тем более, отсутствуют данные по изучению эффективности нетрансдуцирующих бактериофагов на моделях инфекций сельскохозяйственных животных.

Материалы и методы исследований. Получение препаративных количеств нетрансдуцирующих фагов, отобранных из обширной рабочей коллекции в ходе предыдущих работ, реализовывали с помощью методов биотехнологии. Всего было отобрано пять фагов. Для подбора оптимальной схемы применения vv был взят один фаг (условный лабораторный № 3), выделенный из одного из природных водоёмов Приморского края, идентифицированный как фаг T4-типа семейства Myvre, отрицательный по наличию гена h (гена, кодирующего иммуноглобулиноподобный белок капсида).

После инкубации на культуре E. B, фаг был сконцентрирован методом центифугирования, в результате чего была получена опытная партия экспериментального фагового препарата в виде взвеси фаговых частиц. Титр фага определяли методом агаровых слоёв контрольным высевом на культуру чувствительного штамма E., измеряя его в количестве бляшкообразующих единиц (БОЕ) на мл взвеси. Концентрация фага в полученных таким образом экспериментальных препаратах колебалась в пределах от 1,0109 до 1,41010 БОЕ/мл.

Опыт vv был проведён на поросятах породы СМ-1. Были сформированы 7 групп животных (по 30 голов в каждой группе), отличающиеся по возрасту первого приёма экспериментального фагового препарата: группы №№ 1-2 – на 28-й день, группы №№ 3-4 – на 19-й день, группы №№ 5-6 – на 10-й день. В состав группы № 7 (контрольной) входили гнёзда с поросятами всех возрастов. Животным групп №№ 1-6 вводился экспериментальный фаговый препарат per из расчёта 1,01010 БОЕ (группы №1, №3, №5) на голову и 1,0109 БОЕ (группы №2, №4, №6) на голову с периодичностью 1 раз в трое суток в течение 7 дней (всего по введения на голову) (таблица 1).

Таблица 1 - Схема опыта по выяснению оптимальной схемы применения кспериментальных коли-фаговых препаратов для профилактики пост-отъёмного синдрома поросят (=30) № Дозировка препарата Возраст первого приёма Препарат вводили с помощью аппарата Шилова утром, вскоре после кормления ( – 1000). Общий период наблюдения за животными составил 10 дней. В течение всего периода эффективность фагового препарата оценивалась по сохранности поголовья в гнёздах, клиническому состоянию поросят (сроку продолжительности диареи после отъёма) и лабораторным данным титра энтеробактерий в фекалиях поросят.

Результаты исследований и их обсуждение. При подборе оптимальных доз препарата опирались на полученные ранее в предварительных опытах vv на мышах данные, согласно которым применение бактериофагов в титре не менее 105 на 1 грамм массы животного приводит к эффективной элиминации эшерихий из кишечника. При учёте того, что средний вес поросят-отъёмышей составил около 25 кг, необходимая доза препарата составила бы 2,5109 БОЕ на голову.

По результатам исследования по подбору оптимальной схемы введения (дозировка, возраст первого применения) экспериментального фагового препарата, выяснилось, что применение фагов в возрасте 28-34 дней обеспечило 100-процентную сохранность в группах независимо от дозировки фага. В то же время, в группах, получавших фаг в возрасте 19-25 дней, сохранность (96,2 % и 96,8 %) не превышала контрольный показатель (96,0 %) (таблица 2).

Бактериофаги в медицине и ветеринарии Таблица 2 - Результаты опыта по выяснению оптимальной схемы применения кспериментальных коли-фагов ( = 30) * – Количество суток со дня отъёма (32-й день), в течение которых в группах наблюдалась диарея Также выяснилось, что продолжительность периода диареи у животных почти у всех опытных групп сократилась по сравнению с контрольной группой (6 сут.). Наименьшей (3 – сут.) она оказалась у животных, получавших фаг в возрасте 28-34 дней. При этом стоит подчеркнуть, что полностью избежать явления диареи не удалось ни в одной из опытных групп.

Что касается динамики коли-титра, то у всех групп, получавших фаг, отмечалось снижение содержания E. после отъёма (к 34-ому дню) с последующим ростом к 37-му дню, а у животных контрольной группы в периоде отъёма не отмечалось снижения содержания E.

на 34-й день.

Интересно, что динамика коли-титра животных опытных групп отличалась своеобразием в зависимости от возраста первого применения фага. Так, у животных, получавших фаг в возрасте 10-16 и 19-25 дней, содержание E. к 31-му дню более, чем на 0,5 порядка превышало этот показатель у других групп (включая контрольную). Эти же группы отличались значительным разбросом показателя коли-титра в течение периода наблюдения: значительным (до 5,39 lg КОЕ/г) снижением в возрасте 34-х дней и значительным (до 7,69 lg КОЕ/г) повышением к 37-ому дню. Животные групп, получавших фаг в возрасте 28-34 дней, характеризовались наименьшими (в пределах 0,10 – 0,54 lg КОЕ/г) колебаниями содержания E. за весь период наблюдения. У животных этих же групп отмечались наименьшие показатели коли-титра к 37-му дню: более, чем на 0,69 lg КОЕ/г по сравнению с животными 3-й – 6-й опытных групп и на 0,84 – 0,98 lg КОЕ/г по сравнению животными контрольной группы. При этом различия показателей коли-титра на 37-й день у животных 1-й и 2-й групп были недостоверны.

Таким образом, оптимальной схемой применения фаговых препаратов являлось их трёхкратное (с интервалом в три дня) применение в дозировке 1,0109 БОЕ на голову животным 28-дневного возраста. Применение фага в большей концентрации (1,01010 БОЕ на голову) оказывает менее выраженный эффект как на продолжительность протекания постотъёмной диареи, так и на показатели динамики коли-титра. Применение фага в более ранние сроки также характеризуется меньшей эффективностью как по клинической картине, так и по лабораторно контролируемым параметрам.

Проведённое исследование позволяет сделать следующие выводы:

1. Оптимальной схемой применения нетрансдуцирующих фагов являлось их трёхкратное (с интервалом в три дня) применение в дозировке 1,0109 БОЕ на голову животным 28-дневного возраста.

2. Применение разрабатываемых нетрансдуцирующих фагов в большей концентрации (1,010 БОЕ на голову) или в более ранние сроки оказывает менее выраженный эффект как на продолжительность протекания пост-отъёмной диареи, так и на показатели динамики колититра.

3. В кишечнике поросят в пост-отъёмном периоде наблюдается нарастание титра E.

в течение 5 дней после отъёма c 6,27 lg КОЕ/г до 7,27 lg КОЕ/г; при этом на 8-й день отъёма может наблюдаться ауто-коррекция коли-титра до 6,85 lg КОЕ/г.

