WWW.KONFERENCIYA.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Конференции, лекции

 

Pages:     | 1 | 2 ||

«АКТУАЛЬНЫЕ ПРОБЛЕМЫ ИНФЕКЦИОННОЙ ПАТОЛОГИИ И БИОТЕХНОЛОГИИ Материалы VI-й Международной студенческой научной конференции, посвящённой 70-летию ФГБОУ ВПО Ульяновская ГСХА им. П.А. ...»

-- [ Страница 3 ] --

5) мороженое с растительным жиром - мороженое (молокосодержащий продукт), массовая доля растительного жира или его смеси с молочным жиром в котором составляет не более чем 12 процентов;

6) мороженое мягкое - мороженое, которое имеет температуру от минус 5 до минус 7 градусов Цельсия и которое реализуется потребителям непосредственно после нахождения во фризере;

7) мороженое закаленное - мороженое, подвергнутое после нахождения во фризере замораживанию до температуры не выше минус 18 градусов Цельсия и сохраняющее указанную температуру при хранении, перевозке и О фальсификации мороженого можно судить по внешнему виду. Если Отформатировано: Узор: Нет оно неравномерной окраски - явно хранилось дольше нормы (такая окраска может быть лишь у мороженого с ягодами и орехами, а также у «мраморного», получившего свое название из-за внешнего вида). Ни в коем случае нельзя есть хлопьевидное мороженое песчанистой консистенции с ощутимыми на вкус комочками жира. Насторожитесь, если мороженое хрустит во рту льдинками, а при подтаивании выделяет мутную воду. Значит, оно было перекристаллизовано во время хранения. И еще. Качественный продукт в отличие от фальсифицированного медленно охлаждает рот и тает.

Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Для питания грудных детей многими фирмами разработаны различные сухие детские молочные смеси, которые в принципе должны быть приближены к составу женского молока. Однако, не зная до конца особенностей состава женского молока, многие детские молочные смеси вызывают у детей различные аллергические заболевания, повышенную массу тела и многие другие нарушения. Поэтому при выборе детских молочных смесей для питания своего ребенка отдавайте предпочтение больше отечественным разработкам, так как они более учитывают особенности питания российских детей. В них не вводят пальмоядровое масло. Отформатировано: русский Информационная фальсификация молока и молочных продуктов - это обман потребителя с помощью неточной или искаженной информации о товаре. Этот вид фальсификации осуществляется путем искажения информации в товарно-сопроводительных документах, маркировке и рекламе. Например, мороженое, расфасованное в непрозрачную упаковку из алюминиевой фольги, очень сложно оценить по органолептическим показателям: цвету, консистенции.

Одним из наиболее распространенных видов фальсификации является ассортиментная, особенно в виде контрафактной продукции, производимой и продаваемой под чужой торговой маркой и товарным знаком. Данный вид фальсификации имеет чисто субъективные причины. Также часто встречается квалиметрическая фальсификация. В этом случае имеет место пересортица, частичная замена сырья более дешёвым аналогом, недовложение, реализация просроченного товара и т.п. Здесь играют роль и объективные причины. Партионная фальсификация происходит при включении фальсифицированного товара в состав основной партии.

Информационная фальсификация (введение потребителей в заблуждение относительно характеристик товара путем недостоверной и/или недостаточной, и/или недобросовестной информации) носит общий характер для всех перечисленных видов фальсификации [3].

Еще одним способом фальсификации сухого молока или сухих сливок является добавление сухих сливок на основе растительных жиров. Кроме ухудшения вкуса мороженого, такая фальсификация также может снижать устойчивость продукта к таянию из-за дестабилизации эмульсии.

В настоящее время для отечественной пищевой промышленности вопросы безопасности и качества продукции, а также совершенствование методов их контроля, являются чрезвычайно актуальными. Особенную остроту они приобрели после 90-х годов ХХ века, когда, в результате социальных и экономических изменений, произошедших в нашей стране, отчетливо проявились такие проблемы, как фальсификация товаров.

Фальсификация, в разных формах и видах, быстро приобрела значительные масштабы и, к настоящему времени, стала повсеместным и ежедневным явлением.

1.Васильев Д.А. Ветеринарно – санитарная экспертиза молока и молочных продуктов / Д.А. Васильев. – Ульяновск, УГСХА, 2008. – С. 2-3.

Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии 2.Федеральный закон Российской Федерации от 12 июня 2008 г. N 88-ФЗ «Технический регламент на молоко и молочную продукцию» - код доступа - http://www.rg.ru/2008/06/20/reglament-dok.html.

3.Фальсификация для мороженого сырья – выявление и профилактика – код доступа – http://otherreferats.allbest.ru/cookery/00232777_0.html.

FALSIFICATION OF RAW MATERIALS FOR ICE CREAM

Abdurahmanov I., Chatanova A., Karpovа Y., Feoktistova N.A.

In article ways of falsification of raw materials for production of ice cream – milk and methods of its identification are described.

УДК 637.1:663.874:676.014.

ПОТРЕБИТЕЛЬСКИЕ СВОЙСТВА КИСЛОРОДНОГО КОКТЕЙЛЯ НА

ОСНОВЕ БЕЛКОВО-УГЛЕВОДНОГО СЫРЬЯ

Куценкова В., студентка 5 курса технологического факультета Грошева В.Н., аспирантка 1 года обучения технологического факультета Научные руководители: д.х.н., профессор Птичкина Н.М., к.т.н., ст. преподаватель Неповинных Н.В.

ФГБОУ ВПО «Саратовский ГАУ им. Н.И. Вавилова», г. Саратов Работа посвящена исследованию потребительских свойств кислородного коктейля на основе белково-углеводного сырья – творожной сыворотки, натуральных соков и пищевых полисахаридов. При проведении исследований были изучены органолептические и физико-химические свойства основы кислородного коктейля, определена ее пищевая и энергетическая ценность.



функциональной направленности с использованием молочного белковоуглеводного сырья - творожной сыворотки, натуральных соков и пищевых полисахаридов (ПС), а также их бинарных композиций (ПС-1- ПС-2) [1, 2].

В ходе эксперимента были подобраны ПС и их бинарные композиции в оптимальных концентрациях в качестве стабилизаторов кислородной пены, изучены органолептические и физико-химические характеристики пены.

При оценке органолептических показателей установлено, что кислородные коктейли, полученные из пенообразующего раствора, содержащего корень солодки, обладают горьковатым привкусом, в то время как кислородные коктейли, полученные с использованием ПС, не обладают посторонними привкусами и запахами.

Органолептические характеристики разработанных кислородных пен:

Вкус – приятный, умеренно сладкий, с выраженными нотами используемого сока;

Запах – нежный, свежий, обусловленный вкусом используемого сока;

Цвет – белый, с оттенком используемого сока;

Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Консистенция нежной упругой однородной пены, без отделения жидкости.

Физико-химические характеристики пен кислородных коктейлей при дозе* вносимого компонента представлены в таблице 1.

Таблица 1 - Физико-химические характеристики пен кислородных коктейлей Наименование вносимой добавки Стабильность пены, мин Кратность пены, % (дозы и конкретные названия ПС не указаны в связи с оформлением заявки на патент) Как видно из таблицы 1, стабильность пен с ПС увеличивается, по сравнению с контрольным образцом.

Таблица 2 - Пищевая и энергетическая ценность 100 г основы Новые виды кислородных коктейлей обеспечивают организм человека жизненноважными компонентами пищи (витаминами, пищевыми волокнами, макро- и микроэлементами).

1.Phillips, G. O. Gums and Stabilisers for the Food Industry 10 / G. O. Phillips, P.

A. Williams. - IRL Press, New York, 2000. - 452 p.

2.Птичкин, И.И. Пищевые полисахариды: структурные уровни и функциональность / И.И Птичкин, Н.М. Птичкина. – ГУП «Типография № 6» - Саратов, 2012. – 96 с.

CONSUMER PROPERTIES OF OXYGEN COCKTAILS BASED ON

PROTEIN-CARBOHYDRATE RAW

Kutsenkova V., V.N. Grosheva, N.M. Ptichkina, N.V. Nepovinnykh The work is devoted to the study of consumer properties of oxygen cocktail on the basis of protein-carbohydrate raw materials - cottage cheese whey, natural juices and dietary polysaccharides. The organoleptic and physico-chemical properties have been studied of the substrate oxygen cocktail, by its food and energy value have been defined.

Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии

ДИАГНОСТИКА, ЛЕЧЕНИЕ И ПРОФИЛАКТИКА ИНФЕКЦИОННЫХ

БОЛЕЗНЕЙ ЖИВОТНЫХ И ЛЮДЕЙ

УДК 616.36-

ВИРУСНЫЙ ГЕПАТИТ С (HCV). ОСОБЕННОСТИ, ПУТИ

ЗАРАЖЕНИЯ И ЛЕЧЕНИЕ

Нургатина Л., Карпова Н., 1 курс ветеринарный факультет Научные руководители: д.б.н., профессор Васильев Д.А., ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина», г. Ульяновск Работа посвящена вирусу гепатита С, широко распространенному на планете. Какие общие сведения, какова распространенность в России, а конкретно в Ульяновской области, как защититься от этой инфекции и, конечно же, узнать, какое лечение предлагает современная наук

а.

Вирусные заболевания были и являются одной из главных проблем всего человечества. Существует мнение, что вирус гепатита С внедрился в человеческую популяцию около трех сотен лет назад. Сегодня он является значительной проблемой. Число инфицированных на планете превышает млн. человек, причем большинство из них - это скрытые носители вируса. У 85% больных развивается хроническая форма, при которой вирус может размножаться в организме человека в течение десятков лет.

Вирус гепатита С принадлежит к семейству флавивирусов. По внешним параметрам вирус гепатита С является сферическим вирусом, имеющим размер вириона около 30-60 нм, но сложным по своему строению.

Это означает, что кроме белковой оболочки (капсида), он содержит еще и липопротеиновую оболочку. Белок капсида играет важную роль в сборке вируса и регуляции синтеза вирусной РНК. Кроме того, он нарушает иммунный ответ инфицированного человека. Важной особенностью вируса гепатита С является способность существовать в человеческом организме в виде набора близкородственных вирусных частиц, которые называются квазивидами. В каждом квазивидном наборе есть доминирующий вариант, который инфицирует клетки чаще. Если иммунная система справляется с уничтожением доминирующего вируса, один из редких начинает занимать его место. Происходит своеобразное соревнование между вирусом гепатита С, который стремится создать много различных вариантов, и иммунитетом.

Итак, можно с уверенностью сказать, что частая изменчивость некоторых белков вируса гепатита С и его квазивидовое естество играют главную роль в развитии хронической формы гепатита С. Однако, следует отметить, что около 15% инфицированных острым гепатитом С выздоравливают.





Эпидемиологическая ситуация в Российской Федерации по гепатиту С остается неблагополучной, причем Ульяновская область относится к числу особенно неблагополучных регионов, где уровень заболеваемости превышает среднероссийский. Инфекция приобретает все более выраженный социальный характер, с особой интенсивностью вовлекая в эпидемический Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии процесс лиц в возрасте от 15 до 30 лет, что во многих случаях связано с внутривенным введением наркотических средств. В 2011 году в Ульяновской области был отмечен рост заболеваемости острым вирусным гепатитом С. Об этом, сообщили данные регионального Центра гигиены и эпидемиологии.

Было зарегистрировано одиннадцать случаев заболевания этими видами гепатита против восьми в 2010 году. Восемь из них были отмечены в Ульяновске. Двух случаях причиной заражения стало внутривенное введение наркотических средств, в остальных оно произошло половым путем. Также сообщается, что один из больных - подросток в возрасте до семнадцати лет.

За первое полугодие 2011 года количество живущих в регионе граждан, заболевших острым вирусным гепатитом С, по сравнению с прошлым годом выросло в 1,38 раза.

Вакцины от гепатита С до сих пор не разработано. Как от него защититься? Не контактируйте с открытыми ранами, порезами, ожогами и кровью зараженного человека. Пользуйтесь только своей бритвой, зубной щеткой, маникюрными ножницами. Если вы посещаете только сертифицированные лечебные учреждения, не принимаете наркотики и не имеете беспорядочных половых связей – вам бояться гепатита С не стоит!

Для лечения гепатита С современная наука предлагает использовать интерфероны - вещества, которые выделяются организмом в ответ на внедрение в него какой-то инфекции. Сами интерфероны вирус не убивают.

Они помогают организму раскодировать сам тип инфекции, именно данный вид вируса, понять его уязвимые места, чтобы помочь иммунной системе выработать фермент, который бы его убил. Применяют интерферон вместе с противовирусным препаратом рибоверин. Именно такая комбинация принята во всем мире как некий стандарт лечения гепатита С. К сожалению, общепринятая терапия интерферонами очень токсична и тяжела для человеческого организма. И хотя ее применение рассчитано минимум на полгода, в 85% случаев пациенты выдерживают такое лечение только первые 2–3 месяца.

1.Букринская А.Г. Вирусология. - М.: Медицина. - 1986. – С.336.

2.Богач В. Мир вирусных гепатитов. – 2000. - №1. С. 9-10.

3.Филдс Б., Найп Д., Мэрфи Ф. Вирусология в 3-х томах. - 1989. - Т.1 - М.:

Мир. – С. Симонова Е.Г. Гепатит С. / Тезисы докладов конференции / - 2000. - С.132Интернет-ресурс: [http://www.hepatitac.net/page_68.htm].

HEPATITIS C VIRUS (HCV). FEATURES AND WAYS AND

TREATMENT OF INFECTION.

Nurgatina L., Karpova N., Vasiliev D.A., Molofeeva N.I.

Is devoted to the hepatitis C virus, widespread on the planet. What are the Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии basics, what is popular in Russia, and specifically in the Ulyanovsk region, how to protect themselves from the infection, and of course find out which treatment offers modern science.

УДК 619:577.2:616.9:636.

ИССЛЕДОВАНИЕ СОСИСОК ИЗ СВИНИНЫ МЕТОДОМ ПЦР НА

НАЛИЧИЕ ГЕНОМА ВИРУСА АФРИКАНСКОЙ ЧУМЫ СВИНЕЙ

Аннина А., 4 курс факультет ветеринарной медицины Научные руководители: к.б.н., Газаев И.Х.

к.б.н., доцент Мерчина С.В., д.б.н., профессор Васильев Д.А.

ГНУ ВНИИВВиМ РОССЕЛЬХОЗАКАДЕМИИ, г. Покров ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина», г. Ульяновск Работа посвящена выделению вируса Африканской чумы свиней из свиных сосисок, приобретенных в Московской и Владимирской областях.

Мониторинг вируса африканской чумы свиней в продуктах переработки из свинины. Африканская чума свиней – это очень актуальная тема на сегодняшний день.

Африканская чума свиней - особо опасная высококонтагиозная болезнь, характеризующаяся лихорадкой, обширными геморрагиями и цианозом кожи, тяжелыми дистрофическими и некротическими поражениями клеток ретикулоэндотелиальной системы, внутренних органов и высокой летальностью. Болеют домашние и дикие свиньи независимо от породы и возраста. Выжившие животные пожизненно остаются вирусоносителями [Сюрин, 1998].

Вирус АЧС очень опасен для экономики и для сельского хозяйства в целом не только для Российской Федерации, но и всего мира. Если это не прекратить, наступит угроза для существования видов семейства Suidae.

Угроза африканской чумы свиней — основной фактор, сдерживающий развитие свиноводства в Африке; до последнего времени на континенте насчитывается немногим более 1 % мировой популяции свиней [http://ru.wikipedia.org].

К африканской чуме свиней восприимчивы дикие и домашние свиньи, независимо от пола и возраста.

При анализе путей заноса вируса АЧС в благополучные регионы установлено, что основными путями и факторами передачи вируса АЧС являются контаминированные пищевые отходы и мясопродукты от инфицированных свиней.

Мясо и мясопродукты, как правило, поступают на реализацию в замороженном или охлажденном виде, и если животное было убито в инкубационный период болезни, то вирус АЧС может сохраняться в мясопродуктах длительное время и представлять большую опасность в распространении болезни.

На сегодняшний день широкое применение нашли, в диагностике инфекционных заболеваний животных, серологические методы (ИФА, Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии РПИФ) и методы на основе анализа генома (ПЦР с электрофоретичекой детекцией, ПЦР в реальном времени), они позволяют анализировать в малые сроки одновременно большое количество проб и применять приборные методы учета реакции.

Новые технологии ПЦР с электрофоретической детекцией и ПЦР в реальном времени для обнаружения ДНК вируса АЧС позволяют проводить прямую индикацию и идентификацию вируса АЧС в любых клинических образцах с высокой чувствительностью, что, соответственно, облегчает борьбу с этой болезнью.

Для исследования на выявление генома вируса Африканской чумы свиней мной были приобретены сосиски в торговых сетях Владимирской и Московской области.

Таблица 1- Количественный и качественный состав сосисок, приобретенных для исследования на наличие генетического материала вируса АЧС Краснодарский Тверская область Сосиски

МПЗ ГОРКИ

«Мясокомбинат натуральной мясокомбинат Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Ленинградская Исследование сосисок методом ПЦР в режиме реального времени Для исследования сосисок на выявление генетического материала вируса АЧС были отобраны образцы массой 10-15 гр. Кусочки сосисок перетирали в ступке со стерильным песком, готовили суспензию. Выделение нуклеиновых кислот проводили из осветленной суспензии методом нуклеосорбции, надосадочную жидкость использовали для постановки ПЦР в режиме реального времени. Для постановки ПЦР использовали «тестсистему для выявления ДНК вируса АЧС методом ПЦР в реальном времени»

производства ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии. ПЦР в режиме реального времени проводили на амплификаторе «Rotor-Gene» 6000.