4. В кишечнике поросят в пост-отъёмном периоде наблюдается снижение содержания коли-фагов в течение 8 дней после отъёма c 5,53-6,08 lg БОЕ/г до 3,74-3,78 lg БОЕ/г.

1. Zhang X., McDaniel A. D., Wolf L. E. et al. Quinolone antibiotics induce Shiga toxinencoding bacteriophages, toxin production, and death in mice // J Infect Dis. 2000;181:664–670.

2. Johnson J R. Shigella and Escherichia coli at the crossroads: machiavellian masquerades or taxonomic treachery? J Med Microbiol. 2000; 49 :583–585.

3. Huff W. E., Huff G. R., Rath N. C. et al. Bacteriophage Treatment of a Severe Escherichia coli Respiratory Infection in Broiler Chickens // Avian Diseases, 2003, Vol. 47, No. 4, pp. 1399-1405;

4. Johnson J R. Shigella and Escherichia coli at the crossroads: machiavellian masquerades or taxonomic treachery? J Med Microbiol. 2000; 49 :583–585.

5. Saunders J. R., Allison H., James C. E. et al. Phage-mediated transfer of virulence genes // J. Chem. Technol. Biotechnol. 2001. 76:662–666;

6. Masatoshi Yoichi, Masatomo Morita, Katsunori Mizoguchi et al. The criterion for selecting effective phage for Escherichia coli 157:H7 control // Biochem. Engineering J. 2004. Vol. №19, pp.

221-227.

EXPERIENCE OF APPLICATION OF NON TRANSDUCING

BACTERIOPHAGES FOR PROPHYLAXY AND THERAPY

OF INTESTINAL COLIBACTERIOSIS OF PIGS

Key words: bterphge, trut, bter, pg, beurty, phge therpy, phge prphyxy bterphge fr pg wth pt-weg rrhe. It etbhe tht the pt hee t trpe (t terv f three y) t ge f ppt 1,0 1010 PFU /he fr the 28 y f ge.

Бактериофаги в медицине и ветеринарии УДК 578.81:579.

ПЕРСПЕКТИВЫ ПРИМЕНЕНИЯ БАКТЕРИОФАГОВ

В ПРОФИЛАКТИКЕ И ЛЕЧЕНИИ НОЗОКОМИАЛЬНЫХ

ОСЛОЖНЕНИЙ В ХИРУРГИИ

Слободенюк В.В.*, кандидат биологических наук, prof-v-iprim@mail.ru Воропаева Е.А.*, кандидат биологических наук,, anaerob.lab@mail.ru Алешкин В.А.*, доктор биологических наук, профессор, (495)452-18-16, Афанасьев С.С.*, доктор медицинских наук, профессор, Караулов А.В.**, член-корреспондент РАМН, доктор медицинских наук, профессор,, (903) 572-60-26, drkaraulov@mail.ru Афанасьев М.С.**, доктор медицинских наук, (916) 685-52- *ФБУН «МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского» Роспотребнадзора ** ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России Ключевые слова: перитонит, бактериофаги, микрофлора, антибиотики.

еритонит, его классификация, оценка тяжести, лечение - одни из самых насущных вопросов современной хирургии. Осуществлен поиск и применение бактериофагов, активных против бактерий, выделенных из перитонеального экссудата пациентов с перитонитами. Изучена возможность применения комбинированного фагового препарата для профилактики и лечения «нозокомиальных» перитонитов.

Введение. В подавляющем большинстве случаев перитонит является полимикробным заболеванием. При первичном перитоните, если источником перитонита является толстая кишка, то, более чем в 90% случаев определяется аэробно-анаэробная ассоциация микроорганизмов; если источником инфицирования является желудок или тонкая кишка, то такая ассоциация встречается значительно реже. Степень обсемененности брюшной полости четко коррелирует с длительностью течения перитонита. Исходный спектр микрофлоры перитонеального экссудата при вторичном перитоните, характеризуется стабильным единообразием и преобладанием высоковирулентных грамотрицательных микроорганизмов. Нерациональное применение антибактериальных препаратов приводит к существенному изменению видового состава возбудителей перитонита. При отсутствии положительной динамики в течение перитонита на протяжении 3-4 суток в ходе программируемых хирургических санаций брюшной полости практически у всех пациентов отмечалось увеличение удельного веса госпитальной микрофлоры, крайне высоко устойчивой к антибиотикам резерва. Каждый конкретный стационар характеризуется своим микробным пейзажем, однако, в последнее десятилетие многие авторы указывают на преобладание неферментирующих микроорганизмов среди госпитальных штаммов (ацинетобактеров и псевдомонад). За ними следуют клебсиеллы, эшерихии, энтерококки и бактероиды. Практически все нозокомиальные штаммы входят в состав нормальной микрофлоры кишечника человека.

Материалы и методы исследований. В проспективное исследование было включено 40 (21 мужчина и 19 женщин) пациентов с распространенным гнойным перитонитом, у которых в процессе лечения использовалась лапаростома. Основным критерием отбора больных было лечение путем наложения лапаростомы и проведение этапных санаций общим количеством не менее 5. У всех пациентов Мангеймский индекс перитонита составил 25 баллов и более (31,6±3,7). Общая тяжесть состояния пациентов, оцениваемая по шкале SAPS II, была не менее 35 баллов (43,3±6,8). Выделение и идентификацию микроорганизмов проводили с приБактериофаги в медицине и ветеринарии менением стандартных бактериологических методик. Чувствительность к антибиотикам определяли диско-диффузионным методом. Определяли чувствительность выделенных микроорганизмов к следующим фагам: Стафилококковый бактериофаг, Бактериофаг синегнойный жидкий, Коли-протейный бактериофаг, Интести-бактериофаг жидкий раствор, Пио-бактериофаг поливалентный, Клебсиллезный бактериофаг (ФГУП «НПО «Микроген» Минздравсоцразвития России). Выявление «островков патогенности», как дополнительного критерия оценки вирулентности, выделенных микроорганизмов проводили методом ПЦР. Выбор «островков патогенности» для исследования был связан с основными этапами инфекционного процесса:

адгезия – гены, контролирующие синтез фимбрий Р типа (рарС и рарН), S типа (fA и fG), 1 типа (fiA) и бактериального адгезина интимина (еаеА ген), а также капсулообразование (kps); размножение в тканях – rp2 ген, контролирующий синтез сидерофора, участвующего в транспорте железа внутрь клетки; продукция токсических веществ: txAgee (LTh) - термолаLTh)) бильный энтеротоксин, etI gee (ST-IA/ST-P) - термостабильный энтеротоксин, a-гемолизин (hyВ ген) и энтерогемолизин (ehx ген), цитотоксический некротизирующий фактор 1 (f1 ген) и шигаподобные токсины 1 и 2 типа (tx1 и tx2 гены); наличие генов устойчивости к антибиотикам: qrB, qrS, qrA – фторхинолоны; TEM (b TEM), CTX (bTX-M), SHV (bSHV) – бета-лактамы.