Результаты учитывали путем документирования с помощью программного обеспечения прибора. Флуоресценцию измеряли при 58 С по каналу Green (FAM).

В ходе проведения ПЦР в режиме реального времени на возможность выявления генома вируса АЧС в сосисках, все пробы оказались отрицательными. Это говорит о том, что эти сосиски изготовлены из мяса здоровых животных и технология изготовления не была нарушена.

Рис. 1 -. Результаты постановки ПЦР в режиме реального времени для выявления ДНК вируса АЧС в пробах сосисок, приобретенных в торговых сетях Владимирской и Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Значение СТ для всех образцов исследованных сосисок отсутствует, в виду отсутствия генома вируса АЧС, в то время как положительные и отрицательные контроли реакции сработали, что говорит о правильной постановке реакции. (таблица 2).

Таблица 2 - Результаты постановки ПЦР в режиме реального времени для идентификации генома вируса АЧС в сосисках, приобретенных в торговых сетях Владимирской и Московской областях Исследование сосисок методом ПЦР с электрофоретической Для постановки ПЦР с электрофоретической детекцией на возможность выявления генома вируса АЧС в сосисках, приобретенных в торговых сетях Владимирской и Московской областях. Стерильными ножницами разрезали, измельчали в ступке со стерильным песком, готовили суспензию и отбирали надосадок для выделения нуклеиновых кислот.

Выделение проводили методом нуклеосорбции. Выделенную ДНК использовали для постановки ПЦР. Для амплификации использовали амплификатор Palm-Cycler. После окончания процесса амплимфикации провели электрофорез продуктов амплификации в 2% агарозном геле.

Результаты учитывали с помощью гель-документирующей системы Gel Doc, фирмы Bio-Rad (США), с последующей фиксацией результатов.

Проанализировав полученные результаты электрофореза можно сказать, что пробы под номерами – 1-10 оказались отрицательными в виду отсутствия светящихся полос на уровне положительных контролей (рис 17).

В исследованных сосисках методом ПЦР с электрофоретической детекцией, генетический материал вируса АЧС не обнаружен.

Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Рис.2 - Результаты проведения ПЦР с электрофоретической детекцией для выявления ДНК вируса АЧС в пробах сосисок приобретенных в торговых сетях На рисунке представлены результаты ПЦР с электрофоретической детецкией. 1-й трек - №1 Краснодарский край; 2-й трек - №2 Тверская область; 3-й трек - №3 Белгородская область; 4-й трек - №4 Псковская область; 5-й трек – №5 г. Ярославль; 6-й трек - №6 Московская область; 7-й трек - №7 Московская область; 8-й трек - №8 Московская область; 9-й трек Ленинградская область; 10-й трек - №10 г. Владимир; 11-й трек – Отрицательный контроль выделения; 12-й трек – Положительный контроль выделения; 13-й трек – Отрицательный контроль; 14-й трек – Положительный контроль.

Исходя из полученных результатов, можно уверенно сказать, что исследуемые пробы сосисок, приобретенных в торговых сетях Московской и Владимирской областях, не имеют в своем составе генетической информации вируса Африканской чумы свиней. Это все говорит о том, что новой вспышки инфекции в данном районе не предвидится.

1.Сюрин, В.Н. Африканская чума свиней // Лабораторная диагностика вирусных болезней животных. - М.: Колос, 1972. - 416 с.

2. Электронный ресурс http://ru.wikipedia.org 3.Газаев, И. Х. Совершенствование методов индикации генома вируса африканской чумы свиней в объектах ветеринарного надзора /И. Х. Газаев.

– Покров, 2011 – с. 134.

4.Руководство по индикации особо опасных болезней сельскохозяйственных животных в объектах ветеринарного надзора и окружающей среды / Н.А.

Лагуткин, В.Н. Смирнов, В.В. Куриннов, С.Ж. Цыбанов [и др.] / ВНИИВВиМ, РАСХН. - М.: 2000. - 75 с.

5.Африканская чума свиней / И. Болоцкий, А. Васильев, В. Семенцов, С.

Пруцаков // Свиноферма. - 2009. № 9. - С. 43-46.

6.Sanchez-Botija, C. Laboratory manual for diagnosis on african swine fever / C.

Sanchez-Botija, A. Ordas. - Madrid, 1977. - P. 133-136.

Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии

STUDY OF PORK SAUSAGES PCR FOR AVAILABILITY GENOME

AFRICAN SWINE FEVER VIRUS

The work is devoted to the release of the African swine fever virus from pigs sausages sold in Moscow and Vladimir regions. Monitoring of African swine fever virus in processed pork. African swine fever - is a very hot topic today.

УДК 619:577.2:637.66:

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПЦР-РВ ПРИ ПРОВЕДЕНИИ

ВЕТЕРИНАРНО-САНИТАРНОЙ ЭКСПЕРТИЗЫ КРОВИ

ЖИВОТНЫХ, ПОДОЗРЕВАЕМЫХ В ЗАРАЖЕНИИ ВИРУСАМИ

СЕРОГРУППЫ ЭГБО

Чавкина Е., 4 курс факультет ветеринарной медицины Научные руководители: к.б.н., доцент Мерчина С.В., ГНУ ВНИИВВиМ РОССЕЛЬХОЗАКАДЕМИИ, г. Покров ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина», г. Ульяновск Работа посвящена выявлению геномов вирусов болезни Ибараки и эпизоотической геморрагической болезни оленей в крови методом ПЦР в режиме реального времени и определение возможности применения данного метода в ветеринарно-санитарной экспертизе.

В последние десятилетия в рамках ограничения распространения экзотических болезней актуальным становится вопрос разработки и оценки возможности применения методов диагностики возбудителей эмерджентных болезней в объектах фитосанитарного и ветеринарного контроля. Кроме того, отслеживание присутствия данных патогенов в составе сырьевого материала позволит более точно установить эпидемические очаги инфекций.Одним из таких методов, позволивших генетикам и молекулярным биологам сделать сразу несколько огромных шагов вперед, безусловно, стало изобретение метода полимеразной цепной реакции.

Полимеразная цепная реакция-это изящный метод, имитирующий естественную репликацию ДНК и позволяющий обнаружить единственную специфическую молекулу ДНК в присутствии миллионов других молекул.

Эпизоотическая геморрагическая болезнь оленей – вирусная трансмиссивная болезнь, характеризующаяся острым течением, сильным угнетением, лихорадкой, резко выраженным геморрагическим синдромом с подкожными отеками и высокой летальностью белохвостых оленей, напоминающее катаральную лихорадку у КРС.

Болезнь Ибараки – остро протекающая вирусная болезнь, характеризующая лихорадкой, затрудненным глотанием, язвенным стоматитом, некрозом мышц языка, пищевода, гортани, глотки и скелетной мускулатуры.

Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии ЭГБО и БИ не передаются при контакте. Сезонные и географические особенности проявления данных болезней предполагают тесную взаимосвязь возникновения эпизоотий с климатическими условиями, и, следовательно, доказывают участие в эпизоотическом процессе артроподного вектора.

Установлено, что в качестве переносчика вирусов ЭГБО и БИ от хозяев к восприимчивым животным выступают кровососущие мокрецы из р.

Culicoides, распространенные в большинстве ландшафтно-географических зон.

Вирусы ЭГБО и БИ принадлежат к семейству Reoviridae рода Orbivirus и по большинству морфологических и структурных характеристик сходны с другими представителями рода (вирус блютанга, вирус африканской чумы лошадей).

Вирусные частицы имеют сферическую форму и характеризуются икосаэдрическим типом симметрии. Диаметр вириона составляет 55 (ВБИ) и 62-80 нм (ВЭГБО).

В настоящее время для диагностики вирусов ЭГБО и БИ применяют такие методы, как: 1) выделение вируса на чувствительной лабораторной модели; 2) серологические методы исследования; 3) методы молекулярной биологии.

В качестве лабораторной модели для выделения ВЭГБО и ВБИ используют: 1) культуры клеток (первичные культуры клеток почки телёнка, овцы, хомячка; перевиваемые клеточные культуры BHK-21, HmLu-1, Lклетки – для ВБИ, и перевиваемые культуры клеток ПС, ПСГК, ПЭАК, CV-1, BHK-21, Vero, клеточная линия Aedes albopictus – для ВЭГБО); 2) куриные эмбрионы; 3) лабораторных животных (мыши-сосуны, а для ВБИ также телята) [Сюрин, В.Н., 1998а; Сюрин, В.Н., 1998б; Чичикин, А.Ю., 2002;

Omori, T., 1970; Park, B.K., 1994; Gard, G.P., 1988].

Из серологических методов диагностики ВЭГБО и ВБИ наиболее известны реакция нейтрализации, различные варианты иммуноферментного анализа (ИФА), реакция связывания комплемента (РСК), непрямой метод флуоресцирующих антител (МФА), иммунодиффузия в агарозном геле.

В последние годы для детекции геномов вирусов стала широко применяться полимеразная цепная реакция, отличающаяся экспрессностью, высокой специфичностью и чувствительностью, широким диапазоном исследуемых проб. Для диагностики вирусов серогруппы ЭГБО разработаны различные варианты ПЦР, позволяющие идентифицировать геномы ВЭГБО и ВБИ, а также проводить серотиповую дифференциацию внутри данных серогрупп.

Для выделения РНК использовали 2 метода: метод нуклеосорбции и фенольно-детергентный метод. К преимуществам метода нуклеосорбции относятся экспресность и простота постановки реакции выделения НК, тогда как фенольно-детергентный метод обеспечивает больший выход суммарной НК и поэтому его применяют при низких титрах вируса в исследуемом образце.

Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Реакционная смесь для проведения ПЦР-РВ для выявления РНК ВБИ общим объёмом 25 мкл содержала: 5 мкл буфера для Taq-полимеразы 5кратной концентрации, 0,5 мкл 25 мМ MgCl2, 0,2 мкл 25мМ дезоксирибонуклеозидтрифосфатов, 0,2 мкл Taq-полимеразы (20 ед/мкл), по 10 пМ каждого праймера, 3 пМ флуоресцентного зонда, 8 мкл воды и 9 мкл кДНК-матрицы. ПЦР-РВ проводили при следующем температурном режиме:

1) 5 мин предварительной денатурации кДНК при 94 0С; 2) 5 циклов реакции (денатурация при 940С – 15 сек, отжиг праймеров при 62 0С – 15 сек, элонгация при 720С – 15 сек); 3) 35 циклов реакции с детекцией по каналу Yellow на стадии отжига праймеров (денатурация при 94 0С – 15 сек, отжиг праймеров при 620С – 15 сек, элонгация при 720С – 20 сек). Для предотвращения неспецифичного отжига праймеров при комнатной температуре до начала ПЦР-РВ реакционную смесь и кДНК-матрицу разделяли барьером, в качестве которого служил предварительно расплавленный воск (15 мкл).

Постановку ПЦР-РВ для выявления генома ВЭГБО также осуществляли по технологии «горячего старта». Реакционная смесь содержала те же компоненты в соотношении: 5 мкл буфера для Taqполимеразы 5-кратной концентрации, 1,0 мкл 25 мМ MgCl2, 0,4 мкл 25мМ дезоксирибонуклеозидтрифосфатов, 0,2 мкл Taq-полимеразы (20 ед/мкл), по 15 пМ праймеров, фланкирующих участок генома ВБИ и 4 пМ соответствующего им флуоресцентного зонда, по 5 пМ праймеров и 7 пМ флуоресцентного зонда, комплементарных фрагменту генома ВЭГБО, 7,3 мкл воды и 6 мкл кДНК-матрицы. Детекцию флуоресценции осуществляли по каналу Green при следующем температурном режиме: 1) 5 мин предварительной денатурации кДНК при 940С; 2) 5 циклов реакции (денатурация при 940С – 15 сек, отжиг праймеров при 64 0С – 15 сек, элонгация при 720С – 15 сек); 3) 35 циклов реакции с детекцией на стадии отжига праймеров (денатурация при 940С – 15 сек, отжиг праймеров при 640С – 15 сек, элонгация при 720С – 20 сек).

Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии ПЦР-РВ проводили в термоциклере «Rotorgene 6000» (Corbett Research, курсив Австралия), используя пробирки ёмкостью 0,2 см3.

Учёт результатов реакции осуществляли, анализируя кривые накопления флуоресцентного сигнала для каждой пробы с помощью программного обеспечения прибора.

ВБИ кровь теленка В ходе проведения ПЦР-РВ на возможность выявления ВБИ, в крови Отформатировано: По ширине теленка отобранные на 2, 4, 7, 9, 11, 14, 16, 18, 21, 25, 28 сутки положительные пробы.

В ходе проведения ПЦР-РВ на возможность выявления ВЭГБО из проб курсив крови отобранных на 5, 12, 15 сутки положительные пробы.ский 1.1. Инфекционная патология животных. Том 1.А.Я. Самуйленко, Б.В. Отформатировано: Отступ: Слева:

Соловьева, Е.А.Непоклонова, Е.С. Воронина. Москва, ИКЦ. Академкнига 2006.

Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии 2.2. Detection of a novel reassortant epizootic hemorrhagic disease virus (EHDV) in the USA containing RNA segments derived from both exotic ( EHDV-6) and endemic (EHDV-2) serotypes /AllisonA.B.[etal]//JournalofGeneralVirology.N91-P.430-439.

3.3. Архипов Н.И., Анатенко В.М., Акулов А.В. Патологоанатомическая диагностика болезней КРС.-М.:Агропромиздат, 1987- с.180.

USING RT-PCR FOR VETERINARY-SANITARY EXAMINATION OF

THE BLOOD OF ANIMALS SUSPECTED OF BEING INFECTED WITH

VIRUSES SEROGROUP EGBO

Chavkina E., Merchina S.V., Aronova E.V.

The work is devoted to revealing the genomes of viruses Ibaraki disease and epizootic hemorrhagic disease of deer in the blood by PCR in real time and determine the possibility of using this method in the animal health expertise.

УДК 619:577.2:637.56:

ПЦР ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ГЕРПЕСВИРУСА СИБИРСКОГО

ОСЕТРА

Абушаев Р., 4 курс факультет ветеринарной медицины Научные руководители: – к.б.н., ст.н.с. Каолаобеков И.М., ГНУ ВНИИВВиМ РОССЕЛЬХОЗАКАДЕМИИ, г. Покров ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина», г. Ульяновск Использование ПЦР для выявления ДНК вирусагерпеса сибирского осетра.

Рыбное хозяйство — важная отрасль народного хозяйства, обеспечивающая производство продуктов питания, отличающихся высокими биологическими и вкусовыми свойствами и являющихся существенным источником белка. В мясном балансе рыбная продукция составляет 25%, ее используют во многих отраслях народного хозяйства. Кроме пищевой продукции, рыбная отрасль дает сырье для медицинской промышленности (жир, витамины, лекарственные препараты), корма (муку, рыбный фарш и др.), удобрения, кожу, меха, амбру и др.

Производство пищевой рыбной продукции имеет высокую экономическую эффективность. Так, по данным П.В. Микитюка с соавт.

(1989), 7т рыбы по содержанию белка эквивалентно стаду в 40 голов крупного рогатого скота. Затраты на производство 1кг белка рыбных продуктов почти в 3 раза ниже затрат, связанных с получением 1кг белка мясных продуктов.

Среди задач рационального использования сырья основными являются такие, как предупреждение порчи, сохранение качества и обеспечение Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии безопасности продукции. Они включают профилактику болезней человека, возникающих в результате употребления рыбы, обсемененной микрофлорой и пораженной гельминтами, а также санитарный контроль производства и обработки рыбных пищевых продуктов и их доброкачественности. Решают эти задачи в основном специалисты ветеринарно-санитарной экспертизы.

Под показателем доброкачественности понимают отсутствие в продукте процессов порчи (гниение, окисление, прогоркание, осаливание, плесневение), а показатель безвредности свидетельствует об отсутствии в продукте бактериологических, химических и механических контаминантов (патогенных микробов, грибов, гельминтов, ядов, радионуклидов и др.). Для рыбы и рыбопродуктов понятие санитарной и ветеринарной безупречности, слагающееся из доброкачественности и безвредности продукта, равнозначно определению ветеринарно-санитарной оценки продукта.

Промышленному выращиванию промысловых рыб уделяется возрастающее внимание во всем мире. Это обусловлено, с одной стороны, угрозой исчезновения ценных видов осетровых рыб, а с другой, значительным увеличением спроса на деликатесную продукцию - икру и мясо осетровых.

Вместе с тем опыт показывает, что интенсификация аквакультуры сопряжена с появлением ряда негативных факторов, одним из главных среди которых являются болезни объектов разведения. Как и в аквакультуре в целом, основной ущерб осетроводству наносят вирусные болезни. Первые работы по изучению вирусных болезней осетровых рыб были выполнены в США Р. Хедриком в середине 80-х годов прошлого столетия, в лаборатории которого получены первые линии клеток белого осетра и впервые выделены вирусы осетровых рыб. На сегодня у североамериканских видов осетровых обнаружено 10 разных вирусов, наиболее опасными из которых являются:

аденовирус, иридовирус и два герпесвируса белого осетра. Эти вирусы вызывают болезни у мальков и сеголетков белого осетра, которые обычно развиваются весной или в начале лета, реже - осенью. Осетроводство в России в последние годы становится одной из наиболее перспективных отраслей аквакультуры. В результате обследований культивируемых осетровых рыб вирусных агентов до последнего времени обнаружено не было. Весной 2006 г. на племенном рыбоводном предприятии - Конаковском заводе товарного осетроводства (КЗТО, Тверская обл.) наблюдали массовую гибель сеголетков сибирского осетра, Acipenserbaeri, которая в отдельных партиях доходила до 100%. Аналогичные вспышки болезни регистрировали позднее в других осетровых хозяйствах.