Результаты исследований и их обсуждение. В процессе микробиологических исследований перитонеального экссудата и биопсийного материала указанных пациентов (сальник, брюшина), было выделено 15 чистых культур 7 видов микроорганизмов, в 95,3% случаев вызывающих нозокомиальный перитонит. К ним относились, 2 штамма Aetbter buштамм Aetbter heytu, 1 штамм Eteru bv, 2 штамма Eteru fe, 4 штамма Eteru feu, 2 штамма Eherh, 3 штамма Peu erug (рис. 1).

Рис. 1 - Частота встречаемости нозокомиальных штаммов.

У большинства микроорганизмов выявлена высокая устойчивость к антибиотикам (табл. 1), в том числе и антибиотикам последних поколений (цефалоспоринам III, IV поколений, фторхинолонам, карбопенемам). Кроме того, 2 штамма Peu erug и штамм Aetbter bu были устойчивы к 0,5% водному раствору хлоргексидина, часто используемого для санации брюшной полости, а один штамм Peu erug и штамма Eteru feu, проявляли устойчивость к гипохлориту натрия.

Бактериофаги в медицине и ветеринарии Таблица 1 - Чувствительность госпитальных штаммов микроорганизмов к антибиотикам.

Штаммы микроорганизмов Pseudomonas aeruginosa +++- чувствителен; ++++- высоко чувствителен.

У исследуемых нозокомиальных штаммов наблюдалось выявление островков патогенности, отвечающих как за адгезию бактериальной клетки на тканях макроорганизма, обеспечивающих размножение, антибиотикорезистентность, так и повышающих патогенность бактерий за счёт придания им дополнительной токсичности в разнообразных сочетаниях. Выявление островков патогенности антибиотикорезистентности при определении устойчивости к фторхинолонам у 75% исследованных штаммов совпадало с результатами, полученными диско-диффузионным методом. В отношении бета-лактамных антибиотиков процент совпадений генотипической и фенотипической устойчивости составляло 62,5%.

При определении чувствительности этих штаммов к применяемым в России коммерческим бактериофагам установили, что Peu erug, Eteru feu, Eherh, Eteru bv чувствительны к «Интести-бактериофаг жидкий раствор», «Бактериофаг синегнойный жидкий» и «Коли-протейный бактериофаг» (ФГУП «НПО Микроген») в высокой степени.

Не выявлено чувствительности Aetbter bu, Aetbter heytu и Eteru fe к указанным и другим, разрешенным к применению бактериофагам (табл. 2).

Таблица 2 - Чувствительность нозокомиальных штаммов к бактериофагам.

+++- чувствителен; ++++- высоко чувствителен.

В связи с полученными результатами, у 16 пациентов с распространенным гнойным перитонитом с профилактической целью был применён комбинированный препарат из коммерческих бактериофагов, проявивших активное действие в отношении выявленных нозокомиальных штаммов. Целесообразность применения комбинированного препарата обусловлена тем, что фаги обеспечивают профилактическую защиту реинфицирования брюшной полости нозокомиальными штаммами. Это предотвращает как развитие нозокомиального перитонита, так и смену нозокомиального возбудителя в брюшной полости в случаях послеоперационного перитонита во время многократных этапных са-наций.

В случае послеоперационного перитонита, где уже имеется какой-либо из перечисленных нозокомиальных штаммов, комбинированный препарат поз-воляет бороться с уже присутствующей инфекцией и предупреждать смену до-минирующего возбудителя, так как один из 3-х компонентов комбинирован-ного фагового лечебного препарата играет роль основного лечебного агента, а другие предотвращают смену возбудителя.

После каждой санации в брюшную полость вводили по 200,0 мл раствора комбинированного препарата бактериофага, а также 2 раза в сутки с момента наложения и до момента Бактериофаги в медицине и ветеринарии закрытия лапаростомы указанный препарат вводили в желудочно-кишечный тракт через желудочный зонд или клизму. При использовании бактериофагов, ни в одном случае не отмечено присоединения внутрибольничной флоры из группы Peu erug, Eteru feu, Eteru bv и Eherh.

Кроме того, в одном случае послеоперационного перитонита в перитонеальном экссудате при первом посеве выявлен нозокомиальный штамм Peu erug 106 lg КОЕ/г и у другого пациента с послеоперационным перитонитом наличие нозокомиального штамма Eteru feu 107 lg КОЕ/г. Примечательно, что после применения комбинированного бактериофагового препарата к моменту второй санации оба штамма определялись в титре lg КОЕ/г, а после третьей и последующих санаций внутрибольничная флора в посевах из перитонеального экссудата не высеивалась. Необходимо отметить, что указанные микроорганизмы характеризовались отсутствием чувствительности к использованным антибактериальным препаратам, применённых у пациентов до получения данных микробиологического исследования. Следовательно, положительная динамика в виду ликвидации нозокомиальной флоры из перитонеального экссудата ко 2 и 3 санациям брюшной полости у данной группы больных была достигнута благодаря раннему применению фаговых препаратов.

В 2-х случаях при многократных санациях брюшной полости отмечено присоединение Aetbter bu (при третьей и четвертой санации) и по одному случаю - присоединение Aetbter heytu (вторая санация) и Eteru fe (с первой санации послеоперационного перитонита). Среди пациентов с летальным исходом нозокомиальная флора из групп Peu erug, Eteru feu, Eteru bv и Eherh не высевалась.

Таким образом, развитие «нозокомиального» перитонита при многократных санациях брюшной полости на фоне проведения фаготерапии составило 30,77%, что более чем в 3 раза ниже, по сравнению с группой пациентов, где в случаях длительного использования лапаростомы и без проведения фаготерапии процент развития нозокомиального перитонита после 5-ой санации близок к 100%.

По данным как отечественных, так и зарубежных авторов, эффективность фагов зависит от степени их адаптированности к регионарным вариантам (расам) бактерий. Чувствительность возбудителей госпитальных инфекций к адаптированным бактериофагам значительно выше, чем к коммерческим (72- 94% и 9-47%, соответственно). В первую очередь, это относится к синегнойной палочке, протею, энтерококкам и клебсиеллам. В связи с отсутствием в продаже адекватного фагового препарата, в отношении трех выделенных нами видов микроорганизмов - возбудителей нозокомиального перитонита (Aetbter bu, Aetbter heytu и Eteru fe), Государственным научным центром прикладной микробиологии (ГНЦ ПМ) оказана консультативная помощь в выделении, идентификации и определении биологических свойств новых бактериальных вирусов. Полученные фаги исследованы в тестах in vitro на литическую активность к патогенам, выделенных от пациентов с распространенным гнойным перитонитом. Результаты исследований, показали 100% литическую активность нового фагового препарата в отношении Aetbter bu, Aetbter heytu и Eteru fe. Чувствительность указанных штаммов микроорганизмов к полученным фагам на питательных средах превосходила чувствительность к антибиотикам, в той или иной степени сохранивших свое действие на данную микрофлору. Кроме того, был произведен поиск адекватных фаговых препаратов из коллекции института, активных в отношении всех выделенных нозокомиальных штаммов микроорганизмов. Такие бактериальные вирусы найдены, и активность их на питательных средах при определении чувствительности несколько превосходила чувствительность к антибиотикам, сохранивших свое действие на данные микроорганизмы. Никакой корреляции между антибиотикоустойчивостью и фагоустойчивостью не существует, так как эти признаки имеют разные генетические структуры и механизмы фенотипической экспрессии.

Заключение. Применение адаптированных бактериофагов в лечении вторичного и нозокомиального распространенного гнойного перитонита заметно повышает эффективность проводимой терапии и предотвращает летальный исход.

PROSPECTS OF THE APPLICATION OF BACTERIOPHAGES

IN THE PREVENTION AND TREATMENT OF NOSOCOMIAL

COMPLICATIONS IN SURGERY

Slobodenyuk V.V., Voropaeva E.A., Aleshkin V.A., Afanas’ev S.S., Karaulov A.V., Key words: pertt, bterphge, rr, tbt.

Pertt, fit, eet f everty, tretet e f the t preg ue f er urgery. ute the eet ue f bterphge, whh hve tve gt bter te fr perte exute f ptet wth pertt. Stue the pbty f the bt ffret bterphge fr the prevet tretet «» pertt.

УДК 619:616.98:576.8:636.

ФАГОТЕРАПИЯ САЛЬМОНЕЛЛЁЗА КУР С УЧЕТОМ ОСОБЕННОСТЕЙ

ТЕХНОЛОГИИ ВЫРАЩИВАНИЯ ПТИЦЫ

Плешакова В.И., доктор ветеринарных наук, профессор Тел. (3812)25-05-19, 89136259160, lescheva@list.ru Степанов Д.Н., аспирант, тел. 89081082017, chups08@mail.ru ФГБОУ ВПО «ИВМиБ ОмГАУ им. П.А. Столыпина»

Ключевые слова: Цыплята-бройлеры, сальмонеллёз, бактериофаги, микрофлора, производственные показатели Работа посвящена фаготерапии сальмонеллёза цыплят-бройлеров с учетом особенностей технологии выращивания птицы. Авторами установлено, что использование сальмонеллёзного бактериофага обеспечивает отсутствие сальмонелл в продукции и повышает производственные показатели сохранности птицы, среднесуточного привеса, индекса продуктивности.

Введение. Среди болезней птицы в последние годы более 60% составляют инфекции бактериальной этиологии, при этом отмечается возрастание роли микроорганизмов, являющихся возбудителями проблемных для птицехозяйств болезней: колибактериоза, сальмонеллеза, стафилококкоза и др. [1]. Сальмонеллёз птиц независимо от сероварианта возбудителя, вызвавшего его, причиняет значительный социально-экономический ущерб [2]. Важным моментом в организации борьбы с сальмонеллёзной инфекцией на птицеводческом предприятии Бактериофаги в медицине и ветеринарии является систематический мониторинг бактериальных патогенов среди больной и павшей птицы, который позволяет регистрировать заражение птицы и определять средства специфической профилактики [3,4,5].

Сальмонеллы обладают значительной лекарственной устойчивостью ко многим антибиотикам, которые ВОЗ не рекомендует широко использовать в борьбе с инфекцией, в связи с тем, что применение препаратов зачастую приводит к дисбактериозам и снижению естественной резистентности организма птицы. Перспективным направлением в борьбе с сальмонеллёзом птиц могут служить бактериофаги, которые лишены вышеперечисленных недостатков.

Вместе с тем, до настоящего времени вопросы противосальмонеллёзной терапии с использованием специфических фагов разработаны слабо и не нашли широкого практического применения в промышленном птицеводстве.

Цель исследования. Разработать схему фаготерапии сальмонеллёза кур с учетом особенностей технологии выращивания птицы.

Материалы и методы исследования. Научный эксперимент по разработке схемы фаготерапии сальмонеллеза кур проведен на птицефабрике производственной мощностью более 2 млн. гол. Бактериологические исследования проб патологического материала проводили в отделе болезней птиц БУ Омской области «ООВЛ», анализ и обобщение полученных результатов на кафедре ветеринарной микробиологии, вирусологии и иммунологии ИВМиБ ОмГАУ им. П.А. Столыпина. Объектом исследования служили цыплята-бройлеры, кросса RossЕ308, мясного направления. Эксперимент по применению сальмонеллёзного бактериофага был проведен с использованием 34000 гол. птицы. Контролем был зал с таким же количеством птицы. Для выделенных из патологического материала культур сальмонелл подобраны специфические бактериофаги и разработано временное наставление по их применению на цыплятах бройлерах. Сальмонеллёзные бактериофаги были выделены из патматериала, на базе ФБУ науки ГНЦ ВБ «Вектор» (г. Новосибирск) там же был приготовлен лизат бактериофага с титром 1,25х109 БОЕ/мл. Период эксперимента составил 40 сут., с момента рождения птицы и до убоя, связанного с технологией выращивания. Ежедневно проводили клинический осмотр птицы (поведение, внешний вид), учитывали сохранность и потребление корма. Живую массу цыплят определяли при взвешивании раз в неделю. На протяжении всего эксперимента проводили патологоанатомическое вскрытие павшей птицы с целью регистрации патоморфологических изменений и взятия материала для бактериологических исследований (сердце, печень и костный мозг). Патологоанатомическое вскрытие проводили согласно существующих методик. Всего был исследован материал от 789 трупов цыплят.

В соответствии с временным наставлением по применению сальмонеллезного бактериофага, обработку суточных цыплят осуществляли методом аэрозольного распыления в спрей кабинете «Desvak». Бактериофагом обработано 34000 гол. птиц, при этом доза на одну гол. составила 0,01 мл препарата.

На 8-е сут. лизат бактериофага цыплята получали методом выпаивания, для обеспечения полного потребления бактериофага их предварительно выдержали без питьевой воды в течение 40 мин., затем в теплую водопроводную воду (5л) внесли 400 мл лизата бактериофага (1,25х109 БОЕ/мл), и смесь подали в систему поения. Время потребления птицей данного объема препарата составило 1час 40 мин.