Исключение паразитов и бактерий как возможных возбудителей указывало на необходимость проведения исследований по установлению роли вирусов в этиологии этой болезни.

Для исследования у осетра отбирали пробы сердце, печень, почки, ротовой аппарат, жабры, мышечная ткань у хвоста и верхние плавники.

Для выделения ДНК использовали 0.2мл материала.

Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Образцы мышечной ткани у хвоста, ротовой аппарат, жабры, верхние плавники, внутренних органов (сердце, печень, почки,) отбирали стерильными инструментами по (20-30г) в стерильные пробирки и подписывали маркером.

Во избежание перекрестной контаминации до начала работы мы промаркировали чистые пробирки объемом 1.5мл и к 100мкл образца добавляли 500мкл лизирующего раствора, перемешивали на смесителе типа «Vortex». Далее инкубировали в термостате 5мин при температуре - 64°С и центрифугировали в настольной микроцентрифуге типа «Eppendorf» в течение 30сек при 6000об/мин на микроцентрифуге. Затем добавили ресенсуспендированного сорбент 30 мкл и перемешали на вортексе. После этого инкубировали 5 мин при температуре 64°С и центрифугировали в течение 30сек при 6000об/мин для осаждения на дно сорбента, после чего удаляли надосадочную жидкость с помощью вакуумного отсасывателя с отдельными для каждого наконечниками. Далее к осадку добавляли 500мкл 2раствор и тщательно взбивали на вортексе. После 30сек центрифугировали при 13000об/мин тем самым осаждали сорбент и удаляли надосадочную жидкость. Затем добавляли 500мкл 3 раствор и тщательно взбивали на вортексе и центрифугировали при 13000об/мин 30сек. Затем инкубировали 5мин при температуре - 64°С. Удаляли надосадочную жидкость и сушили образцы в термостате 3мин при 64°С. После чего в пробирки добавляли по мкл ТЕ-буфера ДНК буфера для элюции, тщательно перемешивали на вортексе и инкубировали в течение 5мин при 64°С. Затем осаждали центрифугированием и надосадочную жидкость использовали для проведения ПЦР в режиме реального времени. Элюент использовали для проведения ПЦР в режиме реального времени.

Постановка ПЦР в режиме реального времени. В отдельной пробирке готовили общую реакционную смесь на необходимое количество образцов, в число которых входили положительный и отрицательный контроли.

Реактивы вносили в последовательности. В последнюю очередь добавляли фермент. Смесь перемешивали и разливали по 20 мкл в предварительно промаркированные пробирки для ПЦР. В соответствующие пробирки вносили по 5мкл нуклеиновой кислоты.

Результаты амплификации учитывали путем анализа кривых флуоресценции (рис.1) по соответствующему каналу. При идентификации генома герпесвируса флуоресценцию измеряли по каналу Оrange (ROX).

Результаты интерпретировали на основании наличия (или отсутствия) пересечения кривой флуоресценции с установленной на соответствующем уровне пороговой линии (treshhold), что соответствует наличию (или отсутствию) значения порогового цикла «Ct» в соответствующей графе в таблице результатов. Результат учитывали только в случае прохождения положительных и отрицательных контролей амплификации и отрицательного контроля выделения нуклеиновых кислот.

Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Таблица 1 - Результаты ПЦР в режиме «реального времени».

Таблица 1. Результаты ПЦР в режиме «реального времени».

Образец считали положительным на наличие генома герпесвируса сибирского осетра, если значение «Ct» по каналу Оrange (ROX) составляло менее 35. Образец считали отрицательным, если по каналу Оrange значение «Сt» для него отсутствовало.

С применением вышеописанного метода ПЦР в режиме реального времени ДНК герпесвируса сибирского осетра была выявлена в почках, печени, сердце, жабрах (табл.1).

Анализ ПЦР-продуктов осуществляли при помощи электрофореза в 2, % агарозном геле, для приготовления которого смешали 1 г агарозы и 50 мл Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии 1х ТВЕ буфера. Смесь помещали в микроволновую печь и доводили до кипения. Далее, в смесь добавили 10 µl бромистогоэтидия и тщательно перемешали. Гель разливали в форму и установили гребенки (рисунок 12). В образовавшиеся в застывшем геле лунки вносили по 10 µl ПЦР - продукта, в последнюю лунку ряда вносили 5 µl маркера молекулярной массы («Fermentas», Латвия).

Электрофорез проводили при напряжении 120 В/см длины геля в течении 1 часа длиной волны 254 нм. Амплифицированные фрагменты ДНК появлялись в виде светящихся оранжевых полос в треках с исследуемыми образцами относительно фрагмента в пробе положительного контроля. С помощью маркера молекулярной массы определяли Результаты электрофореза учитывали на трансиллюминаторе в ультрафиолетовом свете с размеры исследуемых фрагментов ДНК. Для сохранения результатов реакции использовали трансиллюминатор (рис.2.).

Для анализа первичной последовательности амплифицируемых ПЦРпродуктов использовали метод нуклеотидного секвенирования. ПЦРпродукты очищали с помощью набора QIAquick PCR PurificationKit (250) (QIAGEN, Германия) согласно инструкции производителя. Нуклеотидное секвенирование env-гена герпесвируса проводили с использованием специфических праймеров. Определение состава фрагментов проводили на приборе Applied Biosystem Genetic Analyser 3130 XL (СШA) с набором компонентов BigDyeTerminatorkit 3.1 (AppliedBiosystem, СШA). Полученные последовательности сравнивали с опубликованными последовательностями env-генов, представленными в базе данных GenBank при помощи программы Blast.

В результате проведенного нами нуклеотидного секвенирования, установленный состав нуклеотидных последовательностей участков гена полимеразы размером 600 п.о. подтвердил наличие герпесвируса сибирского осетра в исследуемых пробах осетра.

Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии В результате проведения ПЦР с электрофоретической детекцией нами выявлены 4 положительные пробы: №6 №7 №8 №9 В результате ПЦР в режиме реального времени было выявлено 4положительных пробы: № 6, №7,№8,№9.Таким образом, в результате проведенных исследований с применением Полимеразной цепной реакции можно заключить, что все проб сибирского осетра, полученные их в Московской области г.ОреховоЗуево, контаминированныгерпесвирусом.

В настоящее время нет доказательств заражения и клинических проявлений заболевания у людей. Поэтому ветеринарно - санитарная оценка при данной инфекции не разработана. Считаем необходимым работникам здравоохранения обратить особое внимание на указанное заболевание, так как возможность заражения человека герпесвирусом не исключена.

Образец считали положительным на наличие генома герпесвируса сибирского осетра, если значение «Ct» по каналу Оrange (ROX) составляло менее 35. Образец считали отрицательным, если по каналу Оrange значение «Сt» для него отсутствовало.

1. 1.Микитюк П.В., Житенко П.В.. Осетров В.С. Ветеринарно-санитарная Отформатировано: Отступ: Слева:

экспертиза пресноводной рыбы. Справочник. / П.В Микитюк, П.В.

Житенко, В.С.Осетров/ М.:Агропромиздат. – 1989.- С.207. Отформатировано: английский 2. 2.Gil A., Rola M., Kuzmak J. Application of PCR Technigue in diagnosis of small ruminant lentivirus infection in sheep and goats// Pol.J.Vet.Sci. – 2006. – Vol. 9, N.4.- P. 213-217.

3. 3.Gjerset, B, Genetic diversity of small-ruminant lentiviruses characterization of Norwegian isolates of carpine arthritis encephalitic virus//Virology. – 2006. Vol. 87. – P.213-

PCR DIAGNOSTIC HERPESVIRUS SIBERIAN STURGEON

Abushaev R, Kаolаobekov I.M., Molofeeva N.

The use of PCR for detection of DNA virusa gerpesa Siberian sturgeon.

УДК 579.843.95-036.21:576.

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ЧУМЫ

Балаш Д., Сибгатуллова А., 2 курс факультет ветеринарной медицины Научные руководители: – Л.П. Пульчеровская, к.б.н., доцент Пульчеровская ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина», г. Ульяновск, д.б.н., Отформатировано: Узор: Нет Лабораторные исследования – это ценная информация, без которой невозможно поставить точный диагноз и назначить правильное лечение.

Назначая повторные анализы, врач может контролировать эффективность проводимой терапии и изменения состояния животного. Особенно это важно, Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии когда речь идет о таком заболевании как чума. Ведь при запоздалой, а тем более - ошибочной диагностике летальность резко возрастает.

Схема лабораторной диагностики антропозоонозной чумы представлена на рисунке 1.