На 22-е сут. лизат бактериофага задавали так же методом выпаивания, при этом безпитьевой период составил 50 мин, а объем воды с лизатом бактериофага увеличен до 7 литров с учетом веса птицы. Период выпаивания так же составил 1час 40 мин.

На 29-е сут. жизни цыплят было проведено четвертое выпаивание, но объем воды с лизатом бактериофага составил 10 литров. Период выпаивания бактериофага тот же - 1час мин.

На 32-е сут. лизат бактериофага цыплята получили тем же способом. Экспозиция нахождения птицы без воды составила 60 мин, а объем воды, в который добавили лизат бактериофага, составил 13 литров. Время выпойки осталось то же.

Заключительное применение бактериофага проведено на 36е сут. по той же схеме как на 32е сут.

Результаты исследований. В течение первой недели эксперимента, как в опытной, так и в контрольной группах наблюдали гибель птенцов. Падеж в опытной и контрольной группах составил 229 гол.(0,7%) и 324 гол. (1%) соответственно. Основными причинами гибели цыплят в этот период являлись: желточный перитонит, плохое заживление пуповины (омфалит), мочекислый диатез (подагра), кутикулит и гепатит. В дальнейшем отход птицы в контроле превысил показатели опытной группы (таблица 1).

Больные птенцы до двухнедельного возраста вели себя заторможено, наблюдалась слабость лапок, отсутствие аппетита, медленный рост, вокруг клоаки налипали каловые массы.

При вскрытии погибших птенцов регистрировали - катаральное воспаление слизистой оболочки кишечника, утолщение ее стенки, увеличение фолликулов. В печени, сердечной мышце, лёгких, селезёнке - кровоизлияния, очаги некроза. При бактериологическом исследовании проб патологического материала (сердце, печень и костный мозг) были выделены Streptococcus sp. (6,7%) и Salmonella enteritidis (1,4%).

Таблица 1 - Количество павшей птицы за период ксперимента.

В контрольной группе, к 22 суткам падеж составил 593 гол., к 29 сут. он значительно сократился (158 гол.), затем (32 сут.) снизился на 62%, и к завершению эксперимента ( сут.) составил 244 гол., что на 21,3% больше чем в опытной группе. Значительный падеж к суткам в обеих группах был обусловлен увеличением количества птицы больной колибактериозом, что было подтверждено результатами бактериологических исследований. Так были выделены патогенные культуры Escherichia coli (31%).

За весь период эксперимента проведено 789 бактериологических исследований проб патологического материала от павшей птицы, в результате выделены следующие изоляты микроорганизмов (n=451): Streptococcus sp. - 53 культуры (6,7% ), Salmonella enteritidis – (1,4%), Staphylococcus aureus - 43 (5,4%), Escherichia coli группа 1серотип О2 - 242 (31%), Pseudomonas aeruginosa – 31 (3,9%), Proteus vulgaris – 8 (1%), Mycoplasma sp. - 63 (8%). Из них в опытной группе Streptococcus sp. – 29 культур, Salmonella enteritidis – 3, Staphylococcus aureus – 21, Escherichia coli группа 1серотип О2 – 119, Pseudomonas aeruginosa – 16, Proteus vulgaris – 4, Mycoplasma sp. – 29.

После первого применения бактериофага, на 8-е сутки в опыте было выделено две культуры сальмонеллы (Salmonella enteritidis), после второго, (22-е сутки) одна культура. На 29-е сутки в пробах из патологического материала (сердце, печень и костный мозг) цыплят опытной группы выделение сальмонелл не регистрировали. Тогда как в контроле Salmonella Бактериофаги в медицине и ветеринарии enteritidis выделяли в период до 32 суток эксперимента. В целом общий микробный фон из проб патологического материала трупов в опытной и контрольной группах значительно не отличался.

В результате применения бактериофага показатели среднесуточного привеса птицы в опытной группе превышали данные контроля на 0,7 г/гол. сут.

Сохранность птицы в опытной группе составила 96,33%, в контроле 95,94%. Количество выбракованной птицы в опыте составило 1,6%, в контроле 1,9%. Живая масса при убое в опытной группе на фоне применения бактериофага была выше на 5,45 ц. чем в контроле. Индекс продуктивности птицы в опыте превысил аналогичный показатель в контрольной группе на 9,4.

Выводы. Применение сальмонеллёзного бактериофага обеспечивает отсутствие сальмонелл в готовой продукции, увеличивает сохранность птицы на 0,39%, среднесуточный привес, живой вес при убое и индекс продуктивности.

1. Венгеренко Л.А. Ветеринарно-санитарное обеспечение эпизоотического благополучия в птицехозяйствах Российской Федерации/Л.А. Венгеренко //Ветеринария, 2009.-№8.С.З-6.

2. Кафтырева Л.А. Сальмонеллезы на территории Северо-Западного Федерального Округа РФ. Аналитический обзор/Л.А. Кафтырева, З.Н.Матвеева, A.B. Забровская, С.А. Егорова, М.А. Макарова.- С-Пб, 2008.- 41с.

3. Гусев В. Мониторинг возбудителей бактериальных инфекций/ В. Гусев, Э. Светоч, Н. Глазков, М. Теймуразов, С.Приходько, С.Павлов // Птице-водство.-2003.- №2.-С.8-9.

4. Афонюшкин В., Дудаева Е., Малахеева Л., Фролова О., Шкред О., Филиппенко М.

Современные методы контроля сальмонеллеза //Птицеводство.-2008.-№9.-С.43-44.

5. Рождественская Т.Н. Специфическая профилактика инфекции Salmonella enteritidis у птицы/ Т.Н.Рождественская// Российский вет. журн. С.-х. животные.-2009.-№Г.-С.46-48.

SALMONELLA BACTERIOPHAGE TREATMENT OF CHICKENS

WITH THE FEATURES OF THE TECHNOLOGY OF POULTRY BREEDING

Pleshakova V.I., Stepanov D.N.

Key words: Brer hke, e, bterphge, rr, prut e Th rte evte t e phge therpy f brer hke wth the peurte f the tehgy f putry breeg. The uthr hve fu tht the ue f Se phge eure e prut ree the fety prut e f br, verge y g, prutvty ex.

УДК 579.61/62; 575.852:577.

АНТИБИОТИКОУСТОЙЧИВОСТЬ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ПАТОГЕНОВ:

ЭВОЛЮЦИОННЫЕ МЕХАНИЗМЫ И КЛИНИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

Фурсова Н.К.*, кандидат биологических наук, fursova@obolensk.org;

Карцев Н.Н.*, тел. 8(4967) 36-00-79, veseliydoktor@yandex.ru;

Ивашов С.В.**, тел. 8(4967) 31-07-98, sv-ivashov@rambler.ru;

Светоч Э.А., доктор ветеринарных наук, профессор, svetoch@obolensk.org *ФБУН «ГНЦ прикладной микробиологии и биотехнологии»

**МЛПУ Протвинская городская больница, Московская обл., Ключевые слова: устойчивость к антибактериальным препаратам, горизонтальный перенос генов, эволюция резистентности Работа посвящена обзору данных литературы и представлению результатов собственных исследований по распространенности устойчивости к антимикробным препаратам у бактериальных патогенов человека, по эволюции молекулярных механизмов и клинической значимости данного явления. Рассматривается роль бактериофагов в горизонтальном и вертикальном переносе генетических детерминант резистентности и патогенности.

Уровень инфекционной заболеваемости населения является одним из компонентов оценки “индекса здоровья” нации. За всю историю человечества именно инфекции внесли подавляющий вклад (почти 90%) в показатель смертности. В настоящее время инфекционные заболевания в мировом масштабе являются главным «убийцей» людей детского и молодежного возраста – 13 млн. смертей в год. В развивающемся мире это – каждая вторая смерть. Каждые 3 секунды в мире умирает ребенок – в большинстве случаев от инфекции. Инфекции стали быстрее распространяться в новые регионы благодаря массовым перемещениям популяций в последние десятилетия (начиная с 1996 г. около 50 млн. людей - 1% мировой популяции – мигрировали). Усугубляющими факторами также являются: рост плотности населения в городах;

недостаточно чистая питьевая вода; низкий уровень санитарии; нищета; наличие соматических заболеваний, ослабляющих иммунитет [1].

Основным средством борьбы с серьезными инфекциями являются антибиотики. В свое время, в середине XX в., они сыграли революционную роль, снизив смертность от бактериальных инфекций; и до сих пор многие методы современной медицины немыслимы без применения антибиотиков: трансплантация, химиотерапия рака, ортопедическая хирургия и другие. Однако в последние десятилетия арсенал доступных для лечения инфекций лекарств повсеместно стремительно уменьшается из-за прогрессивного увеличения резистентности возбудителей к применяемым лекарствам и недостаточно быстрого появления новых антибактериальных препаратов [2]. Врачи всего мира сталкиваются с ситуациями, когда инфицированному больному не может быть назначена адекватная терапия из-за устойчивости инфекционного агента ко всем имеющимся антибиотикам. Таким образом, назрел кризис здравоохранения, осложняющийся большим количеством возбудителей инфекционных заболеваний человека, в значительной степени отличающихся по своим свойствам, набору факторов патогенности, механизмам резистентности, а также возможным путям преодоления сформировавшейся лекарственной резистентности.

Всемирная организация здравоохранения (WH) рекомендует в первую очередь соWH) ) средоточить усилия исследователей на направлениях, представляющих наибольшую опасность для здравоохранения многих стран мира - шести смертельных инфекциях, являющихся Бактериофаги в медицине и ветеринарии причиной 50 % от всех преждевременных смертей в мире (пневмония, туберкулез, кишечные заболевания, малярия, корь и синдром иммунодефицита СПИД/ВИЧ) [3].

Резистентность возбудителей к применяемым антибактериальным препаратам значительно усложнила борьбу с первыми пятью из шести перечисленных смертельных болезней.

У многих опасных возбудителей (Stphyu ureu, Eteru spp., Eterbteree, Peu erug, Aetbter spp., Mybteru tuberu) отмечается «эскалация» развития резистентности: множественно-резистентные изоляты бактерий (multi drug resistance, MDR) нечувствительны по крайней мере к одному из применяемых для лечения данной инфекции антибиотику из трех функциональных классов; экстремально-резистентные изоляты бактерий (extreme drug resistance, XDR) - по крайней мере к одному антибиотику из всех функциональных классов, кроме одного или двух; пан-резистентные изоляты бактерий (pan drug resistance, PDR) – ко всем антибиотикам из всех функциональных классов [4, 5].

Яркими примерами инфекций, вызванных резистентными возбудителями в последние годы, явились: вспышка кишечного заболевания в Европе, вызванная MDR-E. 104:H4 [6] и появление в Индии, с последующим распространением в Европе, PDR-бактерий семейства Eterbteree, несущих New Delhi металло-бета-лактамазу-1 (NDM-1) [7].

С точки зрения эпидемиологии инфекции подразделяются на две большие группы:

внутрибольничные (госпитальные или нозокомиальные) и внебольничные инфекции, часть из которых расценивается как социально-значимые. В настоящее время доля устойчивых к лекарственным препаратам нозокомиальных штаммов в разных странах составляет от 5 % до 60-80 %, зачастую такие инфекции заканчиваются летально (19 тыс. случаев ежегодно в США, столько же – в Европе) [3]. Резистентные формы возбудителей все чаще выделяются от амбулаторных пациентов, от домашних и сельскохозяйственных животных, а также из объектов окружающей среды. Доказано, что бактерии активно обмениваются генетическими детерминантами резистентности, сформирована концепция о наборах факторов резистентности, присущих конкретным сообществам бактерий (резистом) [8], в том числе – микробному сообществу организма человека (микробиом) [9].

Основные генетические механизмы, определяющие лекарственную устойчивость у бактерий, относящихся к разным таксономическим группам, значительно отличаются. Так, у метициллин-устойчивых Stphyu ureu (MRSA) важную роль играет стафилококковая хромосомная кассета SCCe; у Peu erug – гены нескольких типов эффлюксных насосов, у Aetbter bu – специфичные мобильные транспозоны Ab; у энтеробактерий – гены бета-лактамаз расширенного спектра (БЛРС); у Mybteru tuberu – точечные мутации в генах, кодирующих ферменты, модифицирующие молекулы лекарства.

Свой вклад в резистомы отдельных видов бактерий вносят также и универсальные механизмы устойчивости к некоторым классам лекарств: так, устойчивость к хинолонам формируется благодаря наличию точечных мутаций в генах, кодирующих ферменты ДНК-гиразу и топоизомеразу IV. Большую роль в формировании и распространении наиболее «успешных» механизмов резистентности играют мобильные генетические элементы (транспозоны, интегроны, IS-элементы, плазмиды) и универсальные процессы обмена генетической информацией (конъэлементы, югация, трансформация, трансдукция, рекомбинация). [10].



Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |   ...   | 8 |
Похожие работы:

«РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК Чебоксарский филиал учреждения Российской академии наук Главного ботанического сада им. Н.В. Цицина РАН Чувашское отделение Русского ботанического общества РАН Чувашское отделение Териологического общества РАН МИНИСТЕРСТВО ПРИРОДНЫХ РЕСУРСОВ И ЭКОЛОГИИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ФГБУ Государственный природный заповедник Присурский МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Филиал ГОУ ВПО Российский государственный социальный университет, г. Чебоксары...»