Рис. 1 -. Схема лабораторной диагностики антропозоонозной чумы Отформатировано: Шрифт: 12 пт, Лабораторная диагностика чумы состоит из следующих этапов: Отступ: Первая строка: 0 см 1. Забор материала и микроскопическое исследование 2. Бактериологическое исследование 3. Биологическая проба 4. Ускоренные методы бактериологического исследования 5. Серологические реакции 1. Чума является чрезвычайно контагиозной, поэтому взятие материала от больного (особенно легочной формы) производится с соблюдением мер предосторожности. Работа в очаге проводится в полном противочумном костюме.

В лабораторию могут быть доставлены следующие материалы:

• содержимое бубона (легочная форма чумы);

• отделяемые язвы или пунктет из карбункула (кожная форма чумы);

• материал из зева, взятый тампоном, и мокрота (легочная форма чумы);

• секционный материал (кусочки органов трупа, кровь);

• живые грызуны;

• трупы грызунов;

• блохи грызунов;

Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии • пищевые продукты.

Материал необходимо брать до назначения лечения. Значение микробиологического диагноза огромно, особенно для выявления первых случаев чумы. Предварительный диагноз устанавливают на основании микроскопического исследования материала, окончательный — на основании выделения и идентификации культуры.

Микроскопическое исследование: мазки фиксируют погружением полностью в жидкость Инпифорова на 20 мин. Окраска по Граму обязательна во всех случаях. Одновременно окрашивают мазок метиленовым синим Леффлера, так как этот метод лучше выявляет биполярность.

2. Бактериологическое исследование: посевы исследуемого материала производят на агар добавлением стимуляторов роста (кровь, сульфит натрия).

При исследовании материала, обильно загрязненного посторонней микрофлорой (загнившие трупы, мокрота), к агару добавляют генциановый фиолетовый 1:100 000. В случаях подозрения на наличие бактериофага посевы обрабатывают антифаговой сывороткой. Инкубацию посевов проводят при 28 °С. В положительных случаях через 12 ч появляются колонии в виде характерных "кружевных платочков". Когда чистая культура выделена путем прямого посева, она подлежит идентификации на основании следующих данных.

• внешний вид колонии на агаре;

• характерный рост на бульоне;

• типичная морфология микробов в мазках и отрицательная окраска по Граму;

• типичная патологоанатомическая у лабораторных животных при заражении их чистой культурой;

• агглютинация со специфической сывороткой;

• отношение к специфическому бактериофагу. Исследование ферментативных свойств, подвижности и т. п. производят лишь в специальных случаях для дифференциального диагноза с родственными видами бактерий. Проба с фагом осуществляется на твердых средах путем нанесения капли фага на свежий посев культуры и на жидких — путем добавления в бульонную культуру фага в количестве 1/10 объема культуры.

Окончательное заключение делают на основании изучения комплекса признаков исследуемой культуры. При этом не следует забывать о явлении изменчивости.

3. Биологическая проба обязательна при исследовании; наиболее чувствительными из лабораторных животных являются морские свинки и белые мыши. Для постановки биологической пробы животных заражают внутрибрюшинно, подкожно или внутрикожно, а в случае загрязнения материала посторонней микрофлорой — втиранием в скарифицированную кожу.

В зависимости от способа заражения и степени чувствительности к возбудителю животные погибают от чумы на 3—9-й день после Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии инфицирования, изменения во внутренних органах в виде геморрагического воспаления, кровоизлияния: в мазках-отпечатках из органов — множество чумных микроорганизмов; посевы инфицированных органов и крови дают обильный рост возбудителя.

4. Ускоренные методы бактериологического исследования. Метод ускоренного обнаружения возбудителя чумы с помощью бактериофага, внесенного в исследуемый материал, используют для исследования объектов, имеющих основное практическое значение: материал от больного, от трупа, из внешней среды. Исследуемый материал наносят на 3 агаровые пластины с гемолизированной кровью и генциановым фиолетовым. На первой и второй агаровой пластине в исследуемый материал сразу же вносят чумной бактериофаг (разведенный в 10 раз). На третью чашку бактериофаг не добавляют (контроль). Результаты начинают читать через 2,5—3 ч после помещения их в термостат. При наличии значительного количества микробов чумы в исследуемом материале уже через 2 ч на фоне начального роста чумного микроба видны мелкие палочки бактериофага. Метод ускоренной диагностики чумы основан на свойстве чумного бактериофага быстро (30— 40 мин) размножаться в присутствии микроба чумы.

Большого внимания заслуживает люминесцентно-серологический метод, с помощью которого можно обнаружить возбудитель чумы в воздухе, воде, пищевых продуктах. Реакция нарастания титра фага (в качестве индикаторного фага предложен чумной бактериофаг, выпускаемый институтом "Микроб" в качестве эталонной культуры). Применение реакции нарастания титра фага для индикации чумных микробов основано на экспериментальном исследовании; пользуясь реакцией нарастания титра фага, за 3—3,5 ч удается обнаружить 1 млн палочек чумы.

В качестве исследуемого материала могут быть использованы вода, кровь, отпечатки из органов, выделения из бубона. Материал сначала подращивают на средах, затем прибавляют генциан фиолетовый (1 мл 0,1%ный водно-спиртовой раствор на 100 мл среды) для подавления посторонней микрофлоры, а затем добавляют в пробирки разные концентрации фага.

5. Серологические реакции в практике нашли широкое применение.

Они используются при подозрительных на чуму заболеваниях для ретроспективного диагноза, при обследованиях природных источников чумы. С этой целью применяют иммуноферментную агглютинацию, реакцию пассивной гемагглютинации, реакции непрямой агглютинации. Экспрессметодом является люминесцентно-серологический, позволяющий обнаружить возбудителя в исследуемом материале через 2 ч.

1.Б. Б. Жуков Царица грозная чума/ Б. Б. Жуков Ж. «Вокруг Света» Отформатировано: Отступ: Слева:

№7 (2814) 2. 2.www.vprojects.ru 3. 3.http://www.funeralportal.ru 4. 4.http://medkarta.com Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии

LABORATORY DIAGNOSIS OF PLAGUE

Balas, D., A. Sibgatullova A., LP Pulcherovskaya L.P., D.A.Vasilev D.A.

Laboratory studies - this is valuable information, without which it is (США) impossible to make an accurate diagnosis and appropriate treatment. Appointing Отформатировано: английский retested, the doctor can monitor the effectiveness of the therapy and the changes of the animal. This is especially important when it comes to this disease like the plague. After all, if belated, and even more - misdiagnosis of mortality increases dramatically.

УДК 641.563:

РАЗРАБОТКА ПЦР-ТЕСТ СИСТЕМЫ, ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ДЛЯ

ДИАГНОСТИКИ ПРИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

Научный руководитель: – д.т.н., профессор Просеков А.Ю.

, доктор технических наук, профессор, ФГБОУ ВПО «Кемеровский ТИППтехнологический институт пищевой промышленности», г. Кемерово Работа посвящена разработке ПЦР-тест-системы для количественного определения патогенных прионных белков – возбудителей прионных болезней. Учитывая универсальность и высокую чувствительность, настоящая тест-система имеет потенциал для быстрого и надежного обнаружения агентов, вызывающих передающиеся губчатые энцефалопатии.

Трансмиссивные губчатые энцефалопатии (ТГЭ), или прионные болезни, - особый класс смертельных заболеваний человека и животных, возбудителем которых является прион - безнуклеиновый низкомолекулярный белок, устойчивый к инактивирующим воздействиям. Данные болезни имеют длительные инкубационные периоды, но быстро прогрессируют с момента клинического начала заболевания [1].

Начало заболевания наступает, как правило, в среднем или позднем возрасте.. Заражение человека прионными заболеваниями чаще всего происходит при употреблении в пищу мясопродуктов, полученных от зараженных животных, либо при нейрохирургических вмешательствах, трансплантации тканей, назначении гормонов, полученных от зараженных доноров с нераспознанной прионной инфекцией, использование для полива овощей и фруктов зараженных сточных вод [2].

Ключевой характеристикой прионных заболеваний является образование белка патогенной формы (PrPSc), представляющего собой посттрансляционно модифицированную изоформу нормального прионного белка, (PrPC). Конверсия РrРC в РrРSc сопровождается глубоким конформационным изменением, лежащим в основе размножения инфекционных прионов. Накопление прионов сопровождается их агрегацией, образованием высокоупорядоченных фибрилл, что приводит к гибели клетки [1].

Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии Таким образом, большое значение приобретает организация контроля учета случаев возникновения заболевания и методы диагностики прионных болезней, позволяющие осуществлять мониторинг эпизоотической ситуации среди населения и популяций крупного рогатого скота. Необходима разработка принципиально нового высокочувствительного метода идентификации патогенной формы прионного белка, позволяющего значительно расширить количество объектов исследования и их характер.