«алтайский государственный университет Ботанический институт им. в.л. комарова ран Центральный сиБирский Ботанический сад со ран алтайское отделение русского Ботанического оБЩества Проблемы ботаники Южной сибири и монголии Сборник научных статей по материалам Деcятой международной научно-практической конференции (Барнаул, 24–27 октября 2011 г.) Барнаул – 2011 уДК 58 П 78 Проблемы ботаники Южной сибири и монголии: сборник научных статей по материалам X международной научно-практической...»

«Материалы международной научно-практической конференции Бактериофаги: Теоретические и практические аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой промышленности Том I Ульяновск - 2013 Материалы международной научно-практической конференции Бактериофаги: Теоретические и практические аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой промышленности / - Ульяновск: УГСХА им. П.А. Столыпина, 2013, т. I - 184 с. ISBN 978-5-905970-14-6 Редакционная коллегия: д.б.н., профессор Д.А. Васильев...»

«CBD Distr. GENERAL КОНВЕНЦИЯ О БИОЛОГИЧЕСКОМ UNEP/CBD/COP/7/18 РАЗНООБРАЗИИ 10 November 2003 RUSSIAN ORIGINAL: ENGLISH КОНФЕРЕНЦИЯ СТОРОН КОНВЕНЦИИ О БИОЛОГИЧЕСКОМ РАЗНООБРАЗИИ Седьмое совещание Куала-Лумпур, 9-20 и 27 февраля 2004 года Пункт 20.1 предварительной повестки дня* ФИНАНСОВЫЕ РЕСУРСЫ И МЕХАНИЗМ ФИНАНСИРОВАНИЯ (СТАТЬИ 20 И 21) Дополнительные финансовые ресурсы Записка Исполнительного секретаря I. ВВЕДЕНИЕ 1. В преамбуле Конвенции о биологическом разнообразии признается, что...»

«Известия Коми научного центра УрО РАН Выпуск 3(15). Сыктывкар, 2013. ХРОНИКА ВСЕРОССИЙСКАЯ НАУЧНАЯ КОНФЕРЕНЦИЯ БИОРАЗНООБРАЗИЕ ЭКОСИСТЕМ КРАЙНЕГО СЕВЕРА: ИНВЕНТАРИЗАЦИЯ, МОНИТОРИНГ, ОХРАНА С 3 по 7 июня 2013 г. в г. Сыктывкар (Республика Коми) состоялась Всероссийская научная конференция Биоразнообразие экосистем Крайнего Севера: инвентаризация, мониторинг, охрана. Инициатор ее проведения – Институт биологии Коми НЦ УрО РАН. Соучредителями выступили Министерство природных ресурсов и охраны...»

«UNEP/CBD/COP/7/21 Страница 112 Приложение РЕШЕНИЯ, ПРИНЯТЫЕ СЕДЬМЫМ СОВЕЩАНИЕМ КОНФЕРЕНЦИИ СТОРОН КОНВЕНЦИИ О БИОЛОГИЧЕСКОМ РАЗНООБРАЗИИ Решение Страница VII/1. Биологическое разнообразие лесов 114 VII/2. Биологическое разнообразие засушливых и субгумидных земель VII/3. Биологическое разнообразие сельского хозяйства 114 VII/4. Биологическое разнообразие внутренних водных экосистем 114 VII/5. Морское и прибрежное биологическое разнообразие 160 VII/6. Процессы проведения оценок 114 VII/7. Оценка...»

«МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ Московская международная научно-практическая конференция ЭКОЛОГИЯ КРУПНЫХ ГОРОДОВ Проводится в рамках Московского международного конгресса Биотехнология: состояние и перспективы развития 15 - 17 марта 2010 March, 15 - 17 Под патронажем Правительства Москвы Sponsored by Moscow Government The Moscow International Scientific and Practical Conference ECOLOGY OF BIG CITIES Held within the framework of Moscow International Congress Biotechnology: State of the Art and Prospects...»

«16.11.2013 (суббота) Регистрация, кофе, плюшки 8:30-9:30 Открытие конференции 9:30-10:30 Проректор по обеспечению реализации образовательных программ и осуществления научной деятельности по направлениям география, геология, геоэкология и почвоведение СПбГУ С.В. Аплонов Декан факультета географии и геоэкологии Н.В. Каледин Зав. кафедры гидрологии суши Г.В. Пряхина ООО НПО Гидротехпроект А.Ю. Виноградов Организационный Комитет Л.С. Лебедева Посвящение Ю.Б. Виноградову 10:30-11:00 Т.А. Виноградова...»

«УВАЖАЕМЫЕ КОЛЛЕГИ! Министерство здравоохранения Республики Беларусь, учреждение образования Белорусский государственный медицинский университет, учреждение образования Витебский государственный медицинский университет, ГУО Белорусская медицинская академия последипломного образования, Белорусская общественная организация дерматовенерологов и косметологов приглашают Вас принять участие в работе Республиканской научно-практической конференции с международным участием, посвященной 100-летию...»

«Уважаемые участники конференции! От имени Дальневосточного государственного технического рыбохозяйственного университета я рад приветствовать вас на очередной Международной научно-технической конференции Актуальные проблемы освоения биологических ресурсов Мирового океана. Я уверен, что в ходе работы мы сможем обсудить множество актуальных тем: совершенствование существующих технологий, нахождение путей оптимизации эксплуатации биоресурсов, исчезновение некоторых видов рыб, а также многие другие...»

«CBD Distr. GENERAL КОНВЕНЦИЯ О БИОЛОГИЧЕСКОМ UNEP/CBD/COP/8/3 РАЗНООБРАЗИИ 19 December 2005 RUSSIAN ORIGINAL: ENGLISH КОНФЕРЕНЦИЯ СТОРОН КОНВЕНЦИИ О БИОЛОГИЧЕСКОМ РАЗНООБРАЗИИ Восьмое совещание Куритиба, Бразилия, 20-31 марта 2006 года Пункт 9 предварительной повестки дня* ДОКЛАД О РАБОТЕ ОДИННАДЦАТОГО СОВЕЩАНИЯ ВСПОМОГАТЕЛЬНОГО ОРГАНА ПО НАУЧНЫМ, ТЕХНИЧЕСКИМ И ТЕХНОЛОГИЧЕСКИМ КОНСУЛЬТАЦИЯМ СОДЕРЖАНИЕ Страница ПУНКТ 1 ПОВЕСТКИ ДНЯ. ОТКРЫТИЕ СОВЕЩАНИЯ ПУНКТ 2 ПОВЕСТКИ ДНЯ. ОРГАНИЗАЦИОННЫЕ...»