Таким методом может быть разработка тест-системы на основе полимеразной цепной реакции (ПЦР). Увеличение продуктов амплификации до концентрации, необходимой для идентификации патогенной формы прионного белка позволит расширить наименование образцов, пригодных для исследования. При этом методе исключается возможность неточности в результатах за счет перекрестной контаминации.

Присущая ПЦР высокая специфичность анализа обусловлена использованием для её проведения уникального фрагмента генома возбудителя инфекционного заболевания (а именно - гена PRNP), не встречающегося у других организмов.

ПЦР-тест-система представлена в виде готовых пробирок с реакционной смесью, в которые только требуется внести образец исследуемого ДНК. Данная ПЦР-тест-система позволяет произвести как качественный, так и количественный анализ содержания инфекционного прионного белка. Отличительными особенностями системы является быстрота выделения ДНК и наличие специально подобранных высокоспецефичных и уникальных праймеров. Методика изготовления ПЦРтест-системы представлена на рисунке 1.

Анализ нуклеотидных последовательностей ДНК, кодирующих синтез гена Филогенетический и сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей гена нормального и патогенного прионного белка крупного рогатого скота Конструирование универсальных праймеров для амплификации гена PRNP Подбор и синтез универсальных праймеров для амплификации гена PRNP Оптимизация параметров реакции амплификации Программа амплификации: 95°С – 1 мин – 1 цикл, 95°С – 0,5 мин – 30 циклов, Отформатировано: Шрифт: 12 пт, 56°С – 1 мин – 30 циклов, 72°С – 0,5 мин – 30 циклов, 72°С – 10 мин – 1 цикл Отформатировано: Шрифт: 12 пт, Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии ПЦР-тест-система разработана для прижизненной идентификации заболеваний у животных в ветеринарии, контроля качества сырья животного происхождения.

1. 1.Шкундина, И.С. Прионы / И.С. Шкундина, М.Д. Тер-Авенисян // Успехи Отформатировано: Отступ: Слева:

2. 2.Зуев, В.А. Прионные болезни человека и животных: Руководство для врачей. / В.А. Зуев, И.А. Завалишин, В.М. Ройхель.– М.: Медицина, 1999.

DEVELOPMENT METHOD OF PREPARATION THE PCR TEST

SYSTEM FOR DIAGNOSIS OF PRION DISEASES

The study is devoted to the development and preparation the PCR test system for identification of the infectious prion protein - agents of prion diseases.

Considering that the universalism and high sensitivity of test system it can be used for detection agents that cause transmissible spongiform encephalopathies.

Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии

СОДЕРЖАНИЕ

ПРОБЛЕМЫ ЭПИЗООТОЛОГИИ И ЭПИДЕМИОЛОГИИ

Пономаренко А. Динамика распространения африканской чумы Щербина А. Токсины бактерий как биологическое оружее Балаш Д., Сибгатуллова А. Чума в средние века Литонова Д. Эпизоотическое состояние по бешенству в

ЭКСПЕРТИЗА ПИЩЕВОГО СЫРЬЯ И ПРОДУКТОВ ПИТАНИЯ

Шурыгина А. Безопасность лапши быстрого приготовления для Кудряшова К. Биоповреждение меховых изделий при различных Карцева Е. Биоповреждения и защита косметических товаров Кулагина С. Идентификация лактобактерий в молочно-кислых продуктах при помощи от-пцр с форетической детекцией и Карцева Е., Карамышева Е. Исследование свойств и классификационных признаков готовых пищевых продуктов из Егорова Е. История конфет Кудряшова К. Картофельная болезнь хлеба и способы ее 11.

Панферова А., Сорокина Е. Мониторинг блютанга для 12.

обеспечения продовольственной безопасности в РФ Абдурахманов И. Проблема фальсификации минеральной воды и 13.

Садртдинова Г. Санитарно-микробиологическая экспертиза 14.

мясных консервов, реализуемых в ЗАО «Тандер- ММ Тереньга» Долгов Н., Сосина Ю. Таможенная экспертиза мяса Карпова Ю., Чатанова А., Абдурахманов И. Фальсификация 16.

Абдурахманов И., Чатанова А., Карпова Ю. Фальсификация 17.

Куценкова В., Грошева В.Н. Потребительские свойства 18.

кислородного коктейля на основе белково-углеводного сырья

ДИАГНОСТИКА, ЛЕЧЕНИЕ И ПРОФИЛАКТИКА ИНФЕКЦИОННЫХ

БОЛЕЗНЕЙ ЖИВОТНЫХ И ЛЮДЕЙ

19. Нургатина Л., Карпова Н. Вирусный гепатит C (HCV).

20. Аннина А. Исследование сосисок из свинины методом ПЦР на наличие генома вируса африканской чумы свиней 21. Чавкина Е. Использование ПЦР-РВ при проведении ветеринарно- Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии санитарной экспертизы крови животных, подозреваемых в заражении вирусами серогруппы ЭГБО 22. Абушаев Р. ПЦР для диагностики герпесвируса сибирского 23. Балаш Д., Сибгатуллова А. Лабораторная диагностика чумы 24. Драгунова Е.Е. Разработка пцр-тест системы, используемой для Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии

АКТУАЛЬНЫЕ ПРОБЛЕМЫ ИНФЕКЦИОННОЙ

ПАТОЛОГИИ И БИОТЕХНОЛОГИИ

Материалы VI-й Международной студенческой научной конференции, посвящённой 70-летию ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина»

Адрес издателя: 432980, г. Ульяновск, ул. Карла Марска, «Копи-компани»

Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии

ДЛЯ ЗАМЕТОК



Pages:     | 1 | 2 ||
Похожие работы:

«Международная научно-практическая конференция МЕДИЦИНСКИЕ НАУКИ: ПРОШЛОЕ, НАСТОЯЩЕЕ И БУДУЩЕЕ 26 МАЯ 2014Г. Г. УФА, РФ ИНФОРМАЦИЯ О КОНФЕРЕНЦИИ ОСНОВНЫЕ НАПРАВЛЕНИЯ КОНФЕРЕНЦИИ Цель конференции: поиск решений по актуальным проблемам современной наук и и Клиническая медицина. 1. распространение научных теоретических и практических знаний среди ученых, преподавателей, Профилактическая медицина. 2. студентов, аспирантов, докторантов и заинтересованных лиц. Медико-биологические науки. 3. Форма...»

«Российская Академия Наук Институт географии РАН Геологический институт РАН Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова Палинологическая комиссия России Комиссия по эволюционной географии Международного географического Союза Палинологическая школа-конференция с международным участием МЕТОДЫ ПАЛЕОЭКОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ (Москва, 16-19 апреля 2014) Тезисы докладов International Palynological Summer School METHODS OF PALAEOENVIRONMENTAL RESEARCHES (Moscow, April, 16-19, 2014) Book...»

«алтайский государственный университет Ботанический институт им. в.л. комарова ран Центральный сиБирский Ботанический сад со ран алтайское отделение русского Ботанического оБЩества Проблемы ботаники Южной сибири и монголии Сборник научных статей по материалам Деcятой международной научно-практической конференции (Барнаул, 24–27 октября 2011 г.) Барнаул – 2011 уДК 58 П 78 Проблемы ботаники Южной сибири и монголии: сборник научных статей по материалам X международной научно-практической...»

«В.К. Шитиков, Г.С. Розенберг ОЦЕНКА БИОРАЗНООБРАЗИЯ: ПОПЫТКА ФОРМАЛЬНОГО ОБОБЩЕНИЯ 1. Общий подход к оценке биологического разнообразия 1.1. Развитие концепций и определение основных понятий Понятие биологическое разнообразие за сравнительно короткий отрезок времени получило расширенное многоуровневое толкование. Собственно его биологический смысл раскрывается через представления о внутривидовом, видовом и надвидовом (ценотическом) разнообразии жизни. Однако, в добавление к этому, сначала...»

«Институт биологии Коми НЦ УрО РАН РЕГИСТРАЦИОННАЯ ФОРМА КЛЮЧЕВЫЕ ДАТЫ Коми отделение РБО Заявка на участие и тезисы докладов в электронном виде 1.02.2013 Министерство природных ресурсов и охраны Фамилия Второе информационное письмо 1.03.2013 окружающей среды Республики Коми Оплата оргвзноса 15.04.2013 Имя Управление Росприроднадзора по Республике Коми Регистрация участников Отчество и открытие конференции 3.06. ФИО соавтора (соавторов) Представление материалов БИОРАЗНООБРАЗИЕ ЭКОСИСТЕМ для...»

«В защиту наук и Бюллетень № 8 67 Королва Н.Е. Ботаническую науку – под патронаж РПЦ? (по поводу статьи члена-корреспондента РАН, д.б.н. В.К. Жирова Человек и биологическое разнообразие: православный взгляд на проблему взаимоотношений)119 1. Проблема Проблемы взаимодействия власти и религии, науки и религии, образования и религии требуют современного переосмысления и анализа. Возможен ли синтез научного и религиозного знания, и не вредит ли он науке и научной деятельности, и собственно,...»

«Материалы международной научно-практической конференции (СтГАУ,21.11.2012-29.01.2013 г.) 75 УДК 619:616.995.1:136.597 КОНСТРУИРОВАНИЕ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ И ИНДИКАЦИИ БАКТЕРИЙ РОДА AEROMONAS Н.Г. КУКЛИНА, И.Г. ГОРШКОВ, Д.А. ВИКТОРОВ, Д.А. ВАСИЛЬЕВ Ключевые слова: Aeromonas, выделение, индикация, питательные среды, микробиология, биотехнология, аэромоноз. Авторами публикации сконструированы две новые питательные среды для выделения и идентификации бактерий рода Aeromonas: жидкая...»

«МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ Московская международная научно-практическая конференция ЭКОЛОГИЯ КРУПНЫХ ГОРОДОВ Проводится в рамках Московского международного конгресса Биотехнология: состояние и перспективы развития 15 - 17 марта 2010 March, 15 - 17 Под патронажем Правительства Москвы Sponsored by Moscow Government The Moscow International Scientific and Practical Conference ECOLOGY OF BIG CITIES Held within the framework of Moscow International Congress Biotechnology: State of the Art and Prospects...»

«16.11.2013 (суббота) Регистрация, кофе, плюшки 8:30-9:30 Открытие конференции 9:30-10:30 Проректор по обеспечению реализации образовательных программ и осуществления научной деятельности по направлениям география, геология, геоэкология и почвоведение СПбГУ С.В. Аплонов Декан факультета географии и геоэкологии Н.В. Каледин Зав. кафедры гидрологии суши Г.В. Пряхина ООО НПО Гидротехпроект А.Ю. Виноградов Организационный Комитет Л.С. Лебедева Посвящение Ю.Б. Виноградову 10:30-11:00 Т.А. Виноградова...»

«Институт систематики и экологии животных СО РАН Териологическое общество при РАН Новосибирское отделение паразитологического общества при РАН ВСЕРОССИЙСКАЯ НАУЧНАЯ КОНФЕРЕНЦИЯ АКТУАЛЬНЫЕ ПРОБЛЕМЫ СОВРЕМЕННОЙ ТЕРИОЛОГИИ 18–22 сентября 2012 г., Новосибирск Тезисы докладов Новосибирск 2012 УДК 599 ББК 28.6 А43 Конференция организована при поддержке руководства ИСиЭЖ СО РАН и Российского фонда фундаментальных исследований (грант № 12-04-06078-г) Редакционная коллегия: д.б.н. Ю.Н. Литвинов...»

«Международная экологическая ассоциация хранителей реки Eco-TIRAS Образовательный фонд имени Л.С.Берга Eco-TIRAS International Environmental Association of River Keepers Leo Berg Educational Foundation Академику Л.С. Бергу – 135 лет: Сборник научных статей Academician Leo Berg – 135: Collection of Scientific Articles Eco-TIRAS Бендеры - 2011 Bendery - 2011 CZU[91+57]:929=161.1=111 A 38 Descrierea CIP a Camerei Naionale a Crii Academician Leo Berg – 135 years: Collection of Scientific Articles =...»

«Московский государственный университет им. М.В.Ломоносова Студенческий союз МГУ Биологический факультет ТЕЗИСЫ ДОКЛАДОВ XIII МЕЖДУНАРОДНОЙ КОНФЕРЕНЦИИ СТУДЕНТОВ, АСПИРАНТОВ И МОЛОДЫХ УЧЕНЫХ ЛОМОНОСОВ-2006 12–15 апреля 2006 г. Секция Биология Москва – 2006 УДК 57 Председатель оргкомитета секции Биология Проф. Гостимский С.А. Члены оргкомитета: С.н.с. Ботвинко И.В. Проф. Максимов Г.В. Доц. Медведева М.В. Проф. Соколов Д.Д. Проф. Онищенко Г.Е. С.н.с. Авилова К.В. Ст. преп. Сергеев И.Ю. Доц....»

«Фундаментальная наук а и технологии - перспективные разработки Fundamental science and technology promising developments III Vol. 2 spc Academic CreateSpace 4900 LaCross Road, North Charleston, SC, USA 29406 2014 Материалы III международной научно-практической конференции Фундаментальная наука и технологии перспективные разработки 24-25 апреля 2014 г. North Charleston, USA Том 2 УДК 4+37+51+53+54+55+57+91+61+159.9+316+62+101+330 ББК 72 ISBN: 978-1499363456 В сборнике собраны материалы докладов...»

«CBD Distr. GENERAL КОНВЕНЦИЯ О БИОЛОГИЧЕСКОМ UNEP/CBD/WG-ABS/2/2 16 September 2003 РАЗНООБРАЗИИ RUSSIAN ORIGINAL: ENGLISH СПЕЦИАЛЬНАЯ РАБОЧАЯ ГРУППА ОТКРЫТОГО СОСТАВА ПО ДОСТУПУ К ГЕНЕТИЧЕСКИМ РЕСУРСАМ И СОВМЕСТНОМУ ИСПОЛЬЗОВАНИЮ ВЫГОД Второе совещание Монреаль, 1-5 декабря 2003 года Пункты 3, 4, 5, 6 и 7 предварительной повестки дня* ДАЛЬНЕЙШЕЕ ИЗУЧЕНИЕ НЕУРЕГУЛИРОВАННЫХ ВОПРОСОВ, КАСАЮЩИХСЯ ДОСТУПА К ГЕНЕТИЧЕСКИМ РЕСУРСАМ И СОВМЕСТНОГО ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ВЫГОД: ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ТЕРМИНОВ, ДРУГИЕ...»

«Министтерство о образован и наук Россий ния ки йской Фед дерации Российск академия наук кая к Не еправител льственны эколог ый гический фонд име В.И. В ф ени Вернадско ого Коми иссия Росссийской Федерации по дел ЮНЕ лам ЕСКО Адми инистрация Тамбо овской облласти Ас ссоциация Объеди я иненный универсиитет имен В.И. Ве ни ернадског го Федералльное гос сударствеенное бю юджетное образоваательное учреж ждение выысшего ппрофессиоональног образо го ования Тамбоввский госсударственный теехническ униве...»

«НИИЦМиБ ФГБОУ ВПО Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина Кафедра микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ВСЭ Научно-исследовательский инновационный центр микробиологии и биотехнологии АКТУАЛЬНЫЕ ПРОБЛЕМЫ ИНФЕКЦИОННОЙ ПАТОЛОГИИ И БИОТЕХНОЛОГИИ Материалы VI-й Международной студенческой научной конференции, посвящённой 70-летию ФГБОУ ВПО Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина 14 – 15 мая 2013 года Часть I Ульяновск – 2013 Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии НИИЦМиБ ФГБОУ ВПО...»

«Учреждение образования Брестский государственный университет имени А.С. Пушкина Мониторинг окружающей среды Сборник материалов II Международной научно-практической конференции Брест, 25–27 сентября 2013 года В двух частях Часть 1 Брест БрГУ имени А.С. Пушкина 2013 2 УДК 502/504:547(07) ББК 20.1 М77 Рекомендовано редакционно-издательским советом учреждения образования Брестский государственный университет имени А.С. Пушкина Рецензенты: доктор геолого-минералогических наук, профессор М.А....»

«РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК Чебоксарский филиал учреждения Российской академии наук Главного ботанического сада им. Н.В. Цицина РАН Чувашское отделение Русского ботанического общества РАН Чувашское отделение Териологического общества РАН МИНИСТЕРСТВО ПРИРОДНЫХ РЕСУРСОВ И ЭКОЛОГИИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ФГБУ Государственный природный заповедник Присурский МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Филиал ГОУ ВПО Российский государственный социальный университет, г. Чебоксары...»

«Российская академия наук Институт озероведения РАН Биоиндикация в мониторинге пресноводных экосистем II Bioindication in monitoring of freshwater ecosystems II Издательство Любавич Санкт-Петербург 2011 УДК 504.064.36 Ответственные редакторы: Член-корр. РАН В.А. Румянцев, д.б.н. И.С. Трифонова Редакционная коллегия: д.б.н. И.Н. Андроникова, к.б.н. В.П. Беляков, к.б.н. О.А. Павлова, к.б.н. М.А. Рычкова Биоиндикация в мониторинге пресноводных экосистем II. Сборник материалов международной...»

«Ukraine, Russia, Kazakhstan and Turkmenistan, shows its relationship with the 11-year cycle of solar activity, when it peaks occur during periods of sharp increase or decrease in solar activity near the maximum, and minimum - for periods of low solar activity ( fig.) Among the countries of Eastern and Western Europe is characterized by similar dynamics only for Romania. For other countries the situation is not so clear, it is associated with dominance or high-frequency oscillation periods of...»









 
2014 www.konferenciya.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Конференции, лекции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.