«UNEP/CBD/COP/7/21 Страница 112 Приложение РЕШЕНИЯ, ПРИНЯТЫЕ СЕДЬМЫМ СОВЕЩАНИЕМ КОНФЕРЕНЦИИ СТОРОН КОНВЕНЦИИ О БИОЛОГИЧЕСКОМ РАЗНООБРАЗИИ Решение Страница VII/1. Биологическое разнообразие лесов 113 VII/2. Биологическое разнообразие засушливых и субгумидных земель 114 VII/3. Биологическое разнообразие сельского хозяйства 124 VII/4. Биологическое разнообразие внутренних водных экосистем 125 VII/5. Морское и прибрежное биологическое разнообразие 159 VII/6. Процессы проведения оценок 216 VII/7....»

«УСТАВ РУССКОГО ЭНТОМОЛОГИЧЕСКОГО ОБЩЕСТВА ПРИ РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ НАУК (Принят Бюро Отделения общей биологии РАН 27 марта 1995 г.) 1. Общие положения 1.1. Русское энтомологическое общество при Российской академии наук, в дальнейшем именуемое РЭО, является некоммерческой организацией — научным обществом Отделения общей биологии при РАН — и осуществляет свою деятельность в соответствии с существующим законодательством и настоящим Уставом. 1.2. РЭО является юридическим лицом. Оно имеет свои...»

«НАЦИОНАЛЬНАЯ АКАДЕМИЯ НАУК УКРАИНЫ СОВЕТ БОТАНИЧЕСКИХ САДОВ И ДЕНДРОПАРКОВ УКРАИНЫ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР ЭКОМОНИТОРИНГА И БИОРАЗНООБРАЗИЯ МЕГАПОЛИСА НАЦИОНАЛЬНЫЙ БОТАНИЧЕСКИЙ САД ИМ. Н.Н. ГРИШКА Международная научная конференция РОЛЬ БОТАНИЧЕСКИХ САДОВ И ДЕНДРОПАРКОВ В СОХРАНЕНИИ И ОБОГАЩЕНИИ БИОЛОГИЧЕСКОГО РАЗНООБРАЗИЯ УРБАНИЗИРОВАННЫХ ТЕРРИТОРИЙ 28-31 мая 2013 года Первое информационное письмо КИЕВ – 2012 ГЛУБОКОУВАЖАЕМЫЕ КОЛЛЕГИ! Приглашаем вас принять участие в работе Международной научной...»

«CBD Distr. GENERAL КОНВЕНЦИЯ О БИОЛОГИЧЕСКО UNEP/CBD/COP/8/11/Rev.1 2 February 2006 М РАЗНООБРАЗИИ RUSSIAN ORIGINAL: ENGLISH КОНФЕРЕНЦИЯ СТОРОН КОНВЕНЦИИ О БИОЛОГИЧЕСКОМ РАЗНООБРАЗИИ Восьмое совещание Куритиба, Бразилия, 20–31 марта 2006 года Пункт 12 предварительной повестки дня * ДОКЛАД ИСПОЛНИТЕЛЬНОГО СЕКРЕТАРЯ ОБ АДМИНИСТРАТИВНОМ ОБЕСПЕЧЕНИИ КОНВЕНЦИИ И БЮДЖЕТЕ ЦЕЛЕВЫХ ФОНДОВ КОНВЕНЦИИ Записка Исполнительного секретаря ВВЕДЕНИЕ 1. На своем седьмом совещании Конференция Сторон в пункте 28...»

«МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РФ ФГБОУ ВПО БАШКИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПЕДАГОГИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМ. М.АКМУЛЛЫ СОВРЕМЕННЫЕ АСПЕКТЫ ИЗУЧЕНИЯ ЭКОЛОГИИ РАСТЕНИЙ Уфа 2013 МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РФ ФГБОУ ВПО БАШКИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПЕДАГОГИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМ. М.АКМУЛЛЫ СОВРЕМЕННЫЕ АСПЕКТЫ ИЗУЧЕНИЯ ЭКОЛОГИИ РАСТЕНИЙ Материалы Международного дистанционного конференции-конкурса научных работ студентов, магистрантов и аспирантов им. Лилии Хайбуллиной Уфа УДК 581. ББК 28. С Современные...»

«Международная экологическая ассоциация хранителей реки Eco-TIRAS Образовательный фонд имени Л.С.Берга Eco-TIRAS International Environmental Association of River Keepers Leo Berg Educational Foundation Академику Л.С. Бергу – 135 лет: Сборник научных статей Academician Leo Berg – 135: Collection of Scientific Articles Eco-TIRAS Бендеры - 2011 Bendery - 2011 CZU[91+57]:929=161.1=111 A 38 Descrierea CIP a Camerei Naionale a Crii Academician Leo Berg – 135 years: Collection of Scientific Articles =...»

«1-е информационное письмо Федеральное агентство научных организаций Российская академия наук Всероссийский научно-исследовательский институт биологической защиты растений Министерство сельского хозяйства и перерабатывающей промышленности Краснодарского края Министерство образования и науки администрации Краснодарского края ВПРС Международной организации по биологической борьбе с вредными животными и растениями (МОББ) Российская Технологическая Платформа Биоиндустрия и Биоресурсы – БиоТех2030...»

«CBD Distr. GENERAL UNEP/CBD/COP/10/18 23 August 2010 RUSSIAN ORIGINAL: ENGLISH КОНФЕРЕНЦИЯ СТОРОН КОНВЕНЦИИ О БИОЛОГИЧЕСКОМ РАЗНООБРАЗИИ Десятое совещание Нагоя, Япония, 18-29 октября 2010 года Пункт 4.9 повестки дня ПРИВЛЕЧЕНИЕ К РАБОТЕ СУБЪЕКТОВ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ И ОСНОВНЫХ ГРУПП И УЧЕТ ГЕНДЕРНОЙ ПРОБЛЕМАТИКИ Записка Исполнительного секретаря ВВЕДЕНИЕ I. Эффективное осуществление Конвенции зависит от участия и привлечения к работе 1. субъектов деятельности и коренных и местных общин. Об этом...»

«Министтерство о образован и наук Россий ния ки йской Фед дерации Российск академия наук кая к Не еправител льственны эколог ый гический фонд име В.И. В ф ени Вернадско ого Коми иссия Росссийской Федерации по дел ЮНЕ лам ЕСКО Адми инистрация Тамбо овской облласти Ас ссоциация Объеди я иненный универсиитет имен В.И. Ве ни ернадског го Федералльное гос сударствеенное бю юджетное образоваательное учреж ждение выысшего ппрофессиоональног образо го ования Тамбоввский госсударственный теехническ униве...»









 
2014 www.konferenciya.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Конференции, лекции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